克隆细胞系S2D9建立的肿瘤动物模型基本特征研究

一、克隆细胞株S2D9建立的肿瘤动物模型基本特性研究（论文文献综述）

邝爱丽^[1]（2009）在《抗猪传染性胃肠炎病毒S蛋白单克隆抗体的制备及初步应用》文中指出本研究将重组猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）的S蛋白在E.coli中高效表达后,SDS-PAGE分析超声裂解细菌后的目的蛋白均在离心所得沉淀中。利用分步洗涤的方法提纯包涵体,采用切胶、电洗脱的方法纯化目的蛋白,再透析复性和浓缩洗脱液达到纯化回收蛋白的目的,此法获得的蛋白为免疫抗原。将提纯的包涵体用不同浓度的尿素和盐酸胍进行包涵体溶解条件的摸索,最后确定用8M尿素溶解包涵体蛋白。本试验采用分步透析复性法复性目的蛋白,并用镍离子金属螯合亲和层析法纯化目的蛋白,此法获得的蛋白为检测抗原。纯化蛋白经Western blotting检测能保持其原有的反应特异性。通过在PK-15细胞上增殖猪传染性胃肠炎病毒,浓缩纯化制备了全病毒检测抗原。以重组TGEV S蛋白为检测抗原时,最终确定ELISA的最佳工作条件为:包被抗原量为4μg/mL,包被液为CBS（pH9.6、0.05M）,包被条件为4℃过夜,封闭物为1%明胶,封闭时间为1.5h,一抗稀释度为1:1600,酶标二抗最佳工作浓度为1:1000,底物作用时间为15min。以TGEV全病毒为检测抗原时,最终确定ELISA的最佳工作条件为:包被抗原量为1:400,包被液为CBS（pH9.6、0.05M）,包被条件为37℃作用1h,4℃过夜,封闭物为1%明胶,封闭时间为1h,一抗稀释度为1:200,酶标二抗最佳工作浓度为1:1000,底物作用时间为15min。将纯化的重组TGEV S蛋白免疫Balb/c小鼠,按常规方法进行融合,用间接ELISA方法进行筛选,采用有限稀释法,经过3次克隆,最终获得3株抗重组TGEV S蛋白的杂交瘤细胞株,分别命名为1G6,2F8和3E5。3株杂交瘤细胞在体外长期培养和长期冻存复苏,抗体分泌能力有轻微下降,但仍能稳定地分泌抗体。间接ELISA检测3株细胞培养效价分别为1:3200、1:6400、1:6400,小鼠腹水效价分别为1:5×105、1:5×106、1:5×106。交叉试验结果显示,所制备的3株单抗与猪瘟病毒（CSFV）、猪圆环病毒2型（PCV2）、猪细小病毒（PPV）均无交叉反应。Western blotting结果证实,3株单克隆抗体与重组TGEV S蛋白均能发生特异性结合。利用腹水单抗建立了检测TGEV S蛋白的单抗介导双夹心间接ELISA方法,将此法进行4次重复性试验,结果差异不显着,说明该双夹心间接ELISA方法具有良好的稳定性。所有的实验结果表明,所制备的抗重组TGEV S蛋白的单抗对病原检测具有很强的特异性,为TGE疫情监测和准确快速的病原诊断与鉴别诊断奠定了基础。

王险峰^[2]（2006）在《四个H22克隆细胞株的RAPD特征及H22-H8D8传代细胞的生物学特性研究》文中提出目的:可移植性肿瘤动物模型,可以客观的模拟人类肿瘤的发生、发展过程。因此,在人类肿瘤的发病机理和抗肿瘤药物的筛选研究中被广泛采用。由于肿瘤细胞株在长期的保存传代过程中,受到各种不稳定因素影响。例如细胞遗传污染和基因变异等。故经过一段时间之后,肿瘤细胞的遗传物质可能发生变异,并导致其生物学特性的改变,从而降低肿瘤动物模型的均一性和可比对性。因此要想保证肿瘤动物模型的稳定性,必须对肿瘤细胞株进行质量监控。小鼠肝癌22（H22）是最常用的小鼠可移植性肿瘤细胞系之一,广泛应用于小鼠肿瘤动物模型的复制。由于该细胞株建立已有五十多年历史,许多学者报告它已发生较大遗传变异,并且在不同研究机构中所保存的细胞株亦有很大差异。刘军须等对H22细胞株进行了克隆化处理,得到经筛选的4个克隆细胞株,分别为H22-H8D8、H22-H2C4、H22-H2G4、H22-H2E10,其中H22-H8D8克隆株基本符合H22原细胞系生物学特性,并具有性质稳定和表现均一的特点,已经被中国典型培养物保藏中心收藏。目前他们选用已知的单抗和核酸探针与H22-H8D8进行反应,初步建立肿瘤细胞株遗传变异的检查方法。随着分子生物学技术的发展,许多分子生物学的方法已逐渐运用到肿瘤细胞的遗传检测中。随机扩增多态性DNA

贺文,刘福英,王俊霞,张焕铃^[3]（2005）在《5个S180克隆细胞株RAPD特征及S180-S2D9传代细胞生物学特性研究》文中研究表明目的研究5个S180克隆细胞株随机扩增多态性DNA（RAPD）特征以及S180-S2D 9传代细胞的生物学特性。方法运用23条引物对S180-S2D 9、S180-S2D 7、S180-S1F 11、S180-S1H 10、S180-S1B 11的基因组DNA进行RAPD-PCR扩增,以琼脂糖电泳观察结果;对S180-S2D 9原代、25代、50代、75代细胞基因组DNA,进行RAPD分析;计数染色体数目;原代、50代细胞分别接种入KM小鼠腹腔,观察腹水的生长情况及小鼠的存活天数;流式细胞仪测DNA含量。结果筛选出3条在各克隆株扩增产物间有差异的引物,通过这3条引物分析S180-S2D 9的RAPD特征,原代、25代、50代、75代细胞之间的RAPD条带无差异;原代、25代、50代、75代细胞的染色体数差异无统计学意义。原代、50代细胞分别接种于10只昆明小鼠腹腔,两组的存活天数分别为1323 d、1320 d,原代与50代组存活天数的差异无统计学意义。流式细胞仪测DNA相对含量分别为0.3890、0.3542、0.3575、0.3984。以上结果提示,S180-S2D 9传到75代时未发现遗传变异。结论可以运用RAPD-PCR技术对克隆细胞株进行质量控制。S180-S2D 9克隆株性质均一,致瘤特性稳定。

贺文,张焕玲,王俊霞,刘福英^[4]（2005）在《对5个S180克隆细胞株RAPD特征的研究》文中研究说明目的运用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术建立S180的5个克隆细胞株的特异性图谱。方法运用23条引物对S180-S2D9、S180-S2D7、S180-S1F11、S180-S1H10、S180-S1B115个克隆细胞株的基因组DNA进行RAPD-PCR扩增,以琼脂糖电泳观察结果。结果筛选出3条在各克隆株扩增产物间有差异的引物。结论5个S180克隆细胞株的RAPD特征有明显区别。

贺文,岳红坤^[5]（2005）在《S180-S2D9传代细胞的DNA指纹图谱、细胞核型、生物学特性及DNA含量的比较研究》文中研究指明目的:通过比较S180-S2D9传代细胞的DNA指纹图谱、细胞核型、生物学特性及DNA含量,对其进行质量控制.方法:提取S180-S2D9传代细胞的DNA后,进行RAPD分析;细胞培养加秋水仙碱,涂片、染色后,显微镜下计数染色体数目;原代、50代、100代细胞分别接种KM小鼠腹腔,观察腹水的生长情况及小鼠的存活天数;培养的细胞用70%乙醇固定,流式细胞仪测DNA含量.结果:与原代、50代细胞相比,100代细胞的DNA指纹图谱发生变异;50代、100代、100代克隆株1、100代克隆株2、100代克隆株3,其染色体均数做方差分析表明,两两单位比较均无显着统计学差异（P>0.05）.原代、50代、100代细胞分别接种于10只昆明小鼠腹腔,3组的存活天数分别为13～23d、13～20d、10～14d,与原代、50代相比,100代均数有显着统计学差异（P<0.05）,原代与50代均数比较无显着统计学差异（P>0.05）.流式细胞术DNA含量分析表明,5株细胞的相对分子质量分别为0.3575、0.3984、0.3542、0.3919、0.3890.结论:在细胞核型与DNA含量的比较上,5株细胞无显着统计学差异;在DNA指纹图谱与对小鼠致死性方面提示传代细胞发生了变异.

张学军,潘崚,王福旭,董作仁,刘泽林,姚丽,杜行严^[6]（2005）在《雷公藤甲素治疗异基因骨髓移植后aGVHD的实验研究》文中指出目的:探索雷公藤甲素（TWH）对异基因HSCT中aGVHD的治疗作用及其机制,并研究雷公藤甲素对移植物抗肿瘤（GVT）作用的影响和对移植物植入的影响。方法:（1）以B6为供者,致死性照射的CB6F1为受者,建立基因半相合移植动物模型;以CB6F1为受者,皮下接种S180细胞并照射,建立基因半相合移植荷瘤aGVHD模型;BALB/c小鼠背部皮下注射S180细胞并照射,建立同基因移植荷瘤动物模型。各组动物分别给予不同剂量TWH及CsA。观察TWH对GVHD、GVT的影响。（2）MTT法测定TWH抑制脾淋巴细胞增殖作用和TWH的体外抑瘤作用。（3）ELISA法测定移植后动物血清IL-4、IFN-γ水平。（4）甲基纤维素半固体培养基检测CFU-GM生成率。结果:（1）小剂量TWH（<1μg/d）降低aGVHD发病率,延长动物生存时间;小剂量TWH与小剂量CsA在预防GVHD方面有协同作用。（2）TWH在抑制aGVHD的同时,保留GVT作用,延长了荷瘤动物生存时间,而无GVHD的同基因移植荷瘤动物生存期缩短。（3）TWH可抑制脾细胞增殖,降低血清IFN-γ水平。（4）一定剂量TWH（<1μg/d）不影响干细胞植入和CFU-GM的产率。结论:TWH具有抑制aGVHD保留GVT的作用,可与CsA协同作用预防异基因HSCT中aGVHD。

牛彦平,王秀芳,徐增年,吕占军^[7]（2004）在《p53、CDK4基因引物扩增的cDNA-Biotin探针与4株克隆瘤细胞原位杂交》文中指出目的用p5 3、CDK4基因引物扩增的生物素标记的互补DNA（cDNA Biotin）探针 ,检测S2D9、H2D8、E2G8及L3E1 1克隆瘤细胞株中 p5 3、CDK4相关基因表达的差异。方法提取S2D9、H2D8、E2G8及L3E1 1克隆细胞总RNA ,分别用p5 3、CDK4基因引物经反转录聚合酶链反应 （reversetranscriptionpolymerasechainreaction ,RT PCR）扩增。扩增产物用 6 %聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,经银染显色后 ,切下 4个克隆细胞间有差异的条带 ,回收DNA再次扩增 ,扩增产物经纯化后用生物素标记 ,制成生物素标记的cDNA探针 ,再与 4株克隆瘤细胞涂片 ,做探针原位杂交。结果 4个克隆瘤细胞株的RNA与 2种引物RT PCR后 ,获得 2 2条可以进行克隆的cDNA ,取其中 1 1条经生物素标记成cDNA探针。这些探针多数与不同瘤细胞株杂交显示较明显差异。结论这些自制的cDNA Biotin探针可以作为质控克隆瘤细胞株的试剂

贺文^[8]（2004）在《5个S180克隆细胞株RAPD特征及S180-S2D9传代细胞生物学特性研究》文中研究说明目的：恶性肿瘤目前是世界上对人类生命健康威胁最大的疾病之一，肿瘤机理的探讨及抗肿瘤药物的开发受到全世界的普遍关注。国内外广泛应用可移植性肿瘤动物模型进行肿瘤机理探讨及抗肿瘤药物筛选，为了比较不同药物的有效性，建立的肿瘤动物模型的特性应稳定，若想保证肿瘤动物模型的稳定性，必须对肿瘤细胞株进行质量控制。科研和药物筛选需要有质量控制的肿瘤动物模型，国内、外此方面的工作尚不充分。小鼠肉瘤180（S180）是最常用的小鼠可移植性肿瘤细胞系之一,广泛应用于小鼠肿瘤动物模型的复制。由于该细胞建立已近百年历史,引进我国亦有50年历史,许多学者报告它已发生较大遗传差异, 并且在不同研究机构中所保存的细胞株亦有很大差异。王秀芳等（2000）对S180细胞进行克隆化处理，得到经筛选的5个克隆细胞株，分别为S180- S2D9、S180-S1B11、S180-S1F11、S180-S1H10、S180-S2D7，其中S180- S2D9性质均一，在致瘤性方面基本保留了原S180特性，已被中国典型培养物保藏中心收藏。目前他们选用已知的单抗和核酸探针与S180-S2D9进行反应，初步建立可以发现肿瘤细胞株遗传变异的检查方法。现代分子生物学技术可以直接对肿瘤细胞株DNA分子进行分析，这使肿瘤细胞株质量控制进入一个新领域。随机<WP=5>扩增多态性DNA（RAPD）可适用于任何一种未知基因核苷酸序列的生物学研究,并且它能客观地反映生物整个基因组的特征。近年来已有大量应用RAPD技术研究物种遗传多样性的报道。本研究拟从23条引物中筛选出能区分5个S180克隆细胞株的特异性引物，以对5个S180克隆细胞株进行RAPD特征分析研究,同时从细胞核型、DNA含量及荷瘤小鼠寿命等方面研究S180-S2D9传代细胞的特性,为进一步比较分析其遗传背景提供基础资料。方法：第一、选用23条引物对5个S180克隆细胞株（S180-S2D9、S180-S2D7、S180-S1F11 、S180-S1H10 、S180-S1B11）进行RAPD特征的分析研究:1、基因组DNA的制备：用传代细胞系作供体细胞，集细胞总数在1×108个，用PBS液洗涤及TE缓冲液重悬细胞，加入DNA裂解液，55℃过夜，以Tris饱和酚及氯仿－异戊醇（24：1）分别抽提，然后加入醋酸钠及无水乙醇沉淀得到基因组DNA,75％的乙醇洗涤后无菌三蒸水溶解待用。 2、RAPD特征分析：运用23条引物对S180-S2D9、S180-S2D7、S180-S1F11 、S180-S1H10 、S180-S1B11 5个克隆株的基因组DNA进行RAPD-PCR扩增，反应过程包括40个循环，每个循环包括94℃变性1min，36℃退火1min，72℃延伸2min，最后一次循环后于72℃延伸10min，首次循环前94℃预变性2min。扩增产物以琼脂糖电泳观察结果。第二、对S180-S2D9原代、25代、50代、75代细胞，提取基因组DNA后，运用筛选出的3条引物（1118－1：AAGTCCGCTC、1118－2：GACAGGAGGT、P－04：GTGTCTCAGG）进行RAPD-PCR分析；培养的原代、25代、50代、75代细胞，<WP=6>秋水仙碱处理后6h，取细胞作染色体制片，Gimesa染液染色，油镜观察，计数100个有丝分裂相细胞；原代、50代细胞（原代、50代各约1.0×106个细胞/只）分别接种KM小鼠腹腔；S180-S2D9原代、25代、50代、75代细胞培养液分别离心后,PBS洗2次，用75%乙醇固定，正常小鼠胸腺淋巴细胞做对照，流式细胞仪测DNA含量。结果1 本研究用了23条引物进行扩增，其中只有一条引物未能扩增出RAPD条带，其余22条引物均能扩增出条带，其中3条引物（1118－1：AAGTCCGCTC、1118－2：GACAGGAGGT、P－04：GTGTCTCAGG）在5个克隆株中具有很好的多态性；2 运用上述3条引物对S180-S2D9原代、25代、50代、75代的基因组DNA进行扩增，4代之间的RAPD条带未发现差异；3 S180-S2D9原代、25代、50代和75代细胞，其染色体均数分别为54.170±14.068、56.220±16.580、54.202±10.496、54.380±13.112。染色体数作方差分析表明，两两单位比较均无显着统计学差异（p>0.05）；4 用流式细胞仪对S180-S2D9的原代、25代、50代和75代细胞进行 DNA含量分析，其G0/G1期细胞的均道值分别为59.00, 59.00, 59.00, 57.00，根据G0/G1期细胞的均道值计算它们的DNA含量，分别为0.3890、 0.3542、0.3575、0.3984pg/细胞；5 S180-S2D9原代、50代细胞（原代、50代各约1.5×106个细胞/只）分别接种KM小鼠腹腔，均可产生血性腹水，<WP=7>小鼠存活天数分别为13～23d、13～20d，原代与50代组小鼠存活天数的均数比较无显着统计学差异（p>0.05）。结论1 5个S180克隆株的基因组之间存在差异,引物（1118-1:AAGTCCGCTC;1118-2:GACAGGAGGT;P-04:GTGTCTCAGG）能够区分5个克隆细胞株；2 本实验结果显示S180-S2D9原代、25代、50代、75代之间的RAPD条带没有差异,提示在体外培养条件下，S180-S2D9克隆细胞株传至75代时，RAPD方法未发现遗传变异，染色体计数、DNA含量和荷瘤小鼠寿命结果与RAPD扩增结果相一致。

潘月龙^[9]（2003）在《微囊化转Maspin、IL-12基因细胞治疗恶性肿瘤的实验研究》文中提出细胞因子治疗是目前临床应用最多、疗效最肯定的生物治疗，IL-2、INF、CSF等在临床上得到了广泛的应用，并取得了一定的效果，但是，由于存在以下缺点而使临床疗效不满意。①细胞因子在体内的生物半衰期较短，一般认为静脉注射为5～7分钟，24小时内消失殆尽。因此，要保证有效浓度必须持续大剂量静脉给药或间断皮下注射。大剂量静脉给药可引起严重的副作用，如血管渗漏综合征，直立性低血压及严重潜在不适，况且，细胞因子疗法的特点是长期低剂量给药效果好，然而长期反复皮下注射，病人难以坚持，因此，临床上不易达满意效果。②基因工程细胞因子（重组细胞因子）的纯度和活性尚不够满意。目前应用的重组细胞因子均为原核细胞产生，细菌蛋白和脂多糖和纯化过程中的有机溶剂很难被彻底清除，因此临床应用容易产生发热等流感样症状，其它隐性危害尚不清楚。同样，细胞因子的活性也因生产、贮存和运输等方面的影响而不易保证。 基因治疗是通过人工方法改变靶细胞的基因结构从而获得疗效，主要策略分为基因转移和基因灭活两大类。基因转移是目前最主要的方法，即是将外源性目的基因（包括细胞因子、MHC分子、共刺激分子、抗癌基因、反义核酸、抗肿瘤药物相关基因及病毒基因等）导入病变细胞或其它细胞，目的基因的表达产物改变缺陷细胞的功能或使原有的功能得到加强，包括免疫基因治疗、靶向化疗或提高机体化疗耐受性以及增强抗癌基因的表达等方案。操作过程包括基因克隆、构建质粒、转染、细胞培养利细胞移植等复杂操作。（1）自体细胞作为载体：细胞移植后不会产生免疫排斥反应，但需对每一位病人进行以上操作，不仅工作量巨大、费用较高，而且质量难以保证。因此，不易在临床上广泛应用。（2）异体／种细胞作为载体：因免疫排斥而难以进行移植。（3）基因直接注射：有可能整合到宿主基因组，存在不安全隐患。 微囊化基因工程细胞可以克服上述的不足，基因工程细胞是指利用各种基因转移方法将外源目的基因导入靶细胞，使靶细胞表达并分泌相应的蛋白活性物质。基因工程的优点在于可按照自己的目的和意愿，在体外人工将DNA分子“剪切”并重新“拼接”，形成一个新的杂合的DNA分子，然后将其导入原核或真核细胞内，使该基因在细胞中表达，产生所需 浙江大学博士学位论文要的基因产物。然后将基因工程细胞进行微囊化，把微囊化基因＿卜程细胞作为功能细胞进行体外实验研究和体内治疗、免疫隔离等研究利应川。 微囊的主要特点是：具有半通透性，允许小分于营养物质、水和氧等白由出入，以保证微囊内细胞的正常需要，同时允许目的生物活性物质分泌出微囊外，以发挥其功能；但抗体。淋巴细胞等不能进入，从而保护微囊化细胞免受机体抡疫系统的攻击【’－‘］。微囊化技术克服了兔疫排斥反应，因而使异体／种移植成为可能，使用永生化细胞系统为基冈卜程细胞，所表达的蛋白产物对所有同种疾病病人均能产生治疗作用，由丁细胞包裹在微囊内，可以在体内氏期分泌目的产物。这种表达异源蛋白的优势还在丁：（l）无需对基冈产物进行化学提纯，避免提纯试剂对人体的潜在危害，并且人人降低了L作量和成本；（2）无需改变宿主的基冈组，具有女全性；（3）可批量生产，冻存后随时移植给所需病人，可起到细胞“银行”的作用，避免了自身体细胞基因治疗时每个病人都需要取囱身细胞，并进行培养、基口修饰、筛选等一系列烦琐的操作，这样既保证质量控制，又可人人降低费川；（4）按照治疗需要，控制功能蛋肉的持续性和阶段性表达【’、‘］。微囊化技术在治疗机能赊码和特殊窜要细胞功能丧失性疾病等方面研究和应用较多I卜’人 微囊化基因工程细胞技术是微囊技术与基冈卜程技术的有机结合。具体操作过出为： （1）带有目的基因（外源基因）的＊＊A片段的获得：（2）＊＊A片段与载体＊＊A的壮按 （体外重组）；（3）连接产物导入宿主细胞（受体细胞）：（4）重组体的扩增、筛选与鉴定； （5）目的基因在细胞中的表达；（6）表达产物的分离与鉴定；（）基冈1－程细胞的微囊化； （8）微囊化细胞的体外培养，观察细胞的生K状况利目的基因的蛋白产物的微囊外分泌悄况；（9）建立动物模型，体内移植微囊化细胞，观察治疗效果；（IO）临床应川卜’‘”］。 Maspin是1994年iou等通过上常乳腺上皮与乳腺癌进行减数杂交利芹异显示技术得刮的一种新基冈，研究显示Maspin是一肿瘤抑制基冈，在肿瘤细胞的运动、侵袭、转移及新生血管形成等方面起着重要作川＊－22］ 白细胞介素－12（I－12）在介导机体兔疫反应中起着关键性作川，在体山有抗血管形成作用，有抑制肿瘤细胞生K、运动和侵袭作川l”’＼ IL门还与某些化疗钓物产生协同作川【’飞重组IL刁 已进入临床试验阶段，但全乌应川发现有严重的毒副作川，如胄肠道山血、肝毒性和贫血，其中有引起死亡的报道【’‘］。比．12的基冈治疗同样显示出强人的抗肿瘤铆p，但需将IL－12基冈转染白体的肿瘤细胞或成纤维细胞，要对每一病?

王秀芳,吕占军,刘福英,徐增年,刘军须^[10]（2001）在《克隆细胞株S2D9建立的肿瘤动物模型基本特性研究》文中提出目的 研究从S180获得的克隆细胞株S2D9,接种 4个不同品 （种 ）系小鼠建立肿瘤动物模型的某些基本生物学特性。方法 由KM小鼠腹腔传代的S2D9克隆细胞 ,用GKN稀释成不同浓度 ,接种KM、DBA 2、6 15、C57BL 6小鼠右腋皮下及腹腔 ,观察小鼠最早出现可见肿块、腹水时间及小鼠生存时间 ;不同品 （种 ）系小鼠经皮下接种S2D9细胞 ,建立肿瘤模型 ,从接种后第 5日 ,每日观察肿瘤生长情况 ,测量肿块直径 （cm） ,绘制肿瘤生长曲线 ;S2D9克隆细胞株接种BALB c小鼠皮下 ,取接种第 7日肿块 ,经石蜡切片 ,HE染色 ,观察病理结果 ;不同品 （种 ）系小鼠皮下接种S2D9瘤细胞建立的动物模型 ,经腹腔注射环磷酰胺 （CTX）或顺胺氯铂 ,观察S2D9克隆细胞肿瘤模型对CTX或顺胺氯铂治疗的敏感性。结果 S2D9克隆细胞在 6 15及DBA 2小鼠的皮下较KM及C57BL 6小鼠容易生长肿瘤 ;在KM及DBA 2小鼠腹腔较C57BL/ 6及 6 15小鼠容易长出腹水 ;皮下接种KM、C57BL/ 6、6 15及DBA 2四个不同品（种 ）系小鼠 ,第 12天瘤重分别为 （2 3± 0 9）g ,（0 8± 0 2 ）g ,（2 0± 0 2 ）g及 （1 9± 0 1）g;S2D9瘤细胞接种 4个不同品 （种 ）系小鼠制备的肿瘤模型 ,用CTX治疗 ,抑瘤率分别为 80 % （6 15 ） ,75 % （C57BL 6 ） ,6 8 4% （DBA 2 ） ,6 5 2 %（KM） ;用顺胺?

二、克隆细胞株S2D9建立的肿瘤动物模型基本特性研究（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、克隆细胞株S2D9建立的肿瘤动物模型基本特性研究（论文提纲范文）

（1）抗猪传染性胃肠炎病毒S蛋白单克隆抗体的制备及初步应用（论文提纲范文）

（2）四个H22克隆细胞株的RAPD特征及H22-H8D8传代细胞的生物学特性研究（论文提纲范文）

（4）对5个S180克隆细胞株RAPD特征的研究（论文提纲范文）

（6）雷公藤甲素治疗异基因骨髓移植后aGVHD的实验研究（论文提纲范文）

（8）5个S180克隆细胞株RAPD特征及S180-S2D9传代细胞生物学特性研究（论文提纲范文）

（9）微囊化转Maspin、IL-12基因细胞治疗恶性肿瘤的实验研究（论文提纲范文）

（10）克隆细胞株S2D9建立的肿瘤动物模型基本特性研究（论文提纲范文）

四、克隆细胞株S2D9建立的肿瘤动物模型基本特性研究（论文参考文献）

• [1]抗猪传染性胃肠炎病毒S蛋白单克隆抗体的制备及初步应用[D]. 邝爱丽. 河南农业大学, 2009(06)
• [2]四个H22克隆细胞株的RAPD特征及H22-H8D8传代细胞的生物学特性研究[D]. 王险峰. 河北医科大学, 2006(11)
• [3]5个S180克隆细胞株RAPD特征及S180-S2D9传代细胞生物学特性研究[J]. 贺文,刘福英,王俊霞,张焕铃. 四川大学学报(医学版), 2005(06)
• [4]对5个S180克隆细胞株RAPD特征的研究[J]. 贺文,张焕玲,王俊霞,刘福英. 中国实验动物学报, 2005(03)
• [5]S180-S2D9传代细胞的DNA指纹图谱、细胞核型、生物学特性及DNA含量的比较研究[J]. 贺文,岳红坤. 中国医药导刊, 2005(05)
• [6]雷公藤甲素治疗异基因骨髓移植后aGVHD的实验研究[J]. 张学军,潘崚,王福旭,董作仁,刘泽林,姚丽,杜行严. 中国免疫学杂志, 2005(08)
• [7]p53、CDK4基因引物扩增的cDNA-Biotin探针与4株克隆瘤细胞原位杂交[J]. 牛彦平,王秀芳,徐增年,吕占军. 河北医科大学学报, 2004(02)
• [8]5个S180克隆细胞株RAPD特征及S180-S2D9传代细胞生物学特性研究[D]. 贺文. 河北医科大学, 2004(04)
• [9]微囊化转Maspin、IL-12基因细胞治疗恶性肿瘤的实验研究[D]. 潘月龙. 浙江大学, 2003(04)
• [10]克隆细胞株S2D9建立的肿瘤动物模型基本特性研究[J]. 王秀芳,吕占军,刘福英,徐增年,刘军须. 中国实验动物学杂志, 2001(04)

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