诱导型一氧化氮合酶在早孕小鼠卵巢、输卵管和子宫中的分布

诱导型一氧化氮合酶在早孕小鼠卵巢、输卵管和子宫中的分布

一、妊娠早期小鼠卵巢、输卵管及子宫内诱导型一氧化氮合酶的分布(论文文献综述)

奚婷[1](2021)在《培元补肾安胎方治疗RSA的临床研究及基于内膜衰老的药物机制研究》文中研究说明目的1 探究培元补肾安胎方治疗黄体功能不足(LPD)型复发性流产(RSA)的临床疗效和安全性。2 通过网络药理学和分子对接学探讨培元补肾安胎方治疗RSA的作用机制。3 探究孕酮诱导“种植窗期”子宫内膜急性衰老对胚胎着床的影响。4 以“种植窗期”子宫内膜急性衰老为切入点,探究培元补肾安胎方治疗RSA的分子机制,并对上述网络药理学预测机制进行验证。方法1 采用临床随机对照研究方法,收集脾肾两虚型LPD型RSA患者60例,随机分为两组:治疗组30例和对照组30例。治疗组予培元补肾安胎方和西药地屈孕酮片治疗,对照组予西药地屈孕酮片治疗。观察对比两组患者的一般情况、孕12周妊娠结局、治疗前后中医证候积分、血清E2、P和β-HCG、盆腔B超,及治疗前后肝肾功、血常规等安全性指标。2 采用网络药理学方法对培元补肾安胎方治疗RSA的作用机制进行分析,并运用分子对接学对结果进行初步验证,具体方法如下:通过检索TCM、TCMSP数据库得到培元补肾安胎方的化合物;通过TCMSP、Pubchem、CHEMBL得到化合物对应的靶点;利用Genecards和OMIM数据库收集RSA相关基因;利用R语言得到培元补肾安胎方治疗RSA的潜在靶点;string数据库构建PPI网络图;应用clusterProfiler包对共同靶点完成GO和KEGG富集分析;最后采用MOE软件分子对接评估培元补肾安胎方重要活性成分与关键靶点的结合活性。3 采用体内和体外实验相结合方法,体内实验:将ICR雌鼠随机分为PD0-PD9组、除衰组、对照组①、米非司酮(RU486)组、对照组②。PD0-PD9组分别于PD0-9天下午取材,除衰组、对照组①、RU486组、对照组②分别于PD5和PD9下午取材,观察对比胚胎着床数目,应用SA-β-gal染色、IHC、WB检测子宫内膜组织衰老标志物(SA-β-gal活性、P16蛋白)的表达。体外实验:不同浓度、时间点的甲羟孕酮(MPA)对2BS细胞进行干预,应用WB检测各组2BS衰老标志蛋白P53、P21、P16表达量,SA-β-gal染色检测2BS SA-β-al活性,光学显微镜观察2BS形态的改变,EdU检测2BS增殖功能,RT-PCR检测2BS SASP、PRL mRNA表达量。收集MPA诱导2BS的衰老上清液与HTR-8/SVneo共培养,应用CCK8、EdU、划痕及Transwell实验分别检测HTR-8/SVneo的增殖、迁移和侵袭功能。4采用Clark经典复发性流产模型鼠造模方法造模,将CBA/J雌鼠随机分为12组。正常组B、模型组B、西药组B、中药低剂量组B、中药中剂量组B、中药高剂量组B在PD14取材计算胚胎丢失率;正常组A、模型组A、西药组A、中药低剂量组A、中药中剂量组A、中药高剂量组A在PD5下午取材,应用HE染色观察小鼠卵巢黄体面积,Elisa检测血清P水平,SA-β-gal染色检测内膜的SA-β-gal活性,WB和RT-PCR检测子宫内膜P16、P53、P21蛋白和mRNA表达,IHC检测子宫P16蛋白定位分布及表达。结果1培元补肾安胎方对LPD型RSA临床疗效1.1保胎结局:治疗组保胎成功率93.33%高于对照组70%(p<0.05)。1.2中医证候疗效:治疗组总有效率96.67%高于对照组60.00%(p<0.01)。1.3中医证候积分:治疗后两组患者脾肾两虚型中医证候总积分均明显低于治疗前(p<0.01)。治疗组改善LPD型RSA患者脾肾两虚型证候优于对照组(p<0.05)。1.4止血时间:治疗组平均止血时间4.29±0.46天短于对照组6.48±0.54天(p<0.05)。1.5腹痛消失时间:治疗组平均腹痛消失时间5.48±0.35天短于对照组8.63±0.84天(p<0.05)。1.6血清激素水平:治疗组在孕9、11、12周血清E2值高于对照组(p<0.05);治疗组孕6、7、9、11、12周血清P值高于对照组(p<0.05);治疗组孕8、9、10、11、12周血清β-HCG值高于对照组(p<0.01)。1.7 B超检查:治疗组胚胎发育与孕周相符22例,小于孕周6例,胎停育2例;对照组胚胎发育与孕周相符14例,小于孕周7例,停育9例。1.8不良反应:治疗组肝功异常1例,对照组肝功异常3例、皮疹1例,两组在安全性方面无差异(p>0.05)。2网络药理学和分子对接探讨培元补肾安胎方治疗复发性流产的作用机制2.1培元补肾安胎方潜在化合物及作用靶点:潜在化合物186个,作用靶点136个。2.2 RSA疾病靶点:经过筛选去重共得到RSA靶点1658个。2.3共同靶点筛选及互作网络构建:共同靶标65个,潜在靶点分别至少与两个化合物相连接。2.4 PPI网络的构建和关键靶点的提取:PPI网络中有65个节点,其中VEGFA、IL6、EGFR、MPAK8、ESR1等是关键靶点。2.5 GO和KEGG富集:GO主要涉及转录因子活性、单加氧酶活性等。KEGG主要涉及 PI3K-Akt、MPAK、P53 等。2.6分子对接:核心化合物和潜在靶点分子对接得分均≤-5.0 kcal/mol。3孕酮诱导“种植窗期”内膜细胞衰老在胚胎着床中的作用研究3.1“种植窗期”内膜存在急性衰老的生理表现:IHC结果显示,P16蛋白在子宫内膜间质成纤维细胞、上皮细胞胞核呈阳性表达,PD0-PD5组随着怀孕天数的增加P16蛋白表达量逐渐增多,于PD5达到最大值,PD6-PD9组P16表达量逐渐减少。WB和β-gal染色也得出相同结果。3.2“种植窗期”内膜衰老有利于胚胎着床:清除衰老细胞后胚胎着床数目、SA-β-gal活性、内膜P16蛋白表达量少于对照组(p<0.01)。3.3孕酮可诱导成纤维细胞衰老:与空白组相比,各组MPA干预后2BS细胞SA-β-gal活性和衰老标志蛋白P16、P21、P53表达量增多(p<0.01),细胞形态不规则、细胞核增大,其中MPA(8μM)作用16天,各指标变化显着(p<0.01)。EDU结果显示MPA干预后2BS增殖减慢(;p<0.01)。RT-PCR实验结果显示,MPA组CXCL-2、CXCL-1 等 SASP、PRL mRNA 表达高于空白组(p<0.01)。3.4孕酮诱导细胞衰老是胚胎着床的重要条件:RU486阻断孕酮作用后胚胎着床数目、内膜P16蛋白表达量及SA-β-gal活性小于对照组(p<0.01)。3.5孕酮诱导形成的衰老微环境有利于滋养细胞功能:Senescent CM共培养的HTR-8/SVneo细胞水平和垂直迁移、侵袭功能强于Young CM组(p<0.01)。4基于“种植窗期”内膜衰老探讨培元补肾安胎方治疗RSA的作用研究4.1胚胎丢失率:模型组胚胎丢失率高于正常组(p<0.01),提示造模成功。中药各剂量组和西药组均低于模型组(p<0.05)。4.2血清P水平:模型组血清P水平低于正常组(p<0.05)。中药中剂量组和西药组血清P水平高于模型组(p<0.05)。4.3卵巢黄体面积:模型组黄体面积少于正常组(p<0.05)。中药中剂量组和西药组卵巢黄体面积多于模型组(p<0.05)。4.4 SA-β-gal染色:模型组内膜SA-β-gal活性少于正常组(p<0.01)。中药中、高剂量组和西药组内膜组织SA-β-gal活性多于模型组(p<0.01)。4.5内膜组织P16、P53、P21蛋白和mRNA表达:模型组P16、P53、P21蛋白和mRNA表达低于正常组(p<0.05)。中药低、中剂量组、西药组P16、P53、P21蛋白和mRNA表达高于模型组(p<0.05)。4.6免疫组化:P16蛋白在内膜成纤维细胞、上皮细胞的胞核中呈阳性表达,模型组内膜P16蛋白表达量低于正常组(p<0.01),中药低、中剂量组、西药组内膜P16蛋白表达量高于模型组(p<0.01)。结论1培元补肾安胎方能明显改善脾肾两虚证候,减轻阴道流血、腹痛症状,提高血清E2、P、β-HCG水平,促进胚胎发育,提高LPD型RSA的保胎成功率。2通过网络药理学初步明确培元补肾安胎方治疗RSA的分子机制可能是通过调控P53信号通路,调节细胞衰老,从而治疗RSA。3“种植窗期”内膜急性衰老是胚胎着床的必要条件之一,其中足量足时间的孕酮是诱导内膜衰老的重要因素。4 P不足、“种植窗期”内膜急性衰老不足可能是LPD型RSA发病机制。培元补肾安胎方可能通过提高血清P和卵巢黄体面积,增加“种植窗期”内膜P53、P21、P16表达,促进“种植窗期”内膜衰老从而发挥保胎作用。

梁嘉玲[2](2021)在《二补助育汤改善RIF患者子宫内膜容受性的临床疗效及作用机制研究》文中进行了进一步梳理目的1查阅目前国内外关于子宫内膜容受性的相关文献,整理、归纳子宫内膜容受性的现代医学与中医药研究进展,为临床诊治子宫内膜容受性低下提供思路与依据。2观察二补助育汤对反复胚胎种植失败(RIF)患者中医证候、黄体中期超声学指标、血清中血管生成相关因子水平、雌孕激素水平及妊娠结局的影响,探讨二补助育汤对RIF患者子宫内膜容受性的临床疗效。3基于PI3K/Akt/mTOR信号通路及LC3B、VEGF、Ang-1、Ang-2表达水平,观察二补助育汤对胚胎着床障碍小鼠种植窗期子宫内膜细胞自噬与血管生成的影响,进一步探究其提高子宫内膜容受性的作用靶点与机制。方法1 临床研究采用治疗前、后自身对照的研究方法,收集符合肾虚血瘀证型的低子宫内膜容受性RIF患者32例,予二补助育汤连续服用1-3个疗程(1个月经周期为1个疗程),观察对比患者治疗前后的一般情况、月经失血评分、中医证候评分,以及黄体中期的超声学指标、血清中血管生成相关因子水平、雌孕激素水平,并随访患者再行IVF-ET/ICSI的胚胎种植率与临床妊娠率。2 实验研究采用米非司酮建立胚胎着床障碍小鼠模型,将小鼠分为空白组、模型组、二补助育汤低、中、高剂量组、补佳乐组、阿司匹林组。药物干预及取材后,裸眼观察各组小鼠子宫形态、计数胚胎着床位点数;应用扫描电镜观察各组小鼠子宫内膜胞饮突形态;应用透射电镜观察子宫内膜细胞自噬体结构;应用Real-Time PCR法、Western blot法、免疫组化法检测 PI3K、Akt、mTOR、LC3B、VEGF、Ang-1、Ang-2 的 mRNA 表达量、蛋白表达量与蛋白定位,分析各组表达量与定位的差异。结果1二补助育汤对RIF患者子宫内膜容受性的临床疗效观察(1)月经情况与中医证候:二补助育汤可使RIF患者月经量明显增加(P<0.01),经血颜色较治疗前鲜红,经行顺畅,血块减少,但差异无统计学意义(P>0.05);二补助育汤可明显改善RIF患者肾虚血瘀证候(P<0.01)。(2)黄体中期超声学指标:二补助育汤治疗后,患者子宫内膜厚度与容积明显增加(P<0.01);A型、B型子宫内膜例数较治疗前增多,但差异无统计学意义(P>0.05);双侧子宫动脉PI、RI、S/D数值均较治疗前明显降低(P<0.01);Salle评分较治疗前明显增加(P<0.01)。(3)黄体中期血管生成因子:二补助育汤治疗后,患者黄体中期血清中VEGF、Ang-1水平均较治疗前明显升高(P<0.01),Ang-2亦较治疗前升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。(4)黄体中期雌孕激素:二补助育汤治疗后,患者黄体中期血清E2较治疗前明显升高(P<0.05);P亦较治疗前升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。(5)妊娠结局:二补助育汤治疗后,患者下一周期的胚胎种植率为40.74%,临床妊娠率为37.50%。2二补助育汤对胚胎着床障碍小鼠子宫内膜容受性作用机制的实验研究(1)子宫形态、妊娠率与平均胚胎着床位点数:模型组小鼠子宫色白、较细,平均胚胎着床位点数极少,妊娠率较空白组明显降低(P<0.01);而中药中、高剂量组、补佳乐组与阿司匹林组小鼠子宫色泽红润,着床部位少量充血或膨大,平均胚胎着床位点数较模型组明显增多(P<0.05),妊娠率较模型组明显升高(P<0.01),中药组中以中药高剂量组子宫形态与妊娠结局最佳,且与两西药组无显着差异(P>0.05)。(2)PI3K/Akt/mTOR信号通路、LC3B:①基因表达:各组小鼠子宫PI3K mRNA表达无显着差异(P>0.05);模型组AktmRNA、mTOR mRNA表达水平较空白组明显升高(P<0.01),LC3B mRNA表达水平较空白组显着降低(P<0.01);中药中、高剂量组PI3K mRNA、AktmRNA、mTOR mRNA表达水平较模型组均呈下降趋势,LC3B mRNA表达水平较模型组均呈升高趋势,但差异均不显着(P>0.05)。②蛋白表达:模型组小鼠子宫PI3K、Akt、mTOR蛋白表达量较空白组明显升高(P<0.01),LC3B蛋白表达量较空白组明显降低(P<0.01);中药中、高剂量组、阿司匹林组PI3K、Akt、mTOR蛋白表达量均较模型组明显降低(P<0.05),LC3B蛋白表达量均较模型组显着升高(P<0.05)。③蛋白定位:模型组小鼠PI3K、Akt、mTOR蛋白在子宫内膜腔上皮细胞、腺上皮细胞均呈阳性表达,在间质细胞与血管内皮细胞亦有少量表达,LC3B蛋白在子宫内膜腔上皮细胞、腺上皮细胞极少量表达,在间质细胞及肌层细胞未见表达;而中药中、高剂量组、补佳乐组与阿司匹林组Akt、mTOR蛋白在子宫内膜腔上皮细胞、腺上皮细胞表达均较模型组减少,LC3B蛋白在子宫内膜腔上皮细胞、腺上皮细胞均呈阳性表达。(3)子宫内膜细胞自噬体:模型组小鼠子宫内膜细胞中未见明显自噬体与自噬溶酶体;而中药中、高剂量组、阿司匹林组小鼠子宫内膜细胞中可见相对较多的自噬溶酶体。(4)VEGF、Ang-1、Ang-2:①基因表达:模型组小鼠子宫 VEGF、Ang-1、Ang-2 mRNA表达水平均较空白组明显降低(P<0.01);各药物组以相应药物干预后,VEGF、Ang-1、Ang-2 mRNA表达水平均呈升高趋势,其中,VEGF mRNA表达水平以中药中剂量组、补佳乐组、阿司匹林组升高明显(P<0.05);所有药物组Ang-1 mRNA表达水平均较模型组明显升高(P<0.05);Ang-2mRNA表达水平以中药高剂量组、补佳乐组、阿司匹林组升高明显(P<0.01)。②蛋白表达:模型组小鼠子宫VEGF、Ang-1、Ang-2蛋白表达量均较空白组明显降低(P<0.01);各药物组以相应药物干预后,VEGF、Ang-1、Ang-2蛋白表达量均呈升高趋势,其中,所有药物组VEGF蛋白表达量均较模型组明显升高(P<0.05);Ang-1蛋白表达量以中药中、高剂量组、补佳乐组、阿司匹林组升高明显(P<0.01);Ang-2蛋白表达量以中药高剂量组、补佳乐组、阿司匹林组升高明显(P<0.05)。③蛋白定位:模型组小鼠子宫VEGF、Ang-1、Ang-2蛋白在子宫内膜腔上皮细胞、腺上皮细胞呈阴性或弱阳性表达,在血管内皮细胞表达不明显;而中药高剂量组、补佳乐组与阿司匹林组VEGF、Ang-1、Ang-2蛋白在子宫内膜腔上皮细胞、腺上皮细胞、血管内皮细胞呈弱阳性至阳性表达,较模型组表达增多。结论1临床研究结果显示,二补助育汤可显着改善RIF患者肾虚血瘀证候,增加黄体中期子宫内膜厚度与容积、子宫动脉血流灌注、子宫内膜及内膜下血流灌注,提高黄体中期血管生成相关因子表达水平,并且在一定程度上改善黄体功能,从而提高子宫内膜容受性,改善妊娠结局。2实验研究结果显示,二补助育汤能够抑制胚胎着床障碍小鼠PI3K/Akt/mTOR信号通路,上调LC3B的表达,且增加VEGF、Ang-1、Ang-2的表达,从而增强子宫内膜细胞自噬作用,促进子宫内膜血管生成,以提高子宫内膜容受性,有利于胚胎着床。

何翃闳[3](2020)在《低氧浓度对牦牛卵母细胞和附植前胚胎发育的影响及其作用机制的研究》文中研究指明牦牛对于低氧高寒环境具有较强的适应性,但其体外卵母细胞成熟率和胚胎发育能力较为低下,这严重影响了其体外受精、体细胞克隆等繁殖技术的发展。体外培养系统的气相环境对卵母细胞和早期胚胎的发育起着至关的重要作用,而氧气是体外培养系统气相环境的重要组成部分。然而,目前在国内外尚未见关于低氧浓度对牦牛卵母细胞和附植前胚胎发育影响的报道。本研究旨在探讨不同氧浓度对牦牛卵母细胞成熟和体外受精胚胎发育能力的影响,以及其作用机制的研究,为进一步优化牦牛体外胚胎生产系统提供理论依据。本研究进行了以下试验并取得了一定成果:1.通过观察在不同氧气浓度组(20%、10%、5%和1%O2)成熟的卵丘-卵母细胞复合体(Cumulus-oocyte complexes,COCs)的扩张和第一极体的排出情况,统计不同氧气浓度组牦牛卵母细胞孤雌激活(parthenogenetic activation,PA)后胚胎的卵裂率和囊胚率判断卵母细胞的发育能力,采用实时荧光定量(Quantitative Real-Time PCR,q RT-PCR)和蛋白免疫印迹分析(Western blotting)检测不同氧气浓度下牦牛卵母细胞葡萄糖转运、发育和代谢相关基因和蛋白的表达。结果显示,当氧气浓度为5%时,COCs扩散最好,卵母细胞的成熟率显着高于其他组(p<0.05),而孤雌激活胚胎的卵裂率显着高于20%O2浓度组和1%O2浓度组(P<0.05),囊胚率显着高于其他组(P<0.05);不同氧气浓度组间与卵母细胞发育、抗氧化和代谢能力相关基因及其蛋白的表达有显着差异。结果表明,牦牛卵母细胞体外成熟过程中,5%的氧气浓度可以促进牦牛卵母细胞的成熟,并可显着提高后续孤雌激活胚胎的发育能力。2.通过免疫组织化学法检测HIF-1α和VEGF蛋白在牦牛卵巢中的定位,并采用q RT-PCR、Western blotting、免疫荧光染色法和TUNEL试剂盒分别检测HIF-1α、VEGF、Bax和Bcl-2在不同氧气浓度组COCs(20%、10%、5%和1%O2)中的表达情况以及不同氧气浓度组COCs中的细胞凋亡率。结果显示,HIF-1α蛋白主要定位在卵巢的卵泡颗粒层、卵泡膜、透明带、放射冠和卵巢生殖上皮层中,而VEGF蛋白主要定位在卵巢的卵泡颗粒层和卵泡膜中,在COCs中,其表达主要位于卵母细胞中,在卵丘细胞中表达较弱;随着氧气浓度的降低,HIF-1α和VEGF的表达均呈现先升高后降低的趋势,在5%氧气浓度下达到最高,显着高于其他组(P?0.05);在5%氧气浓度下促凋亡因子Bax的表达水平均显着低于其他组(P<0.05),而抗凋亡因子Bcl-2的表达水平均显着高于其他组(P<0.05),其细胞凋亡率显着低于其他组(P?0.05)。结果表明,牦牛卵母细胞体外成熟过程中,5%氧气浓度可能通过HIF-1α介导VEGF的表达抑制了COCs的细胞凋亡,促进了卵母细胞的发育。3.将5%氧气浓度组中成熟的COCs分别在不同氧气浓度(20%、10%、5%和1%O2)下进行体外受精,观察不同氧气浓度对体外受精胚胎的卵裂率、囊胚率、囊胚孵化率和总细胞数来判断低氧浓度对胚胎发育能力的影响;此外,我们采用q RT-PCR、免疫荧光染色法和TUNEL试剂盒分别检测了胚胎发育相关基因的表达和细胞凋亡率。结果显示,在5%O2浓度组中,胚胎的卵裂率显着低于20%O2浓度组和10%O2浓度组(P<0.05),显着高于1%O2浓度组(P<0.05),而囊胚率、囊胚中的细胞总数、内细胞团细胞数、滋养层细胞数、ICM/TE的比例以及细胞凋亡率均显着高于其他组(P<0.05);在5%O2浓度下,囊胚中CDX2、POU5F1、SOX2和NANOG基因的m RNA转录水平显着高于其他组(P<0.05),促凋亡基因Bax的转录水平显着降低(P<0.05),而抗凋亡因子Bcl-2的转录水平显着升高(P<0.05)。结果表明,在牦牛体外受精胚胎发育过程中,5%的氧气浓度降低了胚胎的卵裂率,但显着提高了胚胎的囊胚率,增强了附植前牦牛胚胎的发育能力并抑制了其细胞凋亡。4.通过q RT-PCR和免疫荧光染色法检测p38 MAPK与HIF-1α在常氧浓度(20%O2)和低氧浓度(5%O2)下体外受精胚胎不同阶段发育中的表达和定位。结果显示,在常氧浓度和低氧气浓度下,随着体外受精胚胎的发育,HIF-1α和p38 MAPK的表达呈先升高后降低的趋势,在8细胞中均达到最高(P<0.05),而在囊胚期均为最低(P<0.05);HIF-1α在各阶段胚胎中的表达差异均显着(P<0.05),而p38 MAPK在2细胞到8细胞阶段表达差异不显着(P>0.05),但在桑椹胚和囊胚阶段中表达差异显着(P<0.05);在常氧浓度下,在2细胞到囊胚阶段,HIF-1α蛋白主要表达于胚胎的细胞质中,在囊胚中的表达非常弱,而p38MAPK蛋白表达于胚胎的细胞质和细胞核中,在细胞质中表达更为明显;在低氧浓度下,在2细胞到桑椹胚阶段,HIF-1α蛋白主要表达于胚胎的细胞质中,在囊胚阶段,HIF-1α蛋白在细胞质和细胞核中均有表达,而且在细胞核中表达明显,而p38 MAPK蛋白主要表达于胚胎的细胞质和细胞核中,在2细胞到桑椹胚阶段,细胞质中表达更为明显,而在囊胚阶段,细胞核中表达更为明显。结果表明5%氧气浓度下HIF-1α蛋白在囊胚中转入细胞核表达,推测5%氧气浓度可能通过p38 MAPK基因调控HIF-1α基因的表达,提高了囊胚率,进一步改善了附植前胚胎的发育。本研究表明5%的氧气浓度有利于牦牛卵母细胞的体外成熟,增强了牦牛附植前体外受精胚胎的发育能力,为进一步探讨牦牛卵母细胞体外成熟环境及建立牦牛体外胚胎生产系统提供了理论依据。

时光[4](2020)在《活血消异方调控子宫内膜异位症大鼠颗粒细胞凋亡与自噬的机制研究》文中研究指明子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)为育龄期女性常见病、多发病,发病率10%-15%。EMs影响卵泡发育是导致不孕的重要原因。50%的EMs患者合并不孕。导师赵瑞华教授应用活血疏肝补肾中药序贯治疗可有效改善EMs不孕患者卵泡发育,提高腹腔镜术后妊娠率与活产率。前期实验研究表明活血消异方可改善EMs模型大鼠IVF-ET促排卵数、受精数,提高EMs模型大鼠IVF-ET妊娠率与活产率。故本研究从子宫内膜异位症影响卵泡发育的角度入手,立足细胞凋亡与细胞自噬对卵泡发育的影响,开展动物实验与细胞实验以阐明活血消异方改善卵泡发育的机制。目的(1)探讨活血消异方对子宫内膜异位症大鼠卵巢颗粒细胞凋亡与自噬的影响,并通过ROS-JNK信号通路阐明活血消异方可能的作用机制。(2)探讨活血消异方含药血清对H2O2诱导的氧化应激大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响与作用机制。方法动物实验:8周龄雌性SD大鼠30只,分为空白组、假手术组、模型组、活血消异方组。活血消异方组予活血消异方汤剂,空白组、假手术组、模型组予蒸馏水,连续灌胃15天后,取大鼠腹主动脉血,检测血清ROS、T-SOD、CAT氧化与抗氧化指标;取大鼠卵巢组织行HE染色,光镜下观察各级卵泡形态,并计数;免疫组化染色定位颗粒细胞,并比较Bax、Bcl-2、caspase-3的表达;TUNEL染色观察卵巢颗粒细胞凋亡情况并计算凋亡率;Western blot检测p-JNK、Bax、Bcl-2、caspase-3、Beclin-1、LC3II 蛋白的表达;qRT-PCR 检测 Bax、Bcl-2、caspase-3 mRNA 的表达;透射电镜观察卵巢颗粒细胞超微结构,计算自噬体胞质面积比。细胞实验:21-25天雌性SD大鼠50只,应用机械分离与胰酶消化结合的方法采集大鼠卵巢颗粒细胞;免疫荧光染色观察兔抗FSHR受体多克隆抗体表达,检验卵巢颗粒细胞纯度;观察颗粒细胞生长状态,绘制生长曲线。结合文献与细胞生长状态,应用50 μm、100 μm、200 μm、500 μm、1mm浓度H2O2干预卵巢颗粒细胞,CCK-8法筛选合适浓度,建立大鼠卵巢颗粒细胞氧化应激模型;5%,10%,20%活血消异方含药血清干预,CCK-8法筛选活血消异方含药血清浓度与干预时间;应用200nm、400nm、800nm JNK信号通路抑制剂SP600125干预氧化应激的卵巢颗粒细胞,CCK-8法筛选合适的浓度;将对数生长期的卵巢颗粒细胞随机分为空白组、H202干预的氧化应激模型组(模型组)、活血消异方含药血清组(中药组)、JNK通路抑制剂组。经干预后激光共聚焦显微镜观察细胞内ROS表达,并比较各组平均光密度值;激光共聚焦显微镜观察TUNEL染色,并比较各组凋亡率;Western blot检测p-JNK、Bax、caspase-3蛋白表达;透射电镜观察卵巢颗粒细胞超微结构。结果动物实验:(1)与空白组、假手术组比较,模型组血清ROS升高,T-SOD、CAT降低,差异具有统计学意义(P<0.05),与模型组比较,活血消异方组血清ROS降低,T-SOD、CAT上升,差异具有统计学意义(P<0.05);(2)HE染色:与空白组、假手术组比较,模型组次级卵泡数目降低(P<0.05),与模型组比较,活血消异方组次级卵泡数目增加(P<0.05);(3)免疫组化染色:模型组大鼠卵巢颗粒细胞排列散乱,空白组、假手术组、活血消异方组大鼠卵巢颗粒细胞排列整齐;与空白组、假手术组比较,模型组Bax、caspasae-3表达升高,Bcl-2表达降低(P<0.01),与模型组比较,活血消异方组Bax、caspase-3表达降低,Bcl-2表达升高(P<0.01);(4)TUNEL染色:与空白组、假手术组比较,模型组卵巢颗粒细胞凋亡率明显升高(P<0.001),与模型组比较,活血消异方组凋亡率明显降低(P<0.001);(5)Western blot:与空白组、假手术组比较,模型组p-JNK、Bax、caspase-3蛋白表达升高,Bcl-2、Beclin-1、LC3II蛋白表达降低(P<0.05),与模型组比较,活血消异方组p-JNK、Bax,caspase-3蛋白表达下降,Bcl-2、Beclin-1、LC3II蛋白表达升高(P<0.05);(6)qRT-PCR:与空白组、假手术组比较,模型组Bax mRNA、caspase-3 mRNA表达升高,Bcl-2 mRNA表达降低(P<0.01),与模型组比较,活血消异方组Bax mRNA、caspase-3 mRNA 表达降低,Bcl-2 mRNA 表达升高(P<0.05);(7)透射电镜:模型组大鼠卵巢颗粒细胞超微结构破坏明显,空白组、假手术组、活血消异方组超微结构基本正常;空白组、假手术组、模型组、活血消异方组卵巢颗粒细胞自噬体胞质面积比差异无统计学意义(P<0.05)。细胞实验:(1)应用机械分离法与胰酶消化法相结合采集的卵巢颗粒细胞纯度为98%,符合细胞实验要求;卵巢颗粒细胞生接种密度应为96孔板5 × 104个/孔(100 μL);应用200 μm的H2O2诱导建立氧化应激的卵巢颗粒细胞模型;选用活血消异方含药血清最佳浓度为10%,干预时间为24h;JNK信号通路抑制剂SP600125干预浓度为800nm;(2)细胞内ROS表达:与空白组比较,模型组、中药组、JNK通路抑制剂组细胞内ROS平均光密度值升高(P<0.05),与模型组、JNK通路抑制剂组比较,中药组颗粒细胞内ROS降低(P<0.05);(3)TUNEL染色:与空白组比较,模型组、中药组、JNK通路抑制剂组凋亡率升高(P<0.05),与模型组比较,中药组、JNK通路抑制剂组凋亡率降低(P<0.05);(4)Western blot:模型组 p-JNK、Bax、caspase-3 蛋白表达较空白组、中药组、JNK通路抑制剂组升高;(5)透射电镜:模型组卵巢颗粒细胞超微结构明显破坏,中药组卵巢颗粒细胞超微结构损伤较模型组小。结论(1)活血消异方可能通过ROS-JNK信号通路,改善子宫内膜异位症大鼠氧化应激状态,减少卵巢颗粒细胞凋亡,增加卵巢颗粒细胞自噬,改善子宫内膜异位症大鼠卵泡发育。(2)活血消异方含药血清可能通过抑制ROS-JNK信号通路,降低H202诱导的氧化应激卵巢颗粒细胞凋亡。

焦岩[5](2020)在《多模态超声评估子宫内膜容受性在黄体功能不全所致复发性自然流产中的应用研究》文中研究说明复发性自然流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)是指与同一性伴侣连续发生3次及3次以上的自然流产。RSA病因复杂,常见的原因包括染色体异常、免疫功能异常、内分泌异常、黄体功能不全、自身免疫性疾病等,约30-40%的RSA原因不明。近年来,有关子宫内膜容受性(endometrial receptivity,ER)评价在RSA中的应用研究逐渐成为热点。大量研究认为,超声通过监测内膜厚度、内膜形态、内膜运动、内膜容积、内膜及内膜下血流分布等情况,可以用于评估ER,具有临床实用性,但各指标的单独应用存在一定的局限性。目前关于多模态超声评分评价RSA患者ER的研究并不多,且尚无公认的指南供临床医师参考。为此,本研究进行了尝试性研究,旨在探讨应用多模态超声评分评估黄体功能不全所致RSA患者ER的临床价值。本研究中,第一步,设立正常对照组和黄体功能不全所致RSA的病例组,每组均为100例,对全部受检者行子宫内膜容受性的多模态超声评估;第二步,对黄体功能不全所致RSA组100例受检者进行治疗,分为地屈孕酮片组50例,地屈孕酮片结合复方玄驹胶囊组50例,治疗一个周期后进行子宫内膜容受性的多模态超声评估。第三步,对黄体功能不全所致RSA组100例受检者随访妊娠结局。第四步,根据前三步研究结果,另外收集100例黄体功能不全所致RSA患者,均应用地屈孕酮片结合复方玄驹胶囊治疗,分为指导组和非指导组,每组各50例,随访妊娠结局。第一部分 多模态超声评估黄体功能不全所致复发性自然流产患者与正常人群子宫内膜容受性目的:探讨多模态超声评估黄体功能不全所致RSA患者与正常人群子宫内膜容受性可行性。方法:以黄体功能不全所致RSA患者与正常人群为研究对象,黄体功能不全所致RSA患者100例作为病例组,同时符合RSA和黄体功能不全的诊断标准;正常志愿者100例作为正常对照组,为同期已生育且无流产病史的育龄期妇女。收集两组受检者年龄、BMI等资料。检测两组受检者血清孕酮。超声检测子宫内膜厚度、形态类型、运动情况、血流情况、子宫内膜体积(Endometrial volume,EV)及血管血流指数(Vascularization-flow index,VFI)等参数,根据赋分标准进行多模态超声评分,评价ER。通过ROC曲线进一步分析子宫内膜厚度、EV、VFI及多模态超声评分等计量参数诊断黄体功能不全所致RSA的最佳截断值和约登指数。结果:两组的年龄、BMI差异无统计学意义(P>0.05)。病例组的孕酮水平低于正常对照组(P<0.05)。病例组子宫内膜厚度、EV和VFI均小于正常对照组(P<0.05);病例组子宫内膜形态类型、运动情况和血流情况均差于正常对照组(P<0.05)。病例组子宫内膜多模态超声评分低于正常对照组(P<0.05)。通过ROC曲线分析有统计学意义的指标为子宫内膜厚度、EV、VFI及多模态超声评分,最佳截断值和约登指数分别为(8.71mm,0.49)、(4.00cm3,0.59)、(0.27mm,0.58)、(14.5,0.67)。子宫内膜多模态超声评分诊断黄体功能不全所致RSA的约登指数高于子宫内膜厚度、EV和VFI等指标。结论:黄体功能不全所致RSA患者子宫内膜多模态超声评分较正常者降低,多模态超声评分可较全面和客观反映子宫内膜情况,对黄体功能不全所致RSA患者ER进行有效评价。应用子宫内膜多模态超声评分诊断黄体功能不全所致RSA的准确度高于子宫内膜厚度、EV和VFI等指标。第二部分 多模态超声评估药物治疗对黄体功能不全所致复发性自然流产患者子宫内膜容受性的影响目的:探讨多模态超声评估药物治疗对黄体功能不全所致RSA患者子宫内膜容受性的影响。方法:以黄体功能不全所致RSA患者为研究对象,同时符合RSA和黄体功能不全的诊断标准,根据治疗方案不同分为两组,地屈孕酮片组50例,地屈孕酮片结合复方玄驹胶囊组50例。收集所有受检者年龄、BMI等资料。治疗前,检测两组受检者孕酮。超声检测子宫内膜厚度、形态类型、运动情况、血流情况,以及EV、VFI等参数,根据赋分标准进行评分评价ER。治疗一个周期后,再次进行上述检查,进行治疗前后的组间及组内对比分析。结果:两组间年龄、BMI等指标差异无统计学意义(P>0.05)。治疗前,两组间的孕酮、子宫内膜厚度、EV、VFI差异无统计学意义(P>0.05);两组间的子宫内膜形态类型、运动情况和血流情况差异无统计学意义(P>0.05);两组间的子宫内膜多模态超声评分差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,两组的孕酮,治疗后均大于治疗前(P<0.05),两组间差异无统计学意义(P>0.05);两组的子宫内膜厚度、EV和VFI,治疗后均大于治疗前(P<0.05),地屈孕酮片结合复方玄驹胶囊组大于地屈孕酮片组(P<0.05);两组的子宫内膜形态类型、运动情况和血流,治疗后均优于治疗前,地屈孕酮片结合复方玄驹胶囊组优于地屈孕酮片组(P<0.05);两组的子宫内膜多模态超声评分,治疗后均高于治疗前(P<0.05),地屈孕酮片结合复方玄驹胶囊组大于地屈孕酮片组(P<0.05)。结论:多模态超声评分可以评价黄体功能不全所致复发性自然流产患者治疗前后子宫内膜容受性的差异,地屈孕酮片结合复方玄驹胶囊组对子宫内膜容受性的改善作用优于地屈孕酮片组。第三部分 药物治疗对黄体功能不全所致复发性自然流产患者妊娠结局的影响目的:探讨药物治疗对黄体功能不全所致RSA患者妊娠结局的影响。方法:以黄体功能不全所致复发性自然流产患者为研究对象,同时符合RSA和黄体功能不全的诊断标准,根据治疗方案不同分为两组,地屈孕酮片组50例,地屈孕酮片结合复方玄驹胶囊组50例。两组分别采用第二部分治疗方案继续治疗六个周期,并随访妊娠结局,对于妊娠者,药物应用至妊娠20周。再根据是否在治疗周期内妊娠并至正常分娩分为两组,收集两组受检者年龄、BMI等资料,对比妊娠至正常分娩组与未妊娠至正常分娩组,在第二部分研究中初次治疗一个周期后的孕酮、子宫内膜厚度、形态类型、运动情况、血流情况、EV、VFI及多模态超声评分的差异,并进一步通过ROC曲线分析子宫内膜厚度、EV、VFI及多模态超声评分的最佳截断值和约登指数。结果:地屈孕酮片组50例,治疗后妊娠31例,未妊娠19例,孕早期流产4例,妊娠至正常分娩27例;地屈孕酮片结合复方玄驹胶囊组50例,治疗后妊娠40例,未妊娠10例,孕早期流产2例,妊娠至正常分娩38例。地屈孕酮片组妊娠至正常分娩百分比为54%,地屈孕酮片结合复方玄驹胶囊组妊娠至正常分娩百分比为76%。地屈孕酮片结合复方玄驹胶囊组妊娠至正常分娩百分比明显高于地屈孕酮片组(P<0.05)。妊娠至正常分娩组与未妊娠至正常分娩组间比较分析,年龄、BMI等指标差异无统计学意义(P>0.05);在第二部分研究中初次治疗一个周期后,孕酮和子宫内膜厚度两项指标差异无统计学意义(P>0.05),子宫内膜形态类型、运动情况、血流情况,妊娠至正常分娩组优于未妊娠至正常分娩组(P<0.05),EV、VFI及多模态超声评分,妊娠至正常分娩组大于未妊娠至正常分娩组(P<0.05)。通过ROC曲线分析有统计学意义的指标为EV和多模态超声评分,最佳截断值和约登指数分别为(4.333;0.393)、(12.5;0.687)。结论:经地屈孕酮片结合复方玄驹胶囊治疗黄体功能不全所致复发性自然流产患者的妊娠至正常分娩百分比高于单独应用地屈孕酮片,妊娠至正常分娩组与未妊娠至正常分娩组之间在药物初次治疗一个周期后的EV、VFI及多模态超声评分存在差异,多模态超声评分诊断准确度高于孕酮。第四部分 多模态超声评估子宫内膜容受性在黄体功能不全所致复发性自然流产患者药物治疗中的指导价值目的:探讨多模态超声评估子宫内膜容受性在黄体功能不全所致RSA患者药物治疗中的指导价值。方法:另选黄体功能不全所致复发性自然流产患者100例为研究对象,同时符合RSA和黄体功能不全的诊断标准,应用地屈孕酮片结合复方玄驹胶囊治疗,根据是否采用多模态超声评分指导受孕分为指导组和非指导组,每组各50例,指导组根据第三部分研究所得两组初次治疗一个周期后妊娠至正常分娩组与非妊娠至正常分娩组间的子宫内膜多模态超声评分的最佳截断值调整药物用量和指导受孕,非指导组不根据最佳截断值调整药物用量和指导受孕。连续治疗前检测两组受检者孕酮及子宫内膜多模态超声评分。指导组根据多模态超声评分决定后续治疗方案,超过最佳截断值者,维持药量指导受孕,低于最佳截断值者,调整药物剂量治疗一个周期后复查,并按新的方案连续治疗六个周期。如果在此过程中确认妊娠则停止检查,药物应用至妊娠20周,随访妊娠结局。结果:两组间年龄、BMI等指标差异无统计学意义(P>0.05)。第一个治疗周期前,两组间孕酮和多模态超声评分差异无统计学意义(P>0.05);第一个治疗周期后,两组间的孕酮和多模态超声评分差异均无统计学意义(P>0.05)。两组孕酮和多模态超声评分在第一个治疗周期前、后比较差异均有统计学意义,治疗后大于治疗前(P<0.05)。指导组在第一个治疗周期后多模态超声评分低于12.5者,经过第二个治疗周期后,孕酮和多模态超声评分,第二个治疗周期后均大于第一个治疗周期后(P<0.05)指导组50例,治疗后妊娠46例,未妊娠4例,孕早期流产1例,妊娠至正常分娩45例;非指导组50例,治疗后妊娠40例,未妊娠10例,孕早期流产2例,妊娠至正常分娩38例。指导组妊娠至正常分娩百分比为90%,非指导组妊娠至正常分娩百分比为76%。指导组妊娠至正常分娩百分比明显高于非指导组。结论:在地屈孕酮片结合复方玄驹胶囊治疗黄体功能不全所致复发性自然流产患者过程中,相对于不指导的情况,根据多模态超声评分最佳截断值指导受孕可提高妊娠至正常分娩百分比。

李雪楠[6](2020)在《DEHP暴露诱导鹌鹑卵巢与输卵管发育迟滞的机制》文中进行了进一步梳理邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(Di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)是世界范围内最常使用的塑化剂之一,在大气、水及土壤中广泛存在,被世界卫生组织列为潜在的内分泌干扰物。其能够引发生殖功能障碍,导致卵巢和输卵管发育异常,干扰卵泡发育,但其毒理学机制仍不清楚。为了探究DEHP致雌性鹌鹑卵巢和输卵管发育毒性的机制,本试验选用150只雌性日本鹌鹑随机分成5组(30只/组):空白对照组(Con)、溶媒对照组(Vcon)、低剂量染毒组(250 mg/kg DEHP组)、中剂量染毒组(500 mg/kg DEHP组)和高剂量染毒组(750 mg/kg DEHP组),采用灌胃方式连续处理45 d。观察卵巢和输卵管形态结构与功能变化,卵巢颗粒细胞、卵泡膜细胞的超微结构,检测卵巢和输卵管组织中DEHP及其代谢产物的残留量、血清性激素水平、性激素分泌相关调控因子、抗氧化功能、PPAR信号通路相关调控因子、Wnt/Ctnnb1信号通路与Hoxa家族相关调控因子。为揭示DEHP及其主要代谢产物邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯(mono-(2-ethylhexy)phthalate,MEHP)毒性的机制,以原代鹌鹑卵巢颗粒细胞为体外染毒模型,经过预试验确定了MEHP与PPAR激活剂Rosiglitazone、PPAR抑制剂GW9662的作用时间与剂量,随后将细胞分为八组:Con组(空白对照组)、GW9662组(10μM GW9662)、Rosi组(50μM Rosiglitazone)、MEHP组(50、100、200μM MEHP)、MEHP+GW9662组(200μM MEHP+10μM GW9662)、MEHP+Rosi组(200μM MEHP+50μM Rosiglitazone),处理24 h后检测了细胞活性、细胞形态、超微结构、性激素分泌相关调控因子、PPAR信号通路相关调控因子的表达水平。研究结果表明:(1)在高剂量DEHP染毒下,MEHP在卵巢和输卵管中的残留量分别达到DEHP残留量的1.8倍和2.3倍,表明MEHP是造成卵巢和输卵管毒性的主要代谢产物。DEHP暴露诱导卵巢和输卵管组织中T-AOC能力、GST和T-SOD活性下降,MDA含量升高,诱发卵巢和输卵管组织氧化应激。(2)DEHP暴露导致卵巢组织中成熟卵泡的数量和体积明显减少,卵泡膜细胞与颗粒细胞边界不清晰,细胞核染着色浅,卵泡膜细胞排列紊乱,卵巢颗粒细胞层厚度降低;输卵管组织上皮细胞层变性明显增加,间质细胞核边界不清晰,空泡化增多,输卵管膨大部上皮细胞层中纤毛细胞比例降低;卵巢和输卵管生殖细胞线粒体损伤(线粒体体积密度减小,线粒体嵴减少、空泡化,受损线粒体百分比增加),表明DEHP暴露导致卵巢和输卵管病理学损伤,导致卵泡发育障碍。(3)DEHP暴露降低血清中FSH、PRL和E2的水平,增加T、LH和P的水平;降低HPOA轴中性激素分泌相关调控因子(Gn RH、17β-HSD、P450arom、ERβ、FSH)的表达水平,增加性激素分泌相关调控因子(PRLH、LH、PRL、PGR、St AR、3β-HSD、P450scc、ERα)的表达水平,表明DEHP暴露导致HPOA轴性激素分泌相关调控因子表达紊乱和性激素合成障碍。(4)DEHP暴露增强卵巢组织中PPAR信号通路相关调控因子(PPARα和PPARγ)的免疫荧光强度,减弱P450arom的免疫荧光强度,激活PPAR信号通路,降低P450arom的表达,抑制雌二醇的生成,造成卵巢颗粒细胞损伤、影响卵泡发育过程。(5)MEHP引起卵巢颗粒细胞显着的细胞毒性,包括细胞活性降低、细胞形态和超微结构改变、性激素分泌相关调控因子表达紊乱;PPARγ激动剂Rosiglitazone加剧MEHP引起的卵巢颗粒细胞增殖抑制和线粒体损伤,进一步抑制P450arom的表达;PPARγ拮抗剂GW9662拮抗MEHP引起的卵巢颗粒细胞增殖抑制和线粒体损伤,增加P450arom的表达,进而通过激活雌二醇生成过程,拮抗MEHP诱发的性激素分泌相关调控因子表达紊乱;表明MEHP通过激活PPAR介导的性激素调控机制引起鹌鹑卵巢颗粒细胞功能障碍。(6)DEHP暴露增加输卵管组织中Wnt/Ctnnb1信号通路相关调控因子(Wnt5a、Wnt7b、Fzd6、Dvl1、Axin1、Ctnnb1、Lef1、Tcf7l2、Hoxa9、Hoxa10)的表达水平,降低Wnt/Ctnnb1信号通路相关调控因子Gsk3β的基因和蛋白表达水平,表明DEHP暴露导致输卵管组织中Wnt/Ctnnb1信号通路相关调控因子表达紊乱,可能通过激活Wnt/Ctnnb1信号通路调控靶基因的转录,导致输卵管组织的形态和功能发生变化,最终引起输卵管发育迟滞。综上所述,DEHP暴露引起卵巢和输卵管组织发育迟滞、产蛋量和蛋壳重量下降、性激素分泌紊乱和氧化应激,并造成卵巢颗粒细胞增殖障碍和线粒体损伤,通过激活PPAR信号通路,抑制P450arom表达,引起雌二醇合成障碍,干扰HPOA的调控,激活Wnt/Ctnnb1信号通路,影响卵泡的发育,最终导致鹌鹑雌性生殖系统发育迟滞。本研究为DEHP诱导的卵巢和输卵管发育毒性的分子机制提供了新的证据。

李华[7](2019)在《小鼠囊胚ICM在蜕膜化中的作用》文中认为子宫内膜蜕膜化反应是子宫基质细胞在胚胎着床过程中转变为蜕膜细胞的过程,对于哺乳动物妊娠的建立和维持至关重要。着床期胚胎由内细胞团(Inner Cell Mass,ICM)和滋养外胚层(Trophectoderm,TE)组成,其中ICM主要参与胚体的生成,TE主要参与胚外组织的生成。大量研究表明,TE细胞能够分泌旁信号影响啮齿类动物子宫内膜蜕膜化反应,若机械去除ICM,仅含TE细胞的胚胎同样能够诱导子宫内膜蜕膜化,但关于ICM及其分化组织对蜕膜化反应的作用的研究几乎没有。TE细胞的增殖与分化受邻近ICM的调控,且ICM对滋养细胞的调控作用一直维持到妊娠后期。因此,我们提出ICM在蜕膜化反应过程中具有重要调控作用。本研究以CD-1小鼠为材料,首先建立多种人工诱导蜕膜化反应模型,分别以四倍体胚胎、空气、受精卵、2-细胞胚胎、生发泡期卵母细胞、滋养层细胞、玻璃珠等外源物质诱导假孕3.5d小鼠子宫内膜蜕膜化反应,并在诱导后4 d收集蜕膜组织,通过形态观察、组织切片、高通量转录组测序以及蛋白质双向电泳等技术分析不同蜕膜组织间的差异。结果发现四倍体胚胎诱导蜕膜与正常蜕膜相比,大小一致、结节明显且分布均匀。其余诱导蜕膜大小不一、形态各异、结节不明显、分布不均匀,与正常蜕膜相比差异显着;其次,利用体视显微镜观察剥离的蜕膜组织,发现受精卵和2-细胞胚胎诱导的蜕膜形态各异,大小差异显着且蜕膜组织有间隙存在,而正常蜕膜大小一致,完整无间隙,且子宫系膜侧蜕膜大于子宫系膜对侧的蜕膜。诱导蜕膜与正常蜕膜内部结构差异显着,解剖四倍体胚胎诱导蜕膜发现,蜕膜原羊膜腔内没有完整结构的胚体存在,仅有凋亡的组织碎片,而正常蜕膜内有结构完整的胚体。观察空气、四倍体胚胎和正常胚胎诱导的7.5 d蜕膜的子宫系膜血管,空气诱导蜕膜的子宫系膜血管分布密集杂乱,而四倍体胚胎诱导蜕膜的子宫系膜血管分布较规律,但与正常蜕膜相比,差异显着。最后,利用转录组测序技术,发现四倍体胚胎诱导蜕膜和正常蜕膜间有179个差异基因,其中在正常蜕膜上调的基因有151个,在四倍体胚胎诱导蜕膜上调的基因有28个。通过GO分析可知:差异基因与滋养巨细胞分化最为相关。利用STRING数据可知蜕膜间催乳素家族的关系最为密切。选取Prl8a2、Prl4a1、Apoa1、Apoc2、H19、Ttr 6个基因,利用qPCR进行验证,结果显示,Prl4a1、Apoa1、Apoc2、H19、Ttr 5个基因在正常蜕膜中高表达而在四倍体胚胎诱导蜕膜中低表达,且差异显着,而Prl8a2的表达差异不显着。此外,利用蛋白质双向电泳技术,在四倍体胚胎诱导蜕膜和正常蜕膜间发现了3个蛋白差异点。这些结果表明:ICM缺陷导致蜕膜组织形态、结构和基因表达异常,ICM在蜕膜化反应过程中具有重要调控作用。该研究为探究异常蜕膜导致早期胚胎停育的线索及研究胚胎着床机理提供了新思路。

王俊霞[8](2018)在《IL-10对子宫腺肌症不孕患者内膜容受性的调控机制研究》文中进行了进一步梳理研究目标:分析子宫腺肌症不孕患者行IVF/ICSI助孕的临床结局;检测子宫腺肌症不孕患者子宫内膜IL-10及HOXA10的表达变化,并探究IL-10与HOXA10的相互关系。研究方法:1、临床资料分析回顾性分析2009年1月-2015年12月,本中心下列三组患者行IVF/ICSI的促排卵及妊娠结局。A组:子宫腺肌症患者应用超长方案行IVF/ICSI共362个周期。B组:子宫腺肌症患者应用长方案行IVF/ICSI共127个周期。C组:单纯输卵管因素患者应用长方案行IVF/ICSI共3471个周期。三组纳入标准:卵巢储备功能正常(年龄≤38岁、双侧AFC≥10个且基础FSH<10mIU/ml)。2、子宫内膜指标的检测应用Western Blot及免疫组织化学方法检测子宫腺肌症与对照组患者子宫内膜中IL-10、HOXA10、STAT3及p-STAT3的表达水平,并进行相关性分析。3、体外实验应用Western Blot方法检测IL-10重组蛋白刺激Ishikawa细胞后p-STAT3及HOXA10的表达水平,以及用p-STAT3抑制剂预处理Ishikawa细胞后,p-STAT3及HOXA10的表达变化。并且,应用JAR细胞球-单层Ishikawa细胞粘附模型进一步探究IL-10对胚胎粘附的影响。研究结果:1、三组年龄、不孕年限、基础FSH水平及基础窦卵泡数组间比较均无统计学差异。临床妊娠率、分娩率、胚胎着床率三组分别为(62.5%,50.5%,68.4%;51.1%,35.6%,58.5%;43.5%,34.4%,49.5%),C 组显着高于 A 组以及B组(P<0.05),A组显着高于B组(P<0.05)。2、子宫腺肌症不孕患者子宫内膜IL-10及HOXA10表达均显着降低,且二者呈正相关(r=0.47,P<0.05)。子宫腺肌症不孕患者内膜p-STAT3表达量显着降低,并与IL-10表达呈正相关(r=0.52,P<0.05)。3、IL-10 通过激活 STAT3 磷酸化刺激 Ishikawa细胞 HOXA10表达,且呈浓度及时间依赖性。IL-10可以促进JAR细胞球粘附于Ishikawa细胞比例,此促进作用可被p-STAT3抑制剂逆转。研究结论:对于行IVF/ICSI助孕的不孕症患者,与单纯输卵管因素患者比较,子宫腺肌症患者着床率以及临床妊娠率降低。子宫腺肌症不孕患者IL-10水平下降导致通过STAT3途径产生的HOXA10水平下降,进而影响胚胎粘附。

徐同辉[9](2016)在《酒精对胚胎转运的影响及机制》文中研究指明背景介绍输卵管妊娠是异位妊娠的一种,虽然其发生的根本原因仍然未知,但是胚胎滞留在输卵管中是导致输卵管妊娠发生的一个重要因素。现代医学研究证实,妇科炎症、结扎手术史和人工流产史,都会引起输卵管管腔堵塞,从而引起输卵妊娠。而且吸烟、服用药物和一些不良的生活习惯等均可导致输卵管妊娠的发生。酒精时常被人们作为一种饮品,然而研究证明过度饮酒不仅会导致心血管系统疾病、肝脏疾病和精神类疾病,而且酒精还和女性的许多生殖系统疾病有关。妊娠期饮酒对子代发育的影响已经成为现代研究的热点,然而,饮酒与胚胎在输卵管中的转运和胚胎早期发育之间的关系还没有被证实。本实验将探究在妊娠早期酒精对胚胎在输卵管中转运的影响及其机制,探究酒精与输卵管妊娠之间是否存在些许因果关系。材料与方法人体输卵管均取自临床具有生育能力的患者,患者分别接受了异位妊娠手术、子宫切除术和产后节育手术等。BABL/c小鼠和Wistar大鼠均购买自山东大学医学院动物中心。在急、慢性酒精摄入实验中,BABL/c小鼠经灌胃注射不同药物,分别持续3天和30天。研究中采用离体肌条张力实验检测输卵管平滑肌运动变化;Wstern blot蛋白印迹分析一氧化氮合酶(NOS)表达;BABL/c小鼠子宫和输卵管胚胎计数实验;HE染色法(hematoxylin-eosin staining,苏木素-伊红染色法)检测小鼠输卵管腹壶部和峡部形态;硝酸还原酶法测定输卵管中一氧化氮(NO)的含量;扫描电子显微镜(SEM)检测小鼠输卵管壶腹部和峡部的形态。实验结果本课题,输卵管肌条张力实验结果显示,酒精具有抑制人离体输卵管平滑肌的自发性收缩的作用,而且这种抑制具有浓度依赖性。而加入L-NAME(一种经典的一氧化氮合酶NOS的竞争性抑制剂)可以缓解酒精的这种抑制作用。人、Wistar大鼠和BABL/c小鼠输卵管组织Wstern blot蛋白印迹分析一氧化氮合酶(NOS)活性实验证明酒精可以诱导输卵管组织中一氧化氮合酶(NOS)表达上调,而加入L-NAME可以降低一氧化氮合酶(NOS)的表达。硝酸还原酶法实验结果证明,酒精可以使输卵管组织一氧化氮(NO)释放增多,而加入L-NAME可以降低酒精诱导的输卵管组织一氧化氮(NO)的释放量。在胚胎计数实验中发现,急、慢性酒精摄入都会引起胚胎滞留在小鼠输卵管中,值得注意的是,L-NAME只能可以减缓急性酒精摄入引起的胚胎滞留。在慢性酒精摄入实验中,苏木精一伊红染色法和扫描电子显微镜(SEM)检测小鼠输卵管的切片,发现慢性酒精摄入会导致小鼠输卵管上皮细胞损伤、脱落。这提示我们急、慢性酒精摄入阻碍小鼠胚胎转运的机制不完全相同。结论我们本课题实验结果证实,酒精会导致输卵管中的NO释放增多,并且通过NO信号途径抑制输卵管平滑肌的收缩;长期摄入酒精还会损伤输卵管的形态结构。急、慢性酒精摄入均会导致小鼠输卵管中的胚胎滞留。这提示我们酗酒可能会导致输卵管妊娠。

李健[10](2009)在《丙烯酰胺对雌性小鼠的生殖毒性和神经型一氧化氮合酶在卵巢细胞中的表达定位》文中研究说明丙烯酰胺(Acrylamide, ACR)是一种常见的化工原料,广泛用于饮水净化、污水处理、造纸、采矿业及科研实验等。人类在20世纪80年代之后已经对丙烯酰胺的毒性有了充分的认识。自从2002年瑞士国家食品监督局首次报道在高温加热食品中发现丙烯酰胺,再一次引起了各国科学家的关注。丙烯酰胺主要通过食源性的非职业途径和职业性接触对人产生毒性作用。此外人体还可能通过吸烟的途径接触丙烯酰胺。丙烯酰胺是一种已知的神经毒性物质和人类的可能致癌物,目前发现除职业接触外,人们还可通过日常饮食(如油炸薯片、薯条、高温烘烤的面包等)摄入大量丙烯酰胺,虽然丙烯酰胺可用被微生物降解,而且由于其具有较高水溶性及低脂溶性,所以不易发生生物聚集,也不易引起生物放大效应。但长期接触丙烯酰胺仍可对生物体产生不良作用:包括影响神经系统,促进癌症的发生,影响生殖和发育等,其危害日益引起人们的重视。丙烯酰胺的神经毒性已经为许多学者所公认,大量的中毒事件也多是围绕其神经毒性方面,但是对雌性动物生殖影响的研究比较匮乏。本实验选用35日龄昆明小鼠饮用丙烯酰胺水溶液,其中一组服用量每天为20mg/kg体重(以下简称20mg组),另一组每天为40mg/kg体重(以下简称40mg组),对照组(以下简称control)饮用自来水。65日龄开始做阴道涂片检查,观察情期规律性。80日龄开始逢发情期(阴道涂片出现团块或成片的角化细胞,可能有极少量的白细胞)处死,采集血清、卵巢、子宫等相关器官。实验过程中分别记录各组小鼠行为和情期变化情况、卵巢、子宫等相关器官的重量极其器官系数,收集一侧卵巢进行组织学处理以观察卵泡发育情况,另一侧卵巢和脑组织测定NOS的水平。主要结果如下:丙烯酰胺对小鼠行为及体重、器官的影响:丙烯酰胺染毒后,小鼠体重随染毒剂量增加增长减慢,实验组小鼠出现神经麻痹和行动障碍。对卵巢观察发现对照组和20mg组小鼠卵巢内出现排卵黄体,40mg组小鼠卵巢细小,无黄体生成,对相关器官称重发现丙烯酰胺主要使卵巢、子宫等生殖器官的脏器系数显着下降(P<0.01).通过观察阴道涂片,并将各段时期所占的比率(情期百分数)进行分析比较,结果发现20mg组发情前期(P)和发情后期(M)的时间极显着高于对照组(P<0.01),而发情期(E)的时间极显着的低于对照组(P<0.01);另外还发现20mg组小鼠出现间歇发情(发情后直接经过发情后期又再次发情,没有间情期出现);40mg组的发情前期(P)、发情期(E)、发情后期(M)的时间极显着低于对照组(P<0.01),间情期(D)较对照组显着增大,并且实验后期40mg组小鼠出现长期乏情,阴道涂片检测都为间情期(D)。对各组小鼠卵巢切片HE染色,进行组织形态学观察识别并计出黄体数量,结果发现对照组小鼠卵巢体积都大于实验组,对照组卵巢的黄体数目极显着高于20mg组小鼠(P<0.01);40mg组小鼠卵巢卵泡多停留在有腔卵泡期,都没有黄体出现。对各组小鼠的血清雌激素和孕激素水平进行检测,结果发现随丙烯酰胺剂量的增加小鼠血清雌激素水平逐渐升高(P>0.05);而小鼠血清中孕酮水平显着下降(P<0.01)。使用卵巢5%匀浆液,离心取上清测定小鼠卵巢中一氧化氮合酶的水平,结果发现随着染毒剂量的增高卵巢组织中TNOS,及两种分型iNOS和cNOS水平呈升高趋势,实验组与对照组比较存在极显着差异(P<0.01),40mg组与20mg组比较也存在极显着差异(P<0.01)。丙烯酰胺对小鼠脑组织NOS水平的影响:使用脑组织10%匀浆液,离心取上清测定小鼠卵巢中一氧化氮合酶的水平,结果发现,20mg组与对照组比较TNOS水平显着性的下降(P<0.01),而40mg组与对照组和20mg组比较TNOS水平显着性的上升。对两种分型NOS的测定发现,随着染毒剂量的增高脑组织中iNOS水平呈升高趋势,实验组与对照组及两实验组间比较存在极显着差异(P<0.01);而对cNOS测定发现,实验组与对照组比较cNOS水平都显着性的下降(P<0.01),但是40mg组与20mg组比较cNOS水平却出现升高(P<0.01)。另外发现cNOS的表达与iNOS的表达之间可能存在拮抗关系。以上研究表明丙烯酸胺对雌性动物生殖系统产生毒性作用,影响雌性动物发情、卵泡发育和排卵。丙烯酰胺可能通过影响小鼠脑组织中NOS的分泌,进而影响脑组织特定局部的NO含量,通过下丘脑-垂体-性腺轴对雌性动物生殖机能产生毒性的。一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, NOS)在氧气存在下能催化精氨酸分解生成一氧化氮(nitric oxide, NO),同时产生L-瓜氨酸。NOS有以下几种形式:神经型NOS(neuronal NOS, nNOS,又称Ⅰ型NOS)、诱导型NOS(inducible NOS, iNOS,又称Ⅱ型NOS)、内皮型NOS(endothelial NOS, eNOS,又称Ⅲ型NOS),其中nNOS和eNOS又被称为组成型NOS (constitutive NOS, cNOS). cNOS为Ca2+依赖型,主要位于内皮细胞(eNOS)及脑(nNOS); iNOS为非Ca2+依赖型,主要位于巨噬细胞、嗜中性白细胞、内皮细胞及上皮细胞。研究已发现多种不同分型的NOS在雌性生殖器官(如卵巢、阴道、输卵管)中有表达,并在生殖生理方面发挥着重要的作用。过去已有关于iNOS和eNOS在卵巢中表达的研究,发现iNOS主要在卵母细胞,颗粒细胞和黄体中表达,而eNOS主要在卵母细胞、颗粒细胞、卵丘细胞和黄体细胞中表达。最近的研究表明在非神经细胞中,如巨噬细胞也有nNOS表达,说明nNOS可能和eNOS、iNOS一样都参与卵巢的生理过程。但至今未见到关于小鼠卵巢中nNOS表达的报道。所以本实验的目的就是研究nNOS在小鼠卵巢中不同卵泡发育阶段的表达与定位情况。免疫组织化学染色结果发现:nNOS在小鼠卵巢的各级卵母细胞细胞质中,次级卵泡、有腔卵泡和闭锁卵泡的颗粒细胞(Gc)的细胞质存在特异性表达,刚排卵形成的黄体(cL)中也有弱表达,而在原始卵泡周围的扁平颗粒细胞、早期柱状颗粒细胞、卵泡膜细胞、血管内皮细胞和卵巢间质细胞中均未检测到表达。这说明nNOS可能在卵泡发育过程中通过调节颗粒细胞的生长和凋亡来调节卵泡的发育。

二、妊娠早期小鼠卵巢、输卵管及子宫内诱导型一氧化氮合酶的分布(论文开题报告)

(1)论文研究背景及目的

此处内容要求:

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例:

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

(2)本文研究方法

调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、妊娠早期小鼠卵巢、输卵管及子宫内诱导型一氧化氮合酶的分布(论文提纲范文)

(1)培元补肾安胎方治疗RSA的临床研究及基于内膜衰老的药物机制研究(论文提纲范文)

摘要
ABSTRACT
符号说明
第一章 文献综述
    综述一 复发性流产的西医研究进展
        1 复发性流产的病因研究
        2 复发性流产的治疗现状
        3 小结
        参考文献
    综述二 中医药治疗复发性流产的研究进展
        1 中医病因病机
        2 复发性流产的中医证型分布状况
        3 复发性流产的中医治疗现状
        4 小结
        参考文献
    综述三 子宫细胞衰老与女性生殖功能
        1 衰老细胞
        2 子宫的生理解剖及功能
        3 子宫衰老细胞对女性生殖功能的影响
        4 子宫衰老细胞的治疗现状
        5 小结与展望
        参考文献
第二章 培元补肾安胎方治疗黄体功能不足型复发性流产临床疗效观察
    前言
    1 研究材料
    2 研究方法
    3 结果
    4 讨论
    5 小结与展望
    参考文献
第三章 基于网络药理学和分子对接探讨培元补肾安胎方治疗复发性流产的作用机制
    前言
    1 材料与方法
    2 结果
    3 讨论
    4 小结与展望
    参考文献
第四章 孕酮诱导“种植窗期”子宫内膜细胞衰老在胚胎着床中的作用研究
    前言
    1 实验材料
    2 实验方法
    3 实验结果
    4 讨论
    5 小结与展望
    参考文献
第五章 基于“种植窗期”内膜衰老探讨培元补肾安胎方对复发性流产作用机制的研究
    前言
    1 实验材料
    2 实验方法
    3 实验结果
    4 讨论
    5 小结
    参考文献
结语
    1 研究总结
    2 创新点
    3 不足与展望
致谢
附录
在学期间主要研究成果

(2)二补助育汤改善RIF患者子宫内膜容受性的临床疗效及作用机制研究(论文提纲范文)

摘要
ABSTRACT
符号说明
第一章 文献综述
    综述一 反复胚胎种植失败低子宫内膜容受性的现代医学研究进展
        1 RIF定义的演变
        2 RIF子宫内膜容受性的影响因素
        3 RIF低子宫内膜容受性的治疗现状
        4 小结
        参考文献
    综述二 子宫内膜容受性的中医药研究进展
        1 病名溯源
        2 病因病机认识
        3 中医药在提高子宫内膜容受性中的应用
        4 小结
        参考文献
第二章 二补助育汤改善反复胚胎种植失败患者子宫内膜容受性的临床疗效观察
    前言
    1 研究材料
    2 研究方法
    3 结果
    4 讨论
    5 小结
    参考文献
第三章 二补助育汤对胚胎着床障碍小鼠子宫内膜容受性作用机制的实验研究
    前言
    实验一 基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨二补助育汤对胚胎着床障碍小鼠子宫内膜细胞自噬的影响
        1 实验材料
        2 实验方法
        3 实验结果
        4 讨论
        5 小结
    实验二 二补助育汤对胚胎着床障碍小鼠子宫内膜血管生成的影响
        1 实验材料
        2 实验方法
        3 实验结果
        4 讨论
        5 小结
    参考文献
结语
    1 研究总结
    2 创新点
    3 不足与展望
致谢
附录
在学期间主要研究成果
个人简历

(3)低氧浓度对牦牛卵母细胞和附植前胚胎发育的影响及其作用机制的研究(论文提纲范文)

摘要
Abstract
缩略词
文献综述
    第一章 哺乳动物卵母细胞的成熟和附植前胚胎的发育及其细胞凋亡
        1 卵母细胞的成熟
        1.1 卵巢与卵泡的形成
        1.2 卵母细胞体内发育过程
        1.3 卵母细胞的成熟
        1.4 卵丘细胞在卵母细胞成熟中的作用
        2 孤雌激活
        2.1 孤雌激活
        2.2 孤雌激活方式
        3 体外受精胚胎发育的影响
        4 细胞凋亡
    第二章 低氧浓度对哺乳动物卵母细胞的成熟和附植前胚胎的发育的影响
        1 雌性哺乳动物生殖器官中氧浓度的变化及生理学作用
        2 氧化应激
        2.1 活性氧的产生及生理意义
        2.2 活性氧对卵母细胞成熟和胚胎发育的作用
        3 低氧对胚胎发育的影响
        4 p38丝裂原活化蛋白激酶
实验研究
    第三章 不同氧气浓度对牦牛卵母细胞及后续孤雌激活胚胎发育的影响
        1.材料与方法
        1.1 材料与试剂
        1.2 卵母细胞的采集及体外成熟培养
        1.3 卵母细胞成熟的评估
        1.4 孤雌激活和胚胎发育的评估
        1.5 引物设计
        1.6 牦牛COCs RNA的提取和反转录
        1.7 qRT-PCR检测不同氧气浓度组牦牛COCs中与卵母细胞发育能力相关基因的表达
        1.8 Western blotting检测不同氧气浓度组牦牛COCs中与卵母细胞发育能力相关蛋白的表达
        1.9 数据分析
        2 结果
        2.1 不同氧气浓度对牦牛卵母细胞成熟的影响
        2.2 不同氧气浓度对牦牛孤雌激活胚胎发育潜能的影响
        2.3 不同氧气浓度对牦牛COCs中卵母细胞发育能力相关基因的表达影响
        2.4 不同氧气浓度对牦牛COCs中卵母细胞发育能力相关蛋白表达的影响
        3 讨论
        4 小结
    第四章 不同氧气浓度对牦牛卵母细胞HIF-1α和VEGF表达的影响及其与细胞凋亡的关联性分析
        1.材料与方法
        1.1 材料与试剂
        1.2 样品的采集及卵母细胞的体外成熟培养
        1.3 免疫组织化学法检测HIF-1α和VEGF在牦牛卵巢中的定位
        1.4 引物设计
        1.5 牦牛COCs总RNA的提取和反转录
        1.6 qRT-PCR检测牦牛COCs中HIF-1α、VEGF及凋亡相关基因的表达
        1.7 Westernblotting检测牦牛COCs中 HIF-1α、VEGF及凋亡相关蛋白的表达
        1.8 不同氧气浓度下牦牛COCs的细胞凋亡检测
        1.9 免疫荧光染色法检测不同氧气浓度组牦牛COCs中HIF-1α和VEGF蛋白的表达
        1.10 数据分析
        2.结果
        2.1 HIF-1α和VEGF在牦牛卵巢中的定位
        2.2 不同氧气浓度对牦牛COCs中HIF-1α、VEGF及凋亡相关基因的表达影响
        2.3 不同氧气浓度对牦牛COCs中HIF-1α、VEGF及凋亡相关蛋白的表达影响
        2.4 不同氧气浓度对牦牛COCs中细胞凋亡的影响
        2.5 不同氧气浓度组牦牛COCs中HIF-1α和VEGF蛋白的表达定位
        3 讨论
        4 小结
    第五章 不同氧气浓度对牦牛体外受精胚胎发育及其凋亡的影响
        1.材料与方法
        1.1 材料与试剂
        1.2 卵母细胞的采集及体外成熟培养
        1.3 牦牛卵母细胞的体外受精及胚胎发育的评估
        1.4 牦牛囊胚的差异染色及细胞计数
        1.5 牦牛囊胚的细胞凋亡检测
        1.6 引物设计
        1.7 牦牛囊胚RNA的提取和反转录
        1.8 qRT-PCR检测牦牛囊胚中与胚胎发育能力以及凋亡相关基因的表达
        1.9 数据分析
        2 结果
        2.1 低氧浓度对牦牛体外受精胚胎发育的影响
        2.2 低氧浓度对牦牛体外受精囊胚细胞数的影响
        2.3 低氧浓度对牦牛囊胚细胞凋亡的影响
        2.4 低氧浓度对牦牛体外受精囊胚中与胚胎发育和凋亡相关基因的表达影响
        3 讨论
        4 小结
    第六章 低氧浓度对牦牛体外受精胚胎p38 MAPK和HIF-1α表达的影响
        1.材料与方法
        1.1 材料与试剂
        1.2 卵母细胞的采集及体外成熟培养
        1.3 牦牛卵母细胞的体外受精
        1.4 引物设计
        1.5 牦牛不同阶段体外受精胚胎总RNA的提取和反转录
        1.6 qRT-PCR检测牦牛不同阶段体外受精胚胎中p38MAPK和HIF-1α基因的表达
        1.7 免疫荧光染色法检测不同阶段体外受精胚胎中p38MAPK和HIF-1α蛋白的表达
        1.8 数据分析
        2.结果
        2.1 低氧浓度对牦牛体外受精胚胎中HIF-1α基因的表达影响
        2.2 低氧浓度对牦牛体外受精胚胎中p38 MAPK基因的表达影响
        2.3 低氧浓度对牦牛体外受精胚胎中HIF-1α蛋白的表达和定位
        2.4 低氧浓度对牦牛体外受精胚胎中p38 MAPK蛋白的表达和定位
        3 讨论
        4 小结
全文结论
参考文献
致谢
作者简介
导师简介

(4)活血消异方调控子宫内膜异位症大鼠颗粒细胞凋亡与自噬的机制研究(论文提纲范文)

摘要
Abstract
缩略语表
文献综述
    综述一 子宫内膜异位症影响卵泡发育的中西医研究进展
        1. 子宫内膜异位症影响卵泡发育的西医研究进展
        2. 子宫内膜异位症不孕的中医研究进展
        小结
    综述二 ROS-JNK信号通路与卵巢颗粒细胞凋亡与自噬相关性研究进展
        1. ROS-JNK信号通路
        2. 氧化应激与子宫内膜异位症的相关性
        3. 卵巢颗粒细胞凋亡与自噬与卵泡发育的相关性
        小结
    参考文献
前言
第一部分 活血消异方对子宫内膜异位症大鼠卵巢颗粒细胞凋亡与自噬的影响
    实验一 活血消异方对子宫内膜异位症大鼠氧化应激与卵泡发育的影响
        1. 材料与方法
        2. 结果
        3. 讨论
    实验二 活血消异方对子宫内膜异位症大鼠卵巢颗粒细胞凋亡蛋白与基因表达的影响
        1. 材料与方法
        2. 结果
        3. 讨论
    实验三 活血消异方对子宫内膜异位症大鼠卵巢颗粒细胞超微结构与自噬的影响
        1. 材料与方法
        2. 结果
        3. 讨论
    小结
第二部分 活血消异方含药血清对H_2O_2诱导的氧化应激大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响与机制探讨
    实验一 大鼠卵巢颗粒细胞采集与鉴定
        1. 材料与方法
        2. 结果
        3. 讨论
    实验二 卵巢颗粒细胞氧化应激模型的建立与活血消异方含药血清浓度筛选
        1. 材料与方法
        2. 结果
        3. 讨论
    实验三 活血消异方含药血清对H_2O_2诱导的氧化应激大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响机制
        1. 材料与方法
        2. 结果
        3. 讨论
    小结
讨论
结语
创新点
不足与展望
参考文献
致谢
个人简历
附件

(5)多模态超声评估子宫内膜容受性在黄体功能不全所致复发性自然流产中的应用研究(论文提纲范文)

中文提要
Abstract
引言
    参考文献
第一部分 多模态超声评估黄体功能不全所致复发性自然流产患者与正常人群子宫内膜容受性
    1.资料与方法
    2.结果
    3.讨论
    4.小结
    参考文献
第二部分 多模态超声评估药物治疗对黄体功能不全所致复发性自然流产患者子宫内膜容受性的影响
    1.资料与方法
    2.结果
    3.讨论
    4.小结
    参考文献
第三部分 药物治疗对黄体功能不全所致复发性自然流产患者妊娠结局的影响
    1.资料与方法
    2.结果
    3.讨论
    4.小结
    参考文献
第四部分 多模态超声评估子宫内膜容受性在黄体功能不全所致复发性自然流产患者药物治疗中的指导价值
    1.资料与方法
    2.结果
    3.讨论
    4.小结
    参考文献
结论
综述 子宫内膜容受性的研究现状
    参考文献
攻读学位期间公开发表论文
中英文对照缩略词表
致谢

(6)DEHP暴露诱导鹌鹑卵巢与输卵管发育迟滞的机制(论文提纲范文)

摘要
英文摘要
1 引言
    1.1 DEHP的概述
        1.1.1 DEHP的结构及理化性质
        1.1.2 DEHP的应用现状
        1.1.3 DEHP的污染现状
        1.1.4 DEHP的代谢途径
        1.1.5 DEHP污染的危害
    1.2 DEHP内分泌与生殖毒性的研究进展
        1.2.1 DEHP内分泌毒性
        1.2.2 DEHP雄性生殖毒性
        1.2.3 DEHP雌性生殖毒性
    1.3 雌性生殖中的类固醇生成
        1.3.1 生长卵泡中的类固醇生成
        1.3.2 黄体中的类固醇生成
        1.3.3 类固醇生成与DEHP
    1.4 PPARs的概述
        1.4.1 PPARs分型及其作用
        1.4.2 PPARs与下丘脑-垂体轴
        1.4.3 PPARs与卵巢
        1.4.4 PPARs与子宫
        1.4.5 PPARs与 DEHP
    1.5 Wnt/Ctnnb1 的概述
        1.5.1 Wnt信号通路分类及其作用
        1.5.2 经典Wnt通路
        1.5.3 Wnt/Ctnnb1与DEHP
    1.6 DEHP有害结局路径
        1.6.1 有害结局路径概述
        1.6.2 AOP的开发
        1.6.3 AOP网络衍生
        1.6.4 AOP网络筛选
        1.6.5 AOP网络数据可视化
        1.6.6 DEHP毒性的AOP网络
    1.7 试验的目的与意义
2 材料与方法
    2.1 主要仪器与试剂
        2.1.1 主要仪器
        2.1.2 主要试剂
    2.2 试验动物与检测方法
        2.2.1 试验染毒剂量选择依据
        2.2.2 试验动物分组与处理
        2.2.3 组织样本采集与处理
        2.2.4 动物试验技术路线
        2.2.5 鹌鹑临床症状观察
        2.2.6 鹌鹑卵巢及输卵管病理解剖学观察
        2.2.7 鹌鹑卵巢及输卵管病理组织学观察
        2.2.8 鹌鹑卵巢及输卵管膨大部组织超微结构观察
        2.2.9 鹌鹑卵巢及输卵管组织中DEHP及其代谢产物的检测方法
        2.2.10 鹌鹑卵巢及输卵管组织中抗氧化功能的检测方法
        2.2.11 鹌鹑血清中性激素水平的检测方法
        2.2.12 鹌鹑卵巢组织中PPAR通路相关因子免疫荧光的检测方法
        2.2.13 鹌鹑卵巢及输卵管组织中mRNA表达的检测方法
        2.2.14 鹌鹑卵巢及输卵管组织中蛋白表达的检测方法
    2.3 鹌鹑卵巢颗粒细胞及其检测项目与方法
        2.3.1 培养基的配制
        2.3.2 鹌鹑卵巢颗粒细胞的分离与培养方法
        2.3.3 鹌鹑卵巢颗粒细胞分组与处理
        2.3.4 鹌鹑卵巢颗粒细胞试验技术路线
        2.3.5 鹌鹑卵巢颗粒细胞形态的观察
        2.3.6 鹌鹑卵巢颗粒细胞超微结构观察
        2.3.7 鹌鹑卵巢颗粒细胞活性检测方法
        2.3.8 鹌鹑卵巢颗粒细胞中mRNA表达的检测方法
        2.3.9 鹌鹑卵巢颗粒细胞中蛋白表达的检测方法
    2.4 数据统计与分析
3 结果与分析
    3.1 DEHP暴露后鹌鹑临床表现
        3.1.1 鹌鹑临床症状观察
        3.1.2 鹌鹑体重检测结果
        3.1.3 鹌鹑产蛋量的检测结果
        3.1.4 鹌鹑第一次产蛋时间的检测结果
        3.1.5 鹌鹑蛋壳厚度的检测结果
        3.1.6 鹌鹑蛋壳重量的检测结果
    3.2 DEHP及其代谢产物的检测结果
        3.2.1 鹌鹑卵巢组织DEHP及其代谢产物的检测结果
        3.2.2 鹌鹑输卵管组织DEHP及其代谢产物的检测结果
    3.3 DEHP暴露致鹌鹑卵巢病理学损伤的观察
        3.3.1 鹌鹑卵巢病理组织学的观察
        3.3.2 鹌鹑卵巢组织超微结构的观察
    3.4 DEHP暴露致鹌鹑卵巢组织氧化应激的检测结果
    3.5 DEHP暴露致鹌鹑下丘脑-垂体-卵巢轴相关因子变化的检测结果
        3.5.1 鹌鹑血清中性激素水平的检测结果
        3.5.2 鹌鹑下丘脑中性激素分泌相关因子的检测结果
        3.5.3 鹌鹑垂体中性激素分泌相关因子的检测结果
        3.5.4 鹌鹑卵巢中性激素分泌相关因子的检测结果
        3.5.5 鹌鹑下丘脑-垂体-卵巢轴相关因子的主成分分析
    3.6 DEHP暴露致鹌鹑卵巢组织PPAR信号通路相关因子的检测结果
    3.7 MEHP致鹌鹑卵巢颗粒细胞毒性机制的检测结果
        3.7.1 MEHP致鹌鹑卵巢颗粒细胞半数抑制浓度(IC50)检测结果
        3.7.2 鹌鹑卵巢颗粒细胞形态的观察
        3.7.3 鹌鹑卵巢颗粒细胞超微结构的观察
        3.7.4 鹌鹑卵巢颗粒细胞性激素分泌相关因子的检测结果
        3.7.5 鹌鹑卵巢颗粒细胞PPAR信号通路相关因子的检测结果
    3.8 鹌鹑卵巢颗粒细胞MEHP暴露后PPAR介导性激素调控通路变化的检测结果
        3.8.1 鹌鹑卵巢颗粒细胞PPAR信号通路干扰剂浓度筛选检测结果
        3.8.2 鹌鹑卵巢颗粒细胞形态的观察
        3.8.3 鹌鹑卵巢颗粒细胞超微结构的观察
        3.8.4 鹌鹑卵巢颗粒细胞性激素分泌相关因子的检测结果
        3.8.5 鹌鹑卵巢颗粒细胞PPAR信号通路相关因子的检测结果
    3.9 DEHP暴露致鹌鹑输卵管病理学损伤的观察
        3.9.1 鹌鹑输卵管病理组织学的观察
        3.9.2 鹌鹑输卵管膨大部组织超微结构的观察
    3.10 DEHP暴露致鹌鹑输卵管组织氧化应激的检测结果
    3.11 DEHP暴露致鹌鹑输卵管组织Wnt/Ctnnb1 信号通路相关因子的检测结果
        3.11.1 鹌鹑输卵管漏斗部组织Wnt/Ctnnb1 信号通路相关因子的检测结果
        3.11.2 鹌鹑输卵管漏斗部组织Wnt/Ctnnb1 信号通路相关因子的主成分分析
        3.11.3 鹌鹑输卵管膨大部组织Wnt/Ctnnb1 信号通路相关因子的检测结果
        3.11.4 鹌鹑输卵管膨大部组织Wnt/Ctnnb1 信号通路相关因子的主成分分析
        3.11.5 鹌鹑输卵管峡部组织Wnt/Ctnnb1 信号通路相关因子的检测结果
        3.11.6 鹌鹑输卵管峡部组织Wnt/Ctnnb1 信号通路相关因子的主成分分析
        3.11.7 鹌鹑输卵管子宫部组织Wnt/Ctnnb1 信号通路相关因子的检测结果
        3.11.8 鹌鹑输卵管子宫部组织Wnt/Ctnnb1 信号通路相关因子的主成分分析
        3.11.9 鹌鹑输卵管阴道部组织Wnt/Ctnnb1 信号通路相关因子的检测结果
        3.11.10 鹌鹑输卵管阴道部组织Wnt/Ctnnb1 信号通路相关因子的主成分分析
4 讨论
    4.1 DEHP暴露诱导雌性鹌鹑毒性
    4.2 鹌鹑卵巢与输卵管组织中DEHP代谢分析
        4.2.1 卵巢DEHP代谢特点
        4.2.2 输卵管DEHP代谢特点
    4.3 DEHP暴露诱导鹌鹑卵巢与输卵管发育迟滞
        4.3.1 DEHP暴露诱导鹌鹑卵巢发育迟滞
        4.3.2 DEHP暴露诱导鹌鹑输卵管发育迟滞
    4.4 DEHP暴露诱导鹌鹑性激素合成障碍
    4.5 PPAR信号通路调控在DEHP暴露诱导鹌鹑卵巢发育迟滞机制中的作用
    4.6 PPAR信号通路调控在MEHP染毒鹌鹑卵巢颗粒细胞毒性机制中的作用
    4.7 Wnt/Ctnnb1 信号通路调控在DEHP暴露致鹌鹑输卵管发育迟滞机制中的作用
    4.8 DEHP暴露诱导鹌鹑卵巢与输卵管发育迟滞的分子机制
5 结论
致谢
参考文献
攻读博士学位期间发表的学术论文

(7)小鼠囊胚ICM在蜕膜化中的作用(论文提纲范文)

摘要
abstract
1 引言
    1.1 蜕膜化反应是妊娠过程的关键步骤
    1.2 胚胎的顺利着床启动蜕膜化反应
    1.3 胚胎影响蜕膜化反应
    1.4 四倍体胚胎的研究
    1.5 与蜕膜组织表达相关的基因
        1.5.1 催乳素家族基因
        1.5.2 H19 基因
        1.5.3 Apoa1 基因
        1.5.4 Apoc2 基因
        1.5.5 Ttr基因
    1.6 转录组测序技术应用
    1.7 研究目的和意义
2 材料与方法
    2.1 试验动物与样品采集
        2.1.1 结扎公鼠的制备
        2.1.2 母鼠发情期的鉴定
        2.1.3 真孕母鼠、假孕母鼠的制备
        2.1.4 四倍体胚胎的制备
        2.1.5 输卵管移植
        2.1.6 样品采集
    2.2 实验主要溶液的配制
    2.3 组织切片处理
    2.4 蛋白质双向电泳
    2.5 组织样品RNA的提取
        2.5.1 RNA的提取
        2.5.2 蜕膜组织RNA质量检测
        2.5.3 基因组DNA的去除
        2.5.4 RNA的反转录
    2.6 转录组测序
    2.7 差异表达基因的验证
        2.7.1 内参的选择
        2.7.2 筛选差异基因引物的设计
        2.7.3 常规PCR的筛选
        2.7.4 标准品的制备
        2.7.5 标准曲线的建立
        2.7.6 Real-Time PCR及数据的统计分析
    2.8 生物信息分析参考的数据库和分析程序
3 结果与分析
    3.1 制备四倍体胚胎
    3.2 蜕膜组织比较
    3.3 血管通透性观察
    3.4 子宫系膜侧血管的观察
    3.5 蜕膜组织切片观察
    3.6 蛋白质双向电泳
    3.7 转录组测序结果
        3.7.1 蜕膜组织RNA的提取与纯化
        3.7.2 差异基因分析
    3.8 Real-Time PCR
4 讨论
    4.1 胚胎在蜕膜化中的作用
    4.2 ICM在蜕膜化中具有重要作用
    4.3 四倍体胚胎中滋养细胞的功能
    4.4 建立一种新型蜕膜模型
    4.5 四倍体胚胎诱导蜕膜化
    4.6 输卵管非同步移植
    4.7 催乳素家族基因调控
    4.8 载脂蛋白
    4.9 印迹基因
5 结论
参考文献
个人简历
在校期间发表论文情况
致谢

(8)IL-10对子宫腺肌症不孕患者内膜容受性的调控机制研究(论文提纲范文)

中文摘要
英文摘要
绪论
第一部分 子宫腺肌症不孕患者IVF/ICSI周期治疗临床结局分析
    1. 前言
    2. 材料与方法
    3. 结果
    4. 讨论
第二部分 子宫腺肌症不孕患者内膜IL-10及HOXA10表达调查
    1. 前言
    2. 材料与方法
    3. 结果
    4. 讨论
第三部分 IL-10通过激活STAT3途径上调HOXA10表达促进胚胎粘附
    1. 前言
    2. 材料与方法
    3. 结果
    4. 讨论
第四部分 子宫腺肌症模型小鼠建立并初步探究IL-10及HOXA10表达变化
    1. 前言
    2. 材料与方法
    3. 结果
    4. 讨论
参考文献
综述
    参考文献
附录 缩略词表
附录 主要仪器
攻读学位期间撰写文章情况
攻读学位期间中标基金
致谢

(9)酒精对胚胎转运的影响及机制(论文提纲范文)

中文摘要
Abstract
符号说明
第一部分 酒精调节人输卵管平滑肌的自发性收缩
    前言
    材料与实验方法
    实验结果
    附图
第二部分 急性酒精摄入对小鼠胚胎转运的影响
    前言
    材料与实验方法
    实验结果
    附图
第三部分 慢性酒精摄入对小鼠胚胎转运的影响
    前言
    材料和方法
    实验结果
    附图
讨论
参考文献
致谢
在读期间发表的论文
学位论文评阅及答辩情况表

(10)丙烯酰胺对雌性小鼠的生殖毒性和神经型一氧化氮合酶在卵巢细胞中的表达定位(论文提纲范文)

中文摘要
ABSTRACT
缩略词
文献综述
    第一章 雌性小鼠的生物学特性
        1 小鼠的一般生物学特性
        2 成年雌性小鼠的生殖生物学特性
    第二章 丙烯酰胺的毒性及其影响机理
        1 丙烯酰胺的基本性质
        2 丙烯酰胺的用途及接触、代谢途径
        3 丙烯酰胺的主要毒性作用
        3.1 一般毒性
        3.2 神经毒性
        3.3 遗传毒性
        3.4 生殖毒性
        4 小结
    第三章 一氧化氮合酶与雌性生殖
        1 NOS参与卵泡发育及排卵
        2 NOS参与哺乳动物胚胎着床
        3 NOS参与维持妊娠及启动分娩
        3.1 维持妊娠
        3.2 子宫颈的成熟与分娩
        4 NOS参与的其它生殖过程
        5 NOS在卵巢组织中的表达情况
    参考文献
试验研究
    第四章 丙烯酰胺对雌性小鼠生殖系统毒性的研究
        1 引言
        2 材料与方法
        2.1 材料
        2.2 试剂和试液
        2.3 仪器
        2.4 方法
        3 结果
        3.1 丙烯酰胺对小鼠行为及体重、器官的影响
        3.2 丙烯酰胺对小鼠发情周期的影响
        3.3 丙烯酰胺对小鼠卵巢状态的影响
        3.4 丙烯酸胺对小鼠血清E_2、P_4激素水平的影响
        3.5 丙烯酰胺对小鼠卵巢和脑组织NOS的影响
        4 讨论
        参考文献
    第五章 神经型一氧化氮合酶在小鼠卵巢中的表达定位
        1 引言
        2 材料与方法
        2.1 材料
        2.2 试剂和试液
        2.3 仪器
        2.4 方法
        3 结果
        4 讨论
        参考文献
全文结论
创新点
致谢
发表论文
附录 主要溶液的配制

四、妊娠早期小鼠卵巢、输卵管及子宫内诱导型一氧化氮合酶的分布(论文参考文献)

  • [1]培元补肾安胎方治疗RSA的临床研究及基于内膜衰老的药物机制研究[D]. 奚婷. 北京中医药大学, 2021(01)
  • [2]二补助育汤改善RIF患者子宫内膜容受性的临床疗效及作用机制研究[D]. 梁嘉玲. 北京中医药大学, 2021(01)
  • [3]低氧浓度对牦牛卵母细胞和附植前胚胎发育的影响及其作用机制的研究[D]. 何翃闳. 甘肃农业大学, 2020(01)
  • [4]活血消异方调控子宫内膜异位症大鼠颗粒细胞凋亡与自噬的机制研究[D]. 时光. 中国中医科学院, 2020(01)
  • [5]多模态超声评估子宫内膜容受性在黄体功能不全所致复发性自然流产中的应用研究[D]. 焦岩. 苏州大学, 2020(06)
  • [6]DEHP暴露诱导鹌鹑卵巢与输卵管发育迟滞的机制[D]. 李雪楠. 东北农业大学, 2020
  • [7]小鼠囊胚ICM在蜕膜化中的作用[D]. 李华. 河北农业大学, 2019(03)
  • [8]IL-10对子宫腺肌症不孕患者内膜容受性的调控机制研究[D]. 王俊霞. 南京医科大学, 2018(01)
  • [9]酒精对胚胎转运的影响及机制[D]. 徐同辉. 山东大学, 2016(02)
  • [10]丙烯酰胺对雌性小鼠的生殖毒性和神经型一氧化氮合酶在卵巢细胞中的表达定位[D]. 李健. 南京农业大学, 2009(S1)

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诱导型一氧化氮合酶在早孕小鼠卵巢、输卵管和子宫中的分布
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