一、氟骨症患者心血管系统损害的研究（论文文献综述）
高彦辉[1]（2022）在《基于流行病学证据明确氟对多器官系统影响是当前迫切需要解决的科学问题》文中指出在过去的20年, 我国地方性氟中毒（地氟病）防控工作取得了显着的成效, 除饮茶型地氟病之外, 饮水型地氟病和燃煤污染型地氟病已经得到了有效的控制, 部分地区已经达到了消除水平。目前, 地氟病防治已经从如何落实防治措施转向如何纠正健康损害, 但三个主要问题必须加以解决:一是氟暴露导致的多器官系统损伤的特点和程度需进一步明确;二是氟中毒发病机制依然不清楚;三是氟中毒有效干预手段还比较有限。这些问题仅仅依靠实验室工作难以根本解决, 迫切需要提供更多的流行病学证据。
丁雪,贾莹,刘纯,杨世榕,赖灵妍,杨桦,丁琪[2]（2022）在《慢性氟中毒SD大鼠正畸牙移动的位移及速率变化》文中研究表明背景:临床报道氟牙症患者正畸疗程比非氟斑牙的时间要长,但其牙移动速度减慢主要体现在牙移动周期的哪些环节还不清楚。目的:研究一个牙移动周期内染氟大鼠正畸牙移动的位移、速率变化规律,为以后的相关机制研究及氟牙症患者的正畸治疗提供实验依据。方法:3周龄SD大鼠12只随机分为染氟组和对照组,每组6只,雌雄各半,150 mg/L氟化钠水溶液每日喂养染氟组大鼠复制氟中毒模型,然后两组大鼠装配镍钛拉簧正畸加力装置,以70 g力值近中移动双侧第一磨牙,在第0,3,7,14,21,28天使用高精数显游标卡尺（最小精度0.01 mm）测量上颌第一磨牙近中面龈缘中点至同侧上颌中切牙远中-舌-龈角的间距,观察第一磨牙近中移动的位移和速率变化。结果与结论:（1）染氟组大鼠出现Ⅱ-Ⅲ级氟牙症,尿氟高于正常水平（P <0.05）,表明慢性氟中毒模型复制成功;（2）两组大鼠牙移动的总位移及总速率无明显性别差异;（3）染氟组牙移动的总位移及总速率有低于对照组的趋势,但观察期内尚无统计学差异;（4）随时间延长,两组大鼠牙移动的分段位移和分段速率呈现先增加后降低然后回升的趋势,且染氟组回升更明显;（5）结果表明,从全周期时间维度上看,慢性氟中毒大鼠牙移动受到一定程度抑制,总位移及总速率均减小,且无明显性别差异;慢性氟中毒大鼠正畸牙移动符合典型的牙移动周期特征,即"快速-迟缓-回升"3个阶段,迟缓期缩短,提示可能有破坏性改建。
冉龙艳[3]（2021）在《NRH：醌氧化还原酶2介导慢性氟中毒大鼠脑组织氧化应激损伤及自噬功能改变的机制研究》文中认为目的:长期摄入过量的氟能够通过血脑屏障沉积在脑组织中,引起中枢神经病理学改变和认知功能障碍,导致慢性氟中毒性脑损伤。其海马区功能和分子水平的变化机制研究,是目前慢性氟中毒脑损伤的研究重点。氧化应激学说对慢性氟中毒引起的机体多系统病理改变能给出较全面的和相对合理的解释,是慢性氟中毒脑损伤机制中较重要的支撑性理论,但仍需继续丰富和进一步证实。近年来,已发现慢性氟中毒导致的中枢神经系统损伤与自噬水平改变有关,且自噬在氧化应激产生的细胞信号传导改变和细胞损伤过程中起到关键作用。NRH:醌氧化还原酶2（NRH:quinone oxidoreductase 2,NQO2）具有高活性分子特征,能够导致活性氧（Reactive oxygen species,ROS）产生,加重氧化应激损伤,也能造成自噬异常改变。但是,在慢性氟中毒脑损伤机制中,氧化应激水平升高和自噬改变之间是否有相关关系、两者之间是否有关键因子相连接等仍不清楚。本课题主要研究慢性氟中毒导致的大鼠脑组织海马区域氧化应激和自噬功能的改变,并研究氧化应激和自噬改变之间是否通过NQO2相连接,来探讨慢性氟中毒脑损伤的发生机制。方法:1、慢性氟中毒大鼠研究:（1）动物模型复制:采用不同含氟浓度饮水（5 ppm,50 ppm和100 ppm）分别饲喂Sprague-Dawley（SD）大鼠3个月和6个月,复制慢性氟中毒动物模型。实验结束时观察大鼠氟斑牙形成,测定大鼠血液、尿液、骨组织和脑组织中含氟量,用以评价模型复制情况。（2）动物行为学研究:使用Morris水迷宫开展定向巡航实验和空间探索实验以评价长期摄入氟对实验动物学习和记忆能力的影响。（3）脑组织病理学观察:用苏木精-伊红染色法检查大鼠脑组织一般组织形态改变;用神经元尼氏染色法观察动物大脑海马区域神经元尼氏小体的变化。（4）海马组织氧化应激水平检测:使用流式细胞仪和生化方法检测大鼠脑组织ROS和脂质过氧化物代谢产物丙二醛（Malonydialdehyde,MDA）含量及超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）活性。（5）海马组织自噬水平检测:使用透射电子显微镜观察大鼠脑组织海马区域神经元亚显微结构变化以及自噬体数量;蛋白印迹法检测自噬相关蛋白,包括:哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（Mechanistic target of rapamycin,m TOR）,自噬相关蛋白5（Autophagy related5,ATG5）,微管结合蛋白1A/1B轻链3B（Microtubule-associated proteins 1A/1B light chain 3B,LC3Ⅱ）和自噬接头蛋白p62（p62/sequestosome-1,p62/SQSTM1）的表达变化;荧光免疫组化检测大鼠海马区域自噬相关蛋白m TOR、ATG5和p62的表达。（6）实验动物海马组织转录组和蛋白组测序以及生物信息学分析:采用高通量RNA测序（RNA-seq）和串联质谱标签（Tandem-Mass-Tag,TMT）蛋白组学技术对大鼠海马组织进行测序;通过差异分析和聚类分析评价高氟处理对于大脑海马组织基因和蛋白层面的影响;使用相关性分析和交集分析获取在基因和蛋白层面协同变化的分子,并挑选与氧化应激和自噬有关的分子——NQO2进行后续研究;转录组和蛋白组测序数据采用实时荧光定量聚合酶链反应（Quantitative real-time PCR,q RT-PCR）和平行反应检测（Parallel reaction monitoring,PRM）靶向蛋白组学技术进行验证。（7）NQO2表达与自噬及氧化应激相关性:蛋白印迹法检测动物脑组织NQO2的蛋白表达,并与自噬相关蛋白和氧化应激指标进行皮尔森相关性分析。2、体外培养SH-SY5Y（人神经母细胞瘤）细胞NQO2改变相关性机制研究:（1）RNA干扰和小分子药物处理干扰NQO2表达:构建靶向NQO2的干扰慢病毒转染SH-SY5Y细胞,并使用NQO2抑制剂S29434及激活剂Menadione来调控氟处理的SH-SY5Y细胞模型中NQO2的表达;（2）分析靶向调控氟处理的SH-SY5Y细胞模型中NQO2的表达后自噬和氧化应激改变:检测NQO2抑制或活化状态下,氟处理对自噬水平和氧化应激水平的影响。结果:1、慢性氟中毒大鼠模型复制成功:染氟组大鼠出现不同程度的氟斑牙,血液、尿液、骨组织和脑组织中氟含量均明显高于对照组,且与染氟剂量成正相关关系。2、慢性氟中毒大鼠学习记忆能力降低:染氟组大鼠逃避潜伏期明显高于对照组;普遍出现穿台次数减少和在目标象限停留时间减少的现象。3、慢性氟中毒大鼠脑组织神经元病理改变:HE染色显示,经氟处理后大鼠脑组织海马CA3区未见明显形态学变化;尼氏染色结果显示染氟组大鼠脑组织海马CA3区神经元尼氏小体较对照组数量明显减少,染色变浅。4、染氟组大鼠脑组织氧化应激水平增高:慢性氟中毒大鼠大脑海马组织MDA和ROS含量明显升高,SOD活性明显降低。5、透射电镜观察结果:染氟组大鼠海马CA3区神经元细胞出现核型不规则,核膜皱缩、凹陷呈锯齿状、染色质聚集;胞浆内自噬体明显增多,但未见自噬体数量随染氟时间延长而增多的情况。6、慢性氟中毒大鼠海马组织LC3II及p62蛋白水平表达改变:p-m TOR表达降低,ATG5、LC3 II和p62表达升高,提示自噬流阻滞,自噬水平异常。7、转录组学和蛋白组学测序结果:与对照组相比,差异表达基因主要富集在认知功能,学习记忆能力,长时程增效以及自噬调控信号通路中。联合转录组学和蛋白组学分析发现13个变化趋势一致的差异基因,其中NQO2表达差异性最高。8、慢性氟中毒大鼠脑组织NQO2蛋白表达水平改变:蛋白印迹和免疫荧光组织化学结果均显示NQO2在慢性氟中毒大鼠海马组织中呈现高表达状态,与染氟剂量呈正相关关系;NQO2表达量与自噬相关蛋白的变化以及氧化应激指标呈显着相关性。9、体外培养细胞NQO2调节机制研究结果:氟处理后,SH-SY5Y细胞NQO2表达升高,p-m TOR表达降低,ATG5、LC3 II和p62表达升高,提示自噬流阻滞,自噬水平异常;细胞MDA和ROS含量明显升高,SOD活性降低,提示氧化应激水平升高。采用慢病毒干扰和小分子化合物特异性处理调控NQO2表达,结果提示抑制NQO2表达能够降低p62表达,恢复自噬流水平,降低氧化应激影响。结论:1、慢性氟中毒大鼠学习记忆能力降低可能与海马区氧化应激水平升高、自噬功能异常有关:染氟大鼠脑组织ROS及MDA含量增多,SOD活性降低;自噬启动相关蛋白p-m TOR表达降低,自噬体形成相关蛋白ATG5和LC3 II表达增加,自噬溶酶体功能相关蛋白p62积累。2、慢性氟中毒大鼠智力损伤与海马区基因及蛋白水平改变密切相关:差异基因主要出现在富集于与学习、记忆能力和大脑奖赏机制相关的信号通路;部分与认知相关的基因改变持续存在,无法逆转。3、慢性氟中毒大鼠海马组织NQO2增加,可能促进氧化应激水平增加及自噬功能异常:NQO2升高与染氟剂量有关,且与自噬功能异常和氧化应激水平显着相关。4、氟可以促进自噬启动,在一定程度是一种代偿性保护机制;但是随着损伤积累,自噬流不畅,自噬清除功能受阻。而抑制NQO2能够降低氧化应激水平、恢复自噬流通畅,提示NQO2可能是调控自噬流的关键因子。
张佳勇[4]（2021）在《不同膳食钙水平下氟暴露致雄性小鼠生殖毒性及分子机制》文中研究表明氟（fluorine,F）是人体必需微量元素,过量氟蓄积造成机体全身性生理病理异常变化,称作地方性氟中毒。氟斑牙、氟骨症是机体暴露于氟化物引发骨相器官损伤的主要症状。氟化物还能导致脑、心血管、肾脏等非骨相器官受损。研究表明,过量氟摄入可透过血-睾/附睾屏障,在生殖器官中蓄积,损伤雄性生殖系统。近年来,氟中毒致雄性生殖系统的影响已成为地氟病研究热点。Ca2+是机体细胞内重要的“第二信使”,也是Ca2+信号转导实现一系列生理功能的关键因子。已有文献报道,钙的补充可以减少机体对氟的吸收及其毒性,降低细胞凋亡率,但迄今不同钙水平下氟暴露致雄性生殖毒性的影响及分子机制尚未见系统报道。本实验选用初断乳ICR雄性小鼠120只,适应饲养环境7天后,按体重随机数表法分为6组。染氟3个月和6个月后,先观测小鼠氟斑牙,并检测其血/尿氟、血/尿钙含量,测睾丸细胞自由基NO含量、NOS和抗氧化酶CAT活性以及雄性生殖内分泌T、LH和FSH水平;观察睾丸细胞形态结构、精子超微结构;观测睾丸细胞凋亡率和Ca2+水平、检测睾丸细胞膜L-型钙通道Cav1.2、内质网应激伴侣分子GRP78、内质网应激凋亡通路信号分子IRE1、TRAF2、ASK1、JNK、Caspase-3基因/蛋白的表达水平,拟首次从内质网途径系统研究氟暴露对雄性生殖毒性的影响及分子机制,为探寻氟致雄性生殖毒性经济有效的干预途径及完善“氟致钙矛盾疾病”理论提供基础资料。研究结果如下:（1）小鼠亚慢性和慢性氟中毒模型复制与C组比,亚慢性和慢性氟暴露各染氟组氟斑牙症状明显,尿氟含量均极显着上升（P<0.01）,结果表明本实验小鼠亚慢性和慢性氟暴露模型均复制成功。（2）小鼠睾丸组织NO含量、NOS和抗氧化酶CAT活性检测统计结果与F组比,亚慢性/慢性氟暴露LCa+F组小鼠睾丸组织CAT活性显着或极显着降低（P<0.05或P<0.01）,NOS活性和NO含量显着升高（P<0.05）,HCa+F小鼠睾丸组织CAT活性显着或极显着升高（P<0.05或P<0.01）,HCa+F组小鼠睾丸组织NOS活性和NO含量显着或极显着降低（P<0.05或P<0.01）。（3）小鼠血清睾酮、促黄体激素、促卵泡素水平检测统计结果与F组比,慢性氟暴露HCa+F组小鼠血清睾酮水平显着升高（P<0.05）,促黄体激素和促卵泡素水平显着降低（P<0.05）。（4）小鼠睾丸细胞形态结构观察与F组比,LCa+F组各级精原细胞结构疏松程度加剧,精子数量进一步减少,而HCa+F组精原细胞、间质细胞、精母细胞和精子数量有所增加。（5）小鼠附睾中成熟精子超微结构观察结果小鼠附睾中成熟精子头部结构观察结果表明,与F组比,LCa+F组精子整体结构不完整,顶体部分缺失,双层膜断裂;而HCa+F组精子形态结构相对正常,顶体清晰可见,双层膜较完整。小鼠附睾中成熟精子尾部中段纵切面结构观察结果显示,与F组比,LCa+F组线粒体结构不完整,排列疏松,线粒体缺失,双层膜脱落;而HCa+F组线粒体形态规则,大小均匀,排列稍有疏松。小鼠附睾中成熟精子尾部中段横切面结构观察结果显示,与F组比,LCa+F组线粒体缺失,线粒体和细胞膜间隙明显增宽,精子之间界限模糊,HCa+F组线粒体形态较模糊,结构完整,细胞膜清晰可见。（6）小鼠睾丸细胞凋亡检测结果与F组比,亚慢性和慢性氟暴露LCa+F组小鼠睾丸细胞凋亡数量极显着增加（P<0.01）,而亚慢性和慢性氟暴露HCa+F组小鼠睾丸细胞凋亡数量极显着减少（P<0.01）。（7）小鼠睾丸细胞内Ca2+水平检测结果与F组比,亚慢性和慢性氟暴露LCa+F组小鼠睾丸细胞内Ca2+水平显着升高（P<0.05）,HCa+F组小鼠睾丸细胞内Ca2+水平显着或极显着降低（P<0.05或P<0.01）。（8）小鼠睾丸细胞膜Cav1.2和内质网凋亡信号通路分子mRNA表达统计结果与F组比,亚慢性氟暴露LCa+F组小鼠睾丸细胞GRP78 mRNA表达水平显着升高（P<0.05）,ASK1、TRAF2 mRNA表达水平显着降低（P<0.05）,HCa+F组小鼠睾丸细胞膜Cav1.2和睾丸细胞GRP78、JNK、Caspase-3 mRNA表达水平显着或极显着降低（P<0.05或P<0.01）,IRE1、ASK1、TRAF2 mRNA表达水平显着或极显着升高（P<0.05或P<0.01）。慢性氟暴露LCa+F组小鼠睾丸细胞膜Cav1.2和睾丸细胞GRP78、JNK、Caspase-3 mRNA表达水平显着升高（P<0.05）,IRE1、ASK1、TRAF2 mRNA表达水平显着或极显着降低（P<0.05或P<0.01）,HCa+F组小鼠睾丸细胞GRP78、JNK、Caspase-3 mRNA表达水平显着或极显着降低（P<0.05或P<0.01）,IRE1、ASK1、TRAF2 mRNA表达水平显着或极显着升高（P<0.05或P<0.01）。（9）小鼠睾丸细胞膜Cav1.2和内质网凋亡信号通路分子蛋白表达统计结果与F组比,亚慢性氟暴露LCa+F组小鼠睾丸细胞JNK、Caspase-3蛋白表达水平显着或极显着升高（P<0.05或P<0.01）,IRE1、ASK1、TRAF2蛋白表达水平显着或极显着降低（P<0.05或P<0.01）,HCa+F组小鼠睾丸细胞膜Cav1.2和睾丸细胞GRP78、JNK、Caspase-3蛋白表达水平显着或极显着降低（P<0.05或P<0.01）,IRE1、ASK1、TRAF2蛋白表达水平显着或极显着升高（P<0.05或P<0.01）。慢性氟暴露LCa+F组小鼠睾丸细胞膜Cav1.2和睾丸细胞JNK、Caspase-3蛋白表达水平显着或极显着升高（P<0.05或P<0.01）,IRE1、TRAF2蛋白表达水平极显着降低（P<0.01）,HCa+F组小鼠睾丸细胞膜Cav1.2、GRP78、JNK蛋白表达水平显着降低（P<0.05）,IRE1、ASK1、TRAF2蛋白表达水平显着或极显着升高（P<0.05或P<0.01）。综上所述,氟暴露致雄性小鼠生殖毒性及分子机制可能是:亚慢性和慢性氟暴露致睾丸细胞自由基含量增加,抗氧化能力下降,同时睾丸细胞L-型钙离子通道Cav1.2基因/蛋白表达水平上升,使细胞外Ca2+的内流增加,以致内质网应激过强,睾丸细胞内质网伴侣分子GRP78基因/蛋白显着升高、内质网途径凋亡信号通路分子IRE1、ASK1、TRAF2基因/蛋白显着下降、下游凋亡信号分子JNK、Caspase-3基因/蛋白显着升高,并使睾丸细胞凋亡异常增强,引发内分泌紊乱、最终损伤雄性生殖系统。而膳食高钙（2%）能够显着地逆转上述氟暴露致抗氧化能力异常、细胞内钙超载和睾丸细胞膜、内质网伴侣分子和凋亡调节信号分子异常表达,降低睾丸细胞凋亡率,从而拮抗氟暴露致雄性小鼠生殖损伤。膳食高钙（2%）可能是一种经济有效的抗氟剂。
陈婷[5]（2021）在《基于RANKL/OPG系统的DNA甲基化探讨甜菜碱对氟骨症的影响》文中研究说明第一部分甜菜碱及RANKL/OPG启动子区DNA甲基化与氟骨症关系的病例对照研究目的:最近研究表明DNA甲基化在氟中毒发病机制中起着重要作用。氟化物能破坏骨重塑关键基因核因子（NF）-k B受体激活剂配体（Receptor activator of NF-k B-ligand,RANKL）和骨保护素（Osteoprotegerin,OPG）的表达引起骨代谢性疾病。然而氟化物影响RANKL/OPG表达的甲基化机制尚不清楚。天然营养素甜菜碱具有抗氧化和作为高效膳食甲基供体的重要生物学作用。本研究通过病例对照研究探讨甜菜碱、RANKL/OPG启动子区DNA甲基化以及血清表达水平与氟骨症之间的关系。方法:在贵州省燃煤型氟中毒病区织金县收集本地居住10年及以上18-75岁的218名氟骨症患者,并在同区域招募按性别、年龄（±3岁）进行1:1匹配的正常人作为对照。收集空腹血液、晨尿等生物标本,结构化问卷以面对面访谈的方式收集研究对象的一般人口学信息、燃煤型氟中毒发生的生活行为相关危险因素以及疾病的既往史资料。使用75条目食物频率问卷（Food frequency questionnaire,FFQ）评估研究对象过去1年的膳食营养素摄入情况,对调查对象进行体格检查并收集相应的检查资料。采用离子选择电极法检测人群尿液中氟离子的浓度,靶向亚硫酸盐测序法（Targeted Bisulfite Sequencing,TBS）检测全血标本RANKL和OPG基因启动子区的DNA甲基化水平,酶联免疫吸附法（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测外周血中RANKL和OPG的表达水平。结果:1、膳食甜菜碱与氟骨症的关系。氟骨症病例的尿氟浓度（中位数1.46 mg/L）显着高于健康对照人群（中位数1.18 mg/L）（P<0.001）,且健康对照人群的甜菜碱摄入量（中位数109.90 mg/day）明显高于氟骨症患者（中位数82.68 mg/day）（P<0.001）。条件Logistic回归分析模型校正人群一般信息、燃煤型氟中毒生活行为危险因素以及膳食营养因素后,结果显示甜菜碱摄入量与氟骨症发生风险呈负相关关系(P-trend<0.05)。甜菜碱摄入量的第二分位、第三分位为以及第四分位与第一分位相比较,校正的OR和95%CI分别为0.58（0.29,1.19）、0.43（0.20,0.93）和0.36（0.13,0.96）。2、RANKL和OPG基因启动子区DNA甲基化水平以及血清学水平和氟骨症的关系。外周血RANKL和OPG基因启动子区的DNA甲基化测序结果中,观察到氟骨症患者血液中OPG基因启动子区1个CpG位点OPG（pos651）出现明显的低甲基化（P<0.05）,未发现RANKL基因启动子区CpG位点甲基化水平的显着性改变。进一步比较病例与对照血清RANKL、OPG表达水平以及RANKL/OPG比值,发现氟骨症患者RANKL、OPG血清水平以及RANKL/OPG比值（中位数RANKL:2728.64 pg/ml,OPG:560.64pg/ml;RANKL/OPG比值:4.30）显着高于对照组（中位数RANKL:1421.51 pg/ml;OPG:332.66 pg/ml;RANKL/OPG比值:3.79）（P<0.05）。多因素条件Logistic回归分析结果显示,血清RANKL以及RANKL/OPG比值与氟骨症的风险呈正相关（RANKL:OR=1.04,95%CI:1.01-1.08,P-trend<0.05;RANKL/OPG:OR=1.65,95%CI:1.16-2.34,P-trend<0.01）,未发现血清OPG水平与氟骨症风险之间的显着性关联。结论:（1）较高的膳食甜菜碱摄入量与氟骨症的风险降低有关;（2）氟骨症患者重要骨代谢分子RANKL、OPG血清表达水平以及RANKL/OPG比值升高,氟中毒诱导的特异性CpG位点的低甲基化可能在调节氟骨症人群OPG的表达中起重要作用。第二部分氟暴露对大鼠RANKL/OPG启动子区DNA甲基化的影响以及甜菜碱的拮抗作用目的:建立慢性氟中毒大鼠模型,设立甜菜碱低、中、高剂量干预组,基于RANKL/OPG基因启动子区DNA甲基化探索甜菜碱对慢性氟中毒影响的作用机制。方法:购买60只雄性SD大鼠,根据体重随机分为5个实验组（n=12）:对照组（饮纯净水）、模型组（饮100 mg/L NaF水）以及3个甜菜碱干预组（100 mg/kg/d、200 mg/kg/d、400 mg/kg/d）。甜菜碱干预组的NaF暴露与模型组相同,用甜菜碱每日按体重（0.1ml/20g/d）连续灌胃6个月。利用离子选择电极法检测大鼠尿液中的氟离子浓度,采用TBS法检测大鼠血液RANKL/OPG启动子区DNA甲基化水平,ELISA检测大鼠血清表达水平,Western blot法检测大鼠股骨组织RANKL/OPG的蛋白表达情况。结果:各个染毒组大鼠的尿氟浓度显着高于对照组（P<0.001）,模型组和甜菜碱干预组之间的尿氟浓度无显着性差异（P>0.05）。TBS检测结果显示,大鼠血液中OPG基因启动子区CpG岛4个特异性CpG位点pos1262（F=9.046,P=0.001）,pos1289（F=19.766,P<0.001）,pos1293（F=13.354,P<0.001）,pos1295（F=5.375,P=0.007）的甲基化水平在各个实验组间发生了显着的变化。与对照组相比,模型组的4个CpG位点（pos1262、pos1289、pos1293、pos1295）均出现明显的低甲基化（P<0.05）,而甜菜碱干预组以剂量依赖性的方式增加了这些CpG位点的甲基化水平。模型组大鼠血清OPG表达水平显着高于对照组（F=7.168,P=0.001）,甜菜碱干预后,随着甜菜碱干预剂量的增加大鼠OPG血清表达显着下降。Western blot结果显示,慢性氟暴露导致大鼠骨组织RANKL（F=17.019,P<0.001）和OPG（F=32.005,P<0.001）蛋白表达上调,甜菜碱干预的低中高剂量组拮抗氟暴露导致的蛋白异常表达。虽然慢性氟暴露明显上调RANKL蛋白的表达,但未观察到RANKL基因启动子区CpG岛DNA甲基化水平的显着性变化。结论:（1）慢性氟暴露会导致大鼠骨组织RANKL和OPG蛋白表达升高,并引起血液OPG基因启动子区特异性CpG位点出现低甲基化和较高的OPG血清表达;（2）甜菜碱的补充以剂量依赖性方式逆转氟暴露诱导的血液OPG基因启动子区特异性CpG位点的低甲基化,并拮抗氟中毒大鼠血液及骨组织RANKL和OPG蛋白的异常表达。
于星辰[6]（2020）在《氟暴露、线粒体相关基因遗传变异及其交互作用与儿童智力水平的关联研究》文中研究说明目的地方性氟中毒是我国重点防控的地方病之一,在儿童中,除氟斑牙外,氟的发育神经毒性也逐渐引起广泛关注。动物和细胞实验表明,线粒体产生的活性氧增多及其功能障碍与氟神经毒性密切相关,而线粒体功能相关基因可能参与了氟神经毒性的发生发展。鉴于此,本研究拟在儿童群体中评估内、外氟暴露水平与智力水平和氟斑牙的剂量反应关系;进一步探讨线粒体相关基因遗传变异与儿童智力发育水平的关联,以及与氟暴露的交互作用;并利用体外功能实验探索氟致神经毒性的潜在生物学机制,为寻找氟神经毒性的早期生物学标志物进而实施早期干预提供更多的科学证据。方法（1）采用多阶段随机抽样方法选取天津市宝坻区7-13岁儿童共3020名作为研究对象,收集流行病学调查资料,采集尿液、头发和指甲样本,并进行体格检查、氟斑牙评估和智力测试。利用氟离子选择电极法测定儿童饮用水源、尿液、头发和指甲中的氟含量,综合地评估儿童内、外氟暴露水平。利用分段线性模型和多因素Logistic回归模型,分别分析水氟、尿氟、发氟和指甲氟的暴露水平与智力水平和氟斑牙患病之间的剂量效应关系及阈值和饱和效应,进一步探索氟斑牙与智力的关联。（2）在第一阶段的基础上采用分层随机抽样方法选取1020名儿童作为研究对象并采集血液样本。采用文献回顾结合生物信息学的方法,选出与线粒体功能相关并参与神经系统发育的基因,利用Haploview软件和SNPinfo工具筛选出中国汉族人群最小等位基因频率≥0.05的潜在功能tag SNPs。采用多重PCR＿SNP分型技术对候选SNPs进行分型。利用多因素Logistic回归模型分析各SNP在不同遗传模型下与智力水平的关联。应用LASSO回归构建与智力相关的SNP-set,利用广义线性模型分析SNP-set评分与智力水平的关联,以评估多个SNPs对智力的联合作用,进而采用多因素Logistic回归模型分析其与氟的交互作用。在基因和通路水平上,应用ARTP方法评估遗传变异与智力的关联,以及与氟的交互作用。最后利用SHEsis软件分析不同的单体型与智力的关联。（3）在体外对SH-SY5Y细胞进行Na F梯度染毒实验,采用CCK-8、Real-time PCR、Western Blot、免疫荧光和细胞流式等方法分别检测关键基因和蛋白的表达水平、细胞生存和凋亡情况、线粒体膜电位和氧化水平、线粒体动力学指标在不同氟染毒剂量下的变化情况。利用单因素方差分析比较不同氟染毒剂量组间的差异,两两比较采用最小差异法。结果（1）在氟暴露与儿童智力发育水平、氟斑牙的关联分析中,共有3020名7-13岁儿童纳入研究。水氟、尿氟、发氟和指甲氟的相关系数在0.34-0.76之间。氟暴露与智力呈非线性剂量效应关系,分段线性回归结果显示,水氟高于3.4mg/L时,每增加0.5 mg/L,智商（intelligent quotient,IQ）下降4.07;尿氟在1.60-2.5mg/L之间时,每增加0.5 mg/L,IQ值下降2.49,增至2.5 mg/L时,IQ水平趋于稳定;发氟和指甲氟每增加1.0μg/g,IQ值分别降低2.24和1.30,分别在10.50μg/g和14.5μg/g趋于稳定。将智力分级后进行Logistic回归分析,结果显示在0.20-1.40mg/L的范围内,水氟每增加0.5 mg/L,极优智力（IQ≥130）减少53%（OR=0.47,95%CI:0.47,0.77）;尿氟每增加0.5 mg/L,极优智力减少13%（OR=0.87,95%CI:0.75,1.00）;发氟每增加1.0μg/g,极优智力和优秀智力（120-129）分别减少36%（OR=0.64,95%CI:0.52,0.79）和43%（OR=0.57,95%CI:0.49,0.67）,且在10.5μg/g时减少趋势放缓;指甲氟每增加1.0μg/g,极优智力和优秀智力分别减少24%（OR=0.76,95%CI:0.66,0.87）和28%（OR=0.72,95%CI:0.64,0.82）,当指甲氟分别超过18.5μg/g和14.5μg/g后,极优智力和优秀智力减少趋势放缓。氟暴露水平与氟斑牙的关联也存在阈值和饱和效应。水氟在0.80-1.50mg/L时,每增加0.1mg/L,氟斑牙患病风险增加127%（95%CI:104%,152%）;尿氟低于2.0mg/L时,每增加0.5mg/L,氟斑牙患病风险增加167%（95%CI:137%,201%）;发氟每增加1.0μg/g,氟斑牙患病风险增加9%（95%CI:7%,12%）;指甲氟低于20.0μg/g时,每增加1.0μg/g,氟斑牙风险增加14%（95%CI:9%,20%）,超出该剂量时氟斑牙风险的增加趋于平缓。氟斑牙与智力等级的关联分析显示,氟斑牙程度每增加一个等级,极优智力的可能性减少30%（OR=0.70,95%CI:0.57,0.86）。（2）在基因-环境交互作用分析中,共有17个基因的53个质控合格的SNPs入选,在1020名研究对象中,有68例个体因分型检出率低于95%被剔除,最终共有952名研究对象纳入分析。经FDR校正后,未发现单个SNP与智力有显着关联。利用LASSO回归筛选出智力相关的重要SNP,根据基因型中风险等位基因的个数将SNP分别编码为0、1、2,结合Logistic回归构建加权的SNP-set=-0.281×rs3788319-0.273×rs1879417-0.241×rs57377675-0.518×rs11556505-0.257×rs7187776,其评分与智力正相关(Ptrend=0.001)。SNP-set与水氟、尿氟和发氟均具有交互作用（P=0.030,0.040,0.010）。应用ARTP模型分析基因和通路水平上遗传变异和智力的关联及与氟的交互作用,结果显示,在男性中,Dopaminergic synapse pathway与智力相关（P=0.044）,Metabolic pathway与智力的相关具有边缘统计学意义（P=0.071）,经FDR校正后关联不再显着。交互作用分析中,Dopaminergic synapse pathway与指甲氟未经FDR校正时在男性中存在交互（P=0.049）;Alzheimer disease pathway在男性中与水氟、尿氟和发氟均存在交互（P=0.007,0.024,0.078）,经FDR校正后与水氟的交互作用仍显着（P=0.049）,与尿氟的交互作用为边缘性显着（0.074）;Neurotrophin signaling pathway在男性中与发氟和指甲氟交互（P=0.039,0.041）,在女性中与发氟交互（P=0.075）,经FDR校正后交互作用失去显着性;Metabolic pathway在男性中与水氟和尿氟具有交互作用（P=0.032,0.051）,经FDR校正后的P值均为0.074,具有边缘显着性。Signal transduction pathway在男性中与水氟、尿氟交互（P=0.050,0.030）,在女性中与发氟交互（P=0.053）,经FDR校正后前两者的P值具有边缘统计学意义,均为0.074;Sphingolipid signaling pathway在男性中与水氟、尿氟存在交互（P=0.036,0.041）,在女性中与发氟和指甲氟交互（P=0.089,0.019）,经FDR调整后与水氟和尿氟的交互作用为边缘性显着（P均为0.074）;在男性中,PI3K-AKT signaling pathway与水氟、尿氟、发氟和指甲氟均具有交互作用（P=0.051,0.053,0.067,0.079）,经FDR调整后前两者的P值具有边缘显着性,均为0.074。这些作用可能主要与COMT、NOS1、NOS3、SLC25A12、TH、TUFM和TOMM40等关键基因有关。（3）在体外SH-SY5Y细胞Na F染毒实验中,随着氟染毒剂量的升高,COMT（P=0.049）、NOS1（P=0.002）、NOS3（P<0.001）、TH（P=0.002）和TOMM40（P=0.002）基因的表达增加,对应的COMT（P=0.007）、NOS（P<0.001）、TH（P<0.001）和TOMM40（P<0.001）蛋白的表达也增加;SLC25A12（P<0.001）和TUFM（P<0.001）基因的表达下降,对应的SLC25A12（P<0.001）和TUFM（P<0.001）蛋白的表达也下降;线粒体膜电位降低（P<0.001）,活性氧含量升高（P<0.001）;线粒体转运蛋白Miro1（P<0.001）、自噬相关蛋白ATG5（P<0.001）和PINK1（P=0.001）的表达均增加;细胞早期凋亡率（P<0.001）和总凋亡（P<0.001）均上升,凋亡相关蛋白PARP和Cleaved caspase-3的表达明显增多（P=0.027,0.007）,而抗凋亡蛋白Bcl-2的表达则显着减少（P=0.001）。结论（1）低中度氟暴露水平下儿童仍有氟斑牙患病和智力损失的风险,其剂量效应关系存在阈值和饱和效应,对智力的影响也体现在优秀/极优智力的损失,且氟斑牙与极优智力的损失呈正相关。（2）在SNP-set、基因和通路水平均发现遗传变异与智力相关且与氟存在交互,部分存在性别差异。这些作用可能与COMT、NOS1、NOS3、SLC25A12、TH、TUFM和TOMM40等关键基因有关,潜在的作用通路为Metabolic pathway。（3）高剂量氟可上调COMT、NOS1、NOS3、TH和TOMM40基因和蛋白表达,下调SLC25A12和TUFM基因和蛋白表达,促进线粒体的氧化应激、转运和自噬,并诱导神经元凋亡。氟可能通过影响关键基因和蛋白的表达干扰线粒体功能及诱导凋亡来发挥神经毒性作用。以上结论需要在大样本人群中验证,且仍需更深入的生物学机探索。
曹仰敬[7]（2020）在《阿托伐他汀治疗慢性氟中毒大鼠脊髓损伤》文中研究说明目的:本研究探讨阿托伐他汀对慢性氟中毒对大鼠所致脊髓损伤是否有一定的减轻作用。材料和方法:建立慢性氟中毒大鼠模型,随机分为3组,（1）正常组;（2）对照组;（3）阿托伐他汀组。等待慢性氟中毒大鼠的模型制作成功了之后,详细并且严格地按照既定的分组以及提前设定完成的使用量,1天之内早中晚灌胃给药3次。24周后处理动物模型获取脊髓标本。并通过以下述实验方法综合评定用药效果:饲养12周和24周后对大鼠,采用野外行走实验评价神经功能,并根据（BBB评分）,从0分（瘫痪）到21分（正常步态）评分运动功能;饲养12周和24后对大鼠进行斜板试验,评价其后肢运动功能;通过免疫组化检测MMP-9、P53、MBP的表达;同时通过Western blot测定脊髓中MMP-9、P53、MBP蛋白表达含量。结果:1、对照组在12周和24周时BBB评分较正常组显着降低。24周时阿托伐他汀组BBB评分较对照组明显升高。结果表明,阿托伐他汀能显着提高大鼠BBB评分。2、在斜板试验中,对照组在12周和24周时的角度较正常组小。给予阿托伐他汀后,随着后肢运动功能的改善,阿托伐他汀组在24周时的角度明显高于对照组。3、阿托伐他汀组大鼠p53和MMP-9蛋白表达较对照组显着降低。这些结果表明阿托伐他汀降低p53和MMP-9对大鼠神经功能的调节作用。4、western blotting和免疫组化结果显示,阿托伐他汀治疗氟中毒大鼠后,大鼠MBP蛋白表达上调。结论:阿托伐他汀对慢性氟中毒大鼠所引起脊髓损伤的有一定的减轻作用。
王岚[8]（2019）在《Cbfa1在氟诱导成纤维细胞成骨中的作用机制探讨》文中进行了进一步梳理研究背景:慢性氟中毒是一种地方性疾病,主要病因是摄入过量氟导致以骨骼病变为主的地方性疾病,迄今为止发病机制并不清楚。氟中毒的骨骼改变（氟骨症）包括骨硬化,骨软化,骨质疏松和骨周软组织钙（骨）化,其中骨周软组织钙（骨）化属于异位钙化、异位骨化的范畴,主要见于骨周软组织,其主要细胞成分是成纤维细胞（fibrobalst,FB）。Cbfa1是成骨细胞特异性转录因子,是成骨细胞分化以及成骨的必要条件。本课题组过去的研究中发现,氟化物可以明显增强FB中Cbfa1从mRNA到蛋白的表达,证实FB在氟化物的作用下已经具备了成骨的条件。研究还发现,染氟成纤维细胞中骨代谢调控网络中的其他成骨相关因子的表达也明显增强,提示这些成骨因子亦在FB成骨过程中举足轻重。本研究以体外实验的方法,进一步确认在不同的染氟条件下FB中各种因素的改变,同时寻找各种骨生长因子在染氟FB中的相互关系,试图发现其中是否存在一个或几个重要的始发因素,从而促动或联合其他因子共同刺激FB的成骨过程,以期为氟骨症骨周软组织骨（钙）化的发病机制研究提供科学依据。实验方法:本实验以小鼠成纤维细胞株L929作为研究对象。将FB分为两个染氟剂量组（剂量组一:对照组、0.0001、0.001、0.1、1 mg/L F-组;剂量组二:对照组、2、5、10 mg/L F-组）。采用的实验方法包括:CCK-8法检测细胞增殖活性;Gomori钙钴法检测FB碱性磷酸酶活性;实时定量PCR和Western-Blot检测细胞Cbfa1、BMP-2、OCN、TGF-β、IGF-1、FGF-2、PDGF-B、PTH、PTH-rp、CT和CaSR mRNA、蛋白表达水平。同时重点对检测结果进行相关性分析。结果:1.CCK-8结果显示,与对照组相比,2 mg/L F-、5 mg/L F-可刺激细胞活性,10 mg/L F-则抑制细胞活性,且随着染氟时间延长,细胞的增殖活性下降;2.与对照组相比,2 mg/L F-组和5 mg/L F-组ALP活性明显增强,而10 mg/L F-组ALP活性低于对照组;3.实时定量PCR以及Western Blot结果:（1）染氟FB Cbfa1、BMP-2和OCN m RNA和蛋白水平均有提高;（2）染氟FB TGF-βm RNA除染氟10 mg/L组表达增强以外,其余各组变化不明显甚至明显降低,但其蛋白表达水平在各染氟浓度下均明显上调;（3）染氟明显上调FB IGF-1 m RNA和蛋白的表达;（4）染氟0.1 mg/L组和10 mg/L组PDGF-B m RNA表达明显增强,1 mg/L和2 mg/L组PDGF-B蛋白表达明显增强;（5）除染氟0.001 mg/L组外,其余加氟组FGF-2 m RNA表达均增强或明显增强;染氟2 mg/L和5 mg/L组FGF-2蛋白表达明显增强;（6）本实验中PTH m RNA和蛋白在多数染氟组均表达增强,PTH-rp m RNA在较低剂量组表达明显增强,较高剂量组表达明显减弱,而PTH-rp蛋白的表达则与m RNA刚好相反;（7）氟对CT和Ca SR m RNA和蛋白的表达呈普遍增强趋势;4.因素相关分析结果:（1）Cbfa1、BMP-2、OCN、TGF-β（1）染氟1 mg/L组,Cbfa1蛋白和BMP-2蛋白的表达增加呈显着正相关;（2）染氟5 mg/L组,Cbfa1和OCN在FB中的蛋白表达水平呈显着正相关;（3）染氟10 mg/L组Cbfa1和OCN蛋白表达呈正相关关系;（4）BMP-2和OCN之间仅在1 mg/L组蛋白表达存在负相关;（5）TGF-β和Cbfa1、BMP-2、OCN之间关系规律不明显。（2）IGF-1、FGF-2和PDGF-B（1）IGF-1和PDGF-B蛋白表达在染氟5 mg/L、10 mg/L组呈明显正相关;（2）IGF-1、FGF-2 m RNA表达在染氟2 mg/L组明显正相关,但在0.001 mg/L和10 mg/L组呈负相关;（3）FGF-2和PDGF-B m RNA在0.0001 mg/L、0.1 mg/L和5 mg/L组为正相关,蛋白在2 mg/L组正相关,但在0.1 mg/L组负相关;（4）TGF-β和PDGF-B m RNA表达在2 mg/L和5 mg/L组正相关,蛋白在0.001 mg/L组正相关,但在1 mg/L组负相关。（3）PTH、PTH-rp、CT和Cas R （1）PTH和Ca SR m RNA表达在0.1 mg/L和1 mg/L组正相关,0.0001 mg/L和0.001 mg/L组负相关;（2）PTH-rp和Ca SR m RNA在0.001 mg/L、10 mg/L组均为明显正相关,在0.0001 mg/L、0.1 mg/L组为负相关,蛋白在0.0001 mg/L、0.001 mg/L、2 mg/L组为正相关,5 mg/L组为负相关;（3）PTH-rp和CT m RNA表达在0.001 mg/L组负相关,蛋白在10 mg/L组正相关,但在0.001 mg/L、0.1 mg/L组负相关;（4）PTH和PTH-rp蛋白表达在10 mg/L组负相关,m RNA表达在0.0001 mg/L组为正相关,0.001 mg/L和0.1 mg/L组为负相关。结论:1.氟化物明显刺激FB增殖及成骨表型表达（1）氟化物明显刺激FB的增殖、分化;（2）染氟FB中ALP表达明显增强;（3）染氟刺激FB Cbfa1、BMP-2和OCN从m RNA到蛋白的表达。2.染氟FB细胞骨生长因子IGF-1、FGF-2和PDGF-B的表达（1）染氟浓度影响FB中IGF-1 m RNA和蛋白的表达,总的作用以明显上调为主;（2）染氟明显刺激FB中FGF-2和PDGF-B的表达。3.染氟FB PTH、PTH-rp、CT以及Ca SR的表达（1）FB染氟48 h,PTH m RNA和蛋白在多数染氟组以表达增强为主但PTH-rp m RNA在较低剂量组表达明显增强,较高剂量组明显减弱;PTH-rp蛋白则刚好相反;（2）染氟对FB CT的作用以刺激增强为主;（3）染氟FB Ca SR m RNA和蛋白的表达以增强趋势为主。4.Cbfa1与其他相关因素的相关性分析（1）Cbfa1与成骨蛋白、骨生长因子以及和成骨相关的诸多因素存在错综复杂的相互关系。这种相关性受染氟浓度的影响,而且在m RNA和蛋白表达方面反应不同甚至作用相反;（2）成骨相关因素之间存在复杂、规律不明显的相互关系。
吴守丽[9]（2019）在《p16基因甲基化在氟所致成骨细胞异常增殖中的作用研究》文中研究说明目的:本研究充分利用贵州省燃煤污染型氟中毒病区资源,以细胞周期调控中关键分子p16基因为切入点,检测氟中毒人群p16基因转录表达及甲基化水平的改变;同时构建人成骨细胞氟中毒模型,检测氟化钠对人成骨细胞活力和细胞周期分布的影响,观察p16基因转录表达及甲基化水平改变,并进一步使用DNA甲基转移酶抑制剂5-AZA-dC进行干预,探讨p16基因甲基化水平的改变在氟骨症发生发展中的作用,为氟中毒防治提供新的思路与方向。方法:1燃煤污染型氟暴露人群研究1.1调查对象的选择本研究依据地方性氟中毒病区划分标准GB 17018-2011,选择燃煤污染型氟中毒病区织金县荷花村为调查点,非氟中毒地区的安顺市张官村作为对照点;共筛选出调查对象380例（其中病例组295例,对照组85例）。1.2问卷调查及生物样本采集在知情同意原则下,进行问卷调查,并收集调查对象的生物样本（血样、尿样）。1.3尿氟（Urinary fluorine,UF）检测及分组采用氟离子选择电极法测定尿氟含量,并根据所测得的UF浓度,将调查对象分为4组:①UF<1.96 mg/gCr组,140 例;② 1.96 mg/gCr ≤ UF<3.92 mg/gCr组,93 例;③ 3.92mg/gCr≤UF<7.84 mg/gCr组,82例;④ UF≥7.84 mg/gCr组,65例。1.4氟骨症诊断对荷花村295名调查对象进行了前臂和小腿的X线检查。并根据地方性氟骨症诊断标准对荷花村295名调查对象进行了氟骨症严重程度的评估,根据其X线表现分为:正常、轻度、中度、重度4组。1.5调查对象p16基因转录表达及甲基化水平检测实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测调查对象外周血p16基因mRNA转录;酶联免疫吸附法（ELISA）检测调查对象外周血P16蛋白表达;甲基化敏感性高分辨率溶解曲线（MS-HRM）法检测调查对象外周血p16基因启动子区甲基化水平。2人成骨细胞氟中毒体外实验研究以0、125、250、500及1000 μmol/L NaF处理人成骨细胞72 h,建立氟中毒模型。在不同的染氟剂量组中,MTT法检测人成骨细胞细胞活力;流式细胞术检测细胞周期分布;qRT-PCR检测p16基因mRNA转录;免疫印迹法（Western-blot,WB）检测P16蛋白表达;亚硫酸氢盐测序PCR法（bisulfite sequencing PCR,BSP）检测p16基因启动子区甲基化水平。3 DNA甲基转移酶抑制剂5-AZA-dC体外干预研究选择剂量1000 μmol/L NaF处理人成骨细胞72 h,建立氟中毒细胞模型,根据MTT结果及参考文献,以5、10及20μmol/L 5-AZA-dC继续处理细胞72 h。设阳性对照组（只染1000 μmol/L NaF）及不染毒空白对照组,建立5-AZA-dC干预模型。在不同剂量干预组中,BSP检测p16基因甲基化水平;qRT-PCR检测p16基因mRNA转录水平;WB检测P16蛋白表达;MTT检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期分布。结果1燃煤污染型氟暴露人群研究随UF浓度增加,p16基因mRNA转录及蛋白表达逐渐降低（χ2mRNA、蛋白=22.812、45.785,P均<0.05）,p16基因启动子区甲基化水平逐渐增加（χ2=40.942,P<0.05）,同时氟骨症的严重程度也逐渐增加（χ2= 16.791,P<0.05）。在此基础上,进一步分析了不同氟骨症组中p16基因表达和甲基化水平差异,发现随着氟骨症的加重,p16基因表达逐渐降低（χ2mRNA、蛋白二8.535、15.963,P均<0.05）,p16启动子区甲基化水平增加（χ2= 9.242,P<0.05）。说明p16基因启动子区的异常甲基化与氟暴露反应有关,可能参与了氟骨症的发生发展。同时,根据所测得甲基化水平,分为3个组:0-1%、1-12.5%和12.5-75%,发现随着甲基化水平的升高,p16基因表达逐渐降低（χ2 mRNA、蛋白= 7.176、7.017,P均<0.05）,提示p16基因表达的下调与其甲基化有关。2人成骨细胞氟中毒体外实验研究随着染氟剂量的增加,人成骨细胞增殖指数（PI）逐渐升高（F=66.801,P<0.05）,处于G0/G1期细胞数逐渐减少,S期细胞逐渐增多,表明人成骨细胞在氟作用下加快了细胞进入DNA的合成阶段,表现出细胞增殖旺盛状态;随NaF剂量的增加,p16基因表达呈逐渐下降趋势（FmRNA、蛋白=41.663、49.844 P均<0.05）;p16基因启动子区甲基化水平呈逐渐上升趋势（χ2=73.034,P<0.05）。3 DNA甲基转移酶抑制剂5-AZA-dC体外干预研究不同剂量5-AZA-dC干预组中,随着5-AZA-dC干预剂量的增加,p16基因启动子区甲基化水平呈逐渐下降趋势（χ2=97.695,P<0.05）,p16基因mRNA转录及蛋白表达水平呈逐渐升高趋势（FmRNA、蛋白=42.850、30.560,P均<0.05）。成骨细胞活力呈逐渐降低趋势（F=40.455,P<0.05）,处于G0/G1期细胞数增加,而S期细胞逐渐减少,细胞增殖指数（PI）呈逐渐降低趋势（F=56.277,P<0.05）。结论:1、氟暴露能够通过诱导p16基因启动子区高甲基化进而抑制了p1 基因mRNA转录和蛋白的表达,导致了成骨细胞的增殖活跃,是氟致人成骨细胞增殖活跃的分子机制之一。2、DNA甲基转移酶抑制剂5-AZA-dC能有效回复氟所致的p16基因启动子区高甲基化水平,回复p16基因的转录表达,进而逆转氟所引起的人成骨细胞增殖活跃,为氟骨症的治疗研究带来了新的思路。
汪晓宇[10]（2019）在《L-型钙通道在氟致肾脏损伤中的作用及机理的研究》文中提出氟（fluorine,F）是人体所必需的微量元素之一,长期摄入过量,会造成全身性生理病理改变,称为地氟病。氟暴露不仅能损伤骨相器官,还可引起神经、泌尿等非骨相器官病变。肾脏是机体氟暴露的主要靶器官之一。氟致肾脏损伤的分子机制逐渐引起关注,氟对肾脏尤其是对其上皮细胞的损害主要表现在对细胞内酶合成代谢的抑制和对细胞内膜结构的破坏两方面。Ca2+是机体细胞内重要的信息分子,L-型钙离子通道在调节胞质内Ca2+的水平中发挥重要作用。氟中毒能引起细胞内钙超载,但氟中毒如何引起细胞内钙超载以及钙超载对肾脏细胞L-型钙离子通道下游凋亡相关分子的影响却鲜有报道。本实验分为亚慢性和慢性氟致肾脏损伤两部分,分别选用初断乳ICR雄性小鼠140只,随机分为7组:对照组（C）、高氟组（HF）、低氟组（LF）、高氟注射钙通道激动剂组（FPL64176）（HF+F）、高氟注射钙通道拮抗剂组（Nifedipine）（HF+N）、低氟注射钙通道激动剂组（LF+F）、低氟注射钙通道拮抗剂组（LF+N）,对照组自由饮用自来水,高氟组和低氟组分别饮用30和5mg/L的氟化钠溶液。染氟期分别为90天与180天,染氟结束前1周,对照组、低氟组和高氟组腹腔注射生理盐水,其余各组分别腹腔注射激动剂或拮抗剂（5mg/kg·d）,染氟结束后,先分别检测小鼠肾脏脏器系数、肾脏损伤相关血液指标、肾脏组织结构和肾脏抗氧化能力。然后再分别检测肾脏细胞凋亡以及L-型钙离子通道Cav1.2基因/蛋白和下游肾脏细胞凋亡调节分子CaMKⅡ、CaM、Bax、Bcl-2基因/蛋白的表达水平。通过上述实验,探讨饮水型氟暴露致肾脏损伤的分子机制,初步探明L-型钙通道在饮水型氟中毒致肾脏损伤过程中的作用,进一步完善氟致钙矛盾学说,探求治疗氟中毒的新途径和新方法。实验结果:1.小鼠体重与脏器系数测定结果:各组小鼠体重与脏器系数均无显着差异（P>0.05）。2.小鼠肾脏损伤相关血液指标测定结果:与对照组比,3月龄HF、LF和HF+F组尿素氮,HF与HF+F组尿酸含量均极显着增加（P<0.01）,HF+N、LF+F和LF+N组尿素氮,LF和HF+N组尿酸含量均显着增加（P<0.05）,6月龄HF和HF+F组尿素氮,HF、HF+F、HF+N和LF+F组肌酐,HF、LF、HF+F、HF+N和LF+F组尿酸含量极显着增加（P<0.01）,HF+N和LF+F组尿素氮,LF+N组尿酸含量显着增加（P<0.05）;与HF组比,3月龄HF+N组尿素氮,HF+F与HF+N组肌酐含量显着降低（P<0.05）,HF+F组尿酸含量极显着增加（P<0.01）,HF+N组尿酸含量极显着降低（P<0.01）,6月龄HF+F组尿素氮、肌酐、尿酸含量均极显着增加（P<0.01）,HF+N组肌酐含量显着降低（P<0.05）;与LF组比,LF+N组尿素氮含量极显着降低（P<0.01）,3月龄LF+N组、6月龄LF+F组肌酐、尿酸含量显着增加（P<0.05）;与3月龄比,6月龄LF组尿素氮,HF、LF、HF+F、HF+N和LF+F组肌酐含量显着降低（P<0.05）,LF+N组肌酐含量均极显着降低（P<0.01）,HF+F组尿素氮,HF与HF+N组尿酸含量显着增加（P<0.05）,HF+F与LF+F组尿酸含量极显着增加（P<0.01）。3.小鼠肾脏组织结构观测结果:对照组肾结构中肾小球肾小囊结构清晰,肾小管上皮细胞正常,染氟组肾小囊腔扩大,肾小管上皮部分细胞出现空泡样变。HF组肾小球整体缩小,肾小管上皮细胞界限不清,出现肿胀、空泡样变,部分变性坏死,间质有炎性细胞。氟与激动剂联合暴露组进一步加剧,而氟与拮抗剂联合暴露组上述变化有所逆转。6月龄较3月龄上述改变明显加重。4.小鼠肾脏酶活测定结果:与对照组比,3月龄HF组GSH-PX,LF、HF+N、LF+F与LF+N组SOD活力显着降低（P<0.05）,LF与LF+N组MDA含量显着增加（P<0.05）,HF+F组GSH-PX,HF与HF+F组SOD活力极显着降低（P<0.01）,HF、HF+F、HF+N与LF+F组MDA含量极显着增加（P<0.01）;6月龄LF+N组GSH-PX,LF与LF+N组SOD活力显着降低（P<0.05）,LF+N组MDA含量显着增加（P<0.05）,HF、LF、HF+F、HF+N与LF+F组GSH-PX,HF、HF+F、HF+N与LF+F组SOD活力均极显着降低（P<0.01）,HF、LF、HF+F、HF+N与LF+F组MDA含量极显着增加（P<0.01）;与HF组比,3月龄HF+F组GSH-PX,LF+F组SOD,HF+N组MDA活力显着降低（P<0.05）,HF+N组GSH-PX活力,HF+F组MDA含量显着增加（P<0.05）,6月龄HF+N组GSH-PX活力极显着增加（P<0.01）,HF+N组SOD活力,HF+F组MDA含量显着增加（P<0.05）,HF+F组SOD活力显着降低（P<0.05）,HF+N组MDA含量极显着降低（P<0.01）;与LF组比,3月龄LF+F组GSH-PX活力显着降低（P<0.05）,6月龄LF+N组GSH-PX活力显着增加（P<0.05）;与3月龄比,LF+F与LF+N组GSH-PX活力,HF+F组MDA含量显着降低（P<0.05）,HF、LF、HF+F与HF+N组GSH-PX活力均极显着降低（P<0.01）,HF与HF+N组MDA含量显着增加（P<0.05）。5.小鼠肾脏细胞凋亡观测结果:与对照组比,3月龄与6月龄各组肾脏细胞凋亡数量均极显着增加（P<0.01）;与HF组比,3月龄HF+N组细胞凋亡率显着下降（P<0.05）,6月龄HF+N组细胞凋亡率极显着下降（P<0.01）;与LF组比,6个月LF+N组细胞凋亡率显着下降（P<0.05）;与3月龄比,6月龄HF、LF、HF+F与LF+F组细胞凋亡率极显着增加（P<0.01）,HF+N组细胞凋亡率显着增加（P<0.05）。6.RT-PCR mRNA检测结果:与对照组比,3月龄与6月龄HF+F、LF+F与LF+N组Cav1.2基因表达水平均显着增加（P<0.05）;与HF组比,HF+F与HF+N组Cav1.2基因表达水平组显着增加（P<0.05）;与LF组比,3月龄LF+F与LF+N组Cav1.2基因表达水平显着增加（P<0.05）,6月龄LF+F与LF+N组Cav1.2基因表达水平显着下降（P<0.05）;与3月龄比,6月龄HF、HF+F与HF+N组Cav1.2基因表达水平显着增加（P<0.05）,LF+F与LF+N组Cav1.2基因表达水平极显着降低（P<0.01）。与对照组比,3月龄与6月龄各组CaMKⅡ基因表达水平均出现显着增加（P<0.05）;与HF组比,3月龄HF+F组CaMKⅡ基因表达水平显着降低（P<0.05）,HF+N组CaMKⅡ基因表达水平极显着增加（P<0.01）,6月龄HF+N组CaMKⅡ基因表达水平显着增加（P<0.05）;与LF组比,6月龄LF+F组CaMKⅡ基因表达水平显着增加（P<0.05）,LF+N组CaMKⅡ基因表达水平显着降低（P<0.05）;与3月龄比,6月龄HF+F组CaMKⅡ基因表达水平显着增加（P<0.05）。与对照组比,HF、HF+F和HF+N组CaM基因表达水平显着降低（P<0.05）,LF+F组CaM基因表达水平显着增加（P<0.05）;与3月龄比,6月龄HF+N和LF+N组CaM基因表达水平显着降低（P<0.05）,LF+F组CaM基因表达水平极显着增加（P<0.01）。与对照组比,各组Bax基因表达水平均显着增加（P<0.05）;与HF组比,3月龄与6月龄HF+N组Bax基因表达水平显着降低（P<0.05）;与LF组比,LF+F和LF+N组Bax基因表达水平极显着降低（P<0.01）;与3月龄比,6月龄HF、LF和HF+F组Bax基因表达水平显着增加（P<0.05）。与对照组比,3月龄与6月龄HF、HF+F和LF+F组Bcl-2基因表达水平显着降低（P<0.05）;与HF组比,3月龄HF+F组Bcl-2基因表达水平显着降低（P<0.05）,6月龄HF+F组Bcl-2基因表达水平极显着增加（P<0.01）;与LF组比,6月龄LF+F组Bcl-2基因表达水平显着降低（P<0.05）;与3月龄比,6月龄各组Bcl-2基因表达水平显着降低（P<0.05）。7.Western blot蛋白检测结果:与对照组比,3月龄与6月龄各组Cav1.2蛋白表达水平均显着增加（P<0.05）;与HF组比,3月龄HF+F组Cav1.2蛋白表达水平极显着增加（P<0.01）,6月龄HF+N组Cav1.2蛋白表达水平均显着降低（P<0.05）;与LF组比,3月龄LF+N组Cav1.2蛋白表达水平均显着降低（P<0.05）;与3月龄比,6月龄LF、HF+F、LF+F和LF+N组Cav1.2蛋白表达水平显着降低（P<0.05）。与对照组比,3月龄与6月龄HF、LF、HF+F和LF+F组CaMKⅡ蛋白表达水平显着降低（P<0.05）,LF组CaMKⅡ蛋白表达水平极显着增加（P<0.01）;与HF组比,3月龄HF+N组CaMKⅡ蛋白表达水平显着增加（P<0.05）;与LF组比,3月龄LF+N组CaMKⅡ蛋白表达水平显着增加（P<0.05）,6月龄LF+N组CaMKⅡ蛋白表达水平显着降低（P<0.05）;与3月龄比,6月龄LF和LF+F组CaMKⅡ蛋白表达水平极显着增加（P<0.01）,LF+N组CaMKⅡ蛋白表达水平显着增加（P<0.05）。与对照组比,各组CaM蛋白表达水平显着增加（P<0.05）;与HF组比,HF+F组CaM蛋白表达水平显着增加（P<0.05）;与LF组比,LF+N组CaM蛋白表达水平显着降低（P<0.05）,6月龄LF+F组CaM蛋白表达水平显着增加（P<0.05）;与3月龄比,6月龄各组CaM蛋白表达水平无显着差异（P>0.05）。与对照组比,各组组Bax蛋白表达水平显着增加（P<0.05）;与HF组比,6月龄HF+F组Bax蛋白表达水平显着增加（P<0.05）;与LF组比,6月龄LF+N组Bax蛋白表达水平显着降低（P<0.05）;与3月龄比,6月龄LF+N组Bax蛋白表达水平显着降低（P<0.05）。与对照组比,各组Bcl-2蛋白表达水平均显着降低（P<0.05）;与HF组比,HF+F组Bcl-2蛋白表达水平显着降低（P<0.05）;与LF组比,6月龄LF+F组Bcl-2蛋白表达水平显着降低（P<0.05）;与3月龄比,6月龄HF组Bcl-2蛋白表达水平显着降低（P<0.05）。综上所述,氟暴露能导致小鼠肾脏损伤,主要表现为:肾脏组织抗氧化能力下降、肾脏组织结构发生病理性改变、肾脏细胞凋亡加剧,其分子机理可能与氟暴露致肾脏细胞Cav1.2、CaMKⅡ与Bax表达水平显着上升,CaM与Bcl-2表达水平显着下降,Bax/Bcl-2比值显着升高有关,且上述这些肾脏细胞内Cav1.2和下游凋亡调节分子的表达水平与氟暴露的剂量和时间呈现一定的相关性;L-型钙离子通道激动剂FPL64176与氟暴露呈协同毒性作用,即加重氟中毒致肾脏损伤,并能并上述肾脏细胞内的分子异常变化变为显着;而L-型钙离子通道拮抗剂Nifedipine则有拮抗作用,能逆转氟中毒致肾脏损伤的上述各项指标。所检测的上述指标中,只有L-型钙离子通道Cav1.2基因/蛋白及下游Bax/Bcl-2基因/蛋白表达水平随氟暴露的浓度增加而上升,呈现规律性变化,提示L-型钙通道Cav1.2可能是氟致肾脏损伤的关键环节,下游Bax/Bcl-2基因/蛋白表达水平异常导致细胞凋亡可能是氟致肾脏损伤原因之一,L-型钙离子通道抑制剂Nifedipine可能是一种新型有效的抗氟药物。
二、氟骨症患者心血管系统损害的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、氟骨症患者心血管系统损害的研究（论文提纲范文）
（2）慢性氟中毒SD大鼠正畸牙移动的位移及速率变化（论文提纲范文）
| 文题释义： |
| 0引言Introduction |
| 1 材料和方法Materials and methods |
| 1.1 设计 |
| 1.2 时间及地点 |
| 1.3 材料 |
| 1.3.1 实验动物 |
| 1.3.2 实验试剂与仪器 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.5 主要观察指标 |
| 1.5.1 模型鉴定指标 |
| 1.5.2 总位移及总速率 |
| 1.5.3 分段位移及分段速率 |
| 1.6 统计学分析 |
| 2 结果Results |
| 2.1 模型复制鉴定结果 |
| 2.2 雌、雄大鼠双侧第一磨牙的总位移及总速率 |
| 2.3 大鼠双侧第一磨牙的总位移及总速率 |
| 2.4 大鼠双侧第一磨牙的分段位移及分段速率 |
| 3 讨论Discussion |
| 3.1 染氟毒对大鼠正畸牙移动周期变化的影响 |
| 3.2 慢性氟染毒对大鼠正畸牙移动的宏观影响及合理推测 |
| 3.3 从牙移动节律推测正畸力值需求的环境 |
（3）NRH：醌氧化还原酶2介导慢性氟中毒大鼠脑组织氧化应激损伤及自噬功能改变的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 4.结论 |
| 参考文献 |
| 综述 自噬与脑损伤 |
| 参考文献 |
| 作者简介及攻读学位期间科研成果 |
| 致谢 |
| 学位论文数据集 |
（4）不同膳食钙水平下氟暴露致雄性小鼠生殖毒性及分子机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 绪论 |
| 1.1 地氟病对机体的损害 |
| 1.1.1 地氟病对骨相器官的损害 |
| 1.1.2 地氟病对非骨相器官的损害 |
| 1.2 氟中毒的发病机制 |
| 1.2.1 氟致氧化应激学说 |
| 1.2.2 氟致细胞凋亡 |
| 1.3 钙与氟中毒 |
| 1.3.1 钙的生物学效应 |
| 1.3.2 钙与氟中毒研究进展 |
| 1.3.3 氟致钙矛盾疾病理论 |
| 1.4 研究意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验动物与分组 |
| 2.2 实验试剂与仪器 |
| 2.2.1 实验试剂 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 小鼠体重、睾丸重量和睾丸脏器系数测定 |
| 2.3.2 小鼠下切齿观察 |
| 2.3.3 小鼠血氟/钙,尿氟/钙含量测定 |
| 2.3.4 小鼠睾丸组织自由基和抗氧化酶测定 |
| 2.3.5 小鼠血清性激素水平测定 |
| 2.3.6 小鼠睾丸细胞形态结构观测 |
| 2.3.7 小鼠精子超微结构观测 |
| 2.3.8 TUNEL法观测小鼠睾丸细胞凋亡 |
| 2.3.9 小鼠睾丸细胞内Ca~(2+)水平观测 |
| 2.3.10 RT-PCR检测mRNA表达 |
| 2.3.11 Western Blot检测小鼠睾丸细胞相关蛋白表达 |
| 2.4 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 氟中毒小鼠模型建立 |
| 3.1.1 氟斑牙观测结果 |
| 3.1.2 小鼠血/尿氟、血/尿钙检测统计结果 |
| 3.2 小鼠体重、睾丸重量及睾丸脏器系数检测统计结果 |
| 3.3 小鼠睾丸组织自由基NO含量、NOS和抗氧化酶CAT活性检测统计结果 |
| 3.4 小鼠血清睾酮、促黄体激素、促卵泡素水平检测统计结果 |
| 3.5 氟暴露对小鼠睾丸组织形态结构观测结果 |
| 3.6 小鼠附睾中成熟精子超微结构观察结果 |
| 3.6.1 小鼠附睾中成熟精子头部结构观察结果 |
| 3.6.2 小鼠附睾中成熟精子尾部中段纵切面结构观察结果 |
| 3.6.3 小鼠附睾中成熟精子尾部中段横切面结构观察结果 |
| 3.7 氟暴露对小鼠睾丸细胞凋亡观测结果 |
| 3.7.1 小鼠睾丸细胞凋亡观察 |
| 3.7.2 小鼠睾丸细胞凋亡率 |
| 3.8 小鼠睾丸细胞内Ca~(2+)水平检测统计结果 |
| 3.8.1 小鼠睾丸细胞内Ca~(2+)荧光探针负载 |
| 3.8.2 小鼠睾丸细胞内Ca~(2+)水平检测统计结果 |
| 3.9 小鼠睾丸细胞膜Cav1.2 和内质网凋亡信号通路分子mRNA表达检测统计结果 |
| 3.9.1 小鼠睾丸细胞膜L型钙离子通道Cav1.2 mRNA表达水平检测统计结果 |
| 3.9.2 小鼠睾丸细胞内质网应激伴侣分子GRP78 mRNA表达水平检测统计结果 |
| 3.9.3 小鼠睾丸细胞内质网凋亡通路信号分子IRE1 mRNA表达水平检测统计结果 |
| 3.9.4 小鼠睾丸细胞内质网凋亡通路信号分子ASK1 mRNA表达水平检测统计结果 |
| 3.9.5 小鼠睾丸细胞内质网凋亡信号通路分子TRAF2 mRNA表达水平检测统计结果 |
| 3.9.6 小鼠睾丸细胞凋亡信号分子JNK mRNA表达水平检测统计结果 |
| 3.9.7 小鼠睾丸细胞凋亡信号分子Caspase-3 mRNA表达水平检测统计结果 |
| 3.10 小鼠睾丸细胞Cav1.2 和内质网凋亡信号通路分子蛋白表达检测统计结果 |
| 3.10.1 小鼠睾丸细胞膜L-型钙离子通道Cav1.2 蛋白表达水平检测统计结果 |
| 3.10.2 小鼠睾丸细胞内质网应激伴侣分子GRP78 蛋白表达水平检测统计结果 |
| 3.10.3 小鼠睾丸细胞内质网凋亡信号通路分子IRE1 蛋白表达水平检测统计结果 |
| 3.10.4 小鼠睾丸细胞内质网凋亡信号通路分子ASK1 蛋白表达水平检测统计结果 |
| 3.10.5 小鼠睾丸细胞内质网凋亡信号通路分子TRAF2 蛋白表达水平检测统计结果 |
| 3.10.6 小鼠睾丸细胞凋亡信号分子JNK蛋白表达水平检测统计结果 |
| 3.10.7 小鼠睾丸细胞凋亡相关信号分子Caspase-3 蛋白表达水平检测统计结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间取得的成果 |
（5）基于RANKL/OPG系统的DNA甲基化探讨甜菜碱对氟骨症的影响（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 甜菜碱及RANKL/OPG基因启动子区DNA甲基化与氟骨症关系的病例对照研究 |
| 前言 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分 氟暴露对大鼠RANKL/OPG启动子区DNA甲基化的影响以及甜菜碱的拮抗作用 |
| 前言 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 氟中毒表观遗传学发病机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（6）氟暴露、线粒体相关基因遗传变异及其交互作用与儿童智力水平的关联研究（论文提纲范文）
| 全文缩写词 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 技术路线 |
| 第一部分 氟暴露与儿童智力发育和氟斑牙的关联 |
| 1 研究背景 |
| 2 材料和方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 氟暴露、线粒体相关基因遗传变异及其交互作用与智力的关联研究 |
| 1 研究背景 |
| 2 材料和方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第三部分 氟暴露所致神经毒性的潜在机制研究 |
| 1 研究背景 |
| 2 材料和方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 结论 |
| 创新点与局限性 |
| 参考文献 |
| 综述 氟中毒及其机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（7）阿托伐他汀治疗慢性氟中毒大鼠脊髓损伤（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状及成果 |
| 研究目的、方法 |
| 1.对象和方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 实验仪器 |
| 1.3 试剂与耗材 |
| 1.4 实验试剂配制 |
| 1.5 实验动物的饲养 |
| 1.6 实验动物的分组 |
| 1.7 行为学测试 |
| 1.8 实验动物脊髓取材 |
| 1.9 组织蜡块免疫组化染色 |
| 1.10 Western blot检测MMP-9、P53、MBP蛋白表达水平并分析 |
| 1.11 数据分析 |
| 2.结果 |
| 2.1 BBB评分结果 |
| 2.2 斜板试验结果 |
| 2.3 MBP、P53和MMP-9 结果 |
| 3.讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 阿托伐他汀对氟中毒的研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
（8）Cbfa1在氟诱导成纤维细胞成骨中的作用机制探讨（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 中英文缩写词对照表 |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 氟与氟骨症 |
| 1.1.1 氟元素 |
| 1.1.2 氟骨症概述 |
| 1.2 成纤维细胞 |
| 1.2.1 成纤维细胞概况 |
| 1.2.2 成纤维细胞成骨能力 |
| 1.2.3 影响成纤维细胞成骨功能的因素 |
| 1.3 Cbfa1概述 |
| 1.3.1 Cbfa1在成骨过程中的作用 |
| 1.3.2 Cbfa1在其他细胞成骨样分化中的作用 |
| 第2章 实验研究 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 细胞系 |
| 2.1.2 主要实验仪器与设备 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 FB体外培养 |
| 2.2.2 CCK-8检测细胞增殖活性 |
| 2.2.3 Gomori钙钴法检测碱性磷酸酶活性 |
| 2.2.4 RT-PCR检测FB中特定基因的表达 |
| 2.2.5 Western blot法检测FB细胞中特定蛋白表达 |
| 第3章 实验结果 |
| 3.1 氟对FB增殖的影响 |
| 3.2 Gomori钙钴法检测FB碱性磷酸酶活性 |
| 3.3 染氟后FB内特定因子mRNA、蛋白表达 |
| 3.4 相关性分析 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 结论 |
| 第6章 课题创新性 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
（9）p16基因甲基化在氟所致成骨细胞异常增殖中的作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 0 引言 |
| 第一部分：燃煤污染型氟暴露人群研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 第二部分：人成骨细胞体外氟中毒实验研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 第三部分：5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-AZA-dC)体外干预研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 作者简历 |
| 致谢 |
| 学位论文数据集 |
（10）L-型钙通道在氟致肾脏损伤中的作用及机理的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 1 绪论 |
| 1.1 地氟病的概况 |
| 1.2 氟对骨相器官的危害 |
| 1.2.1 氟斑牙 |
| 1.2.2 氟骨症 |
| 1.3 氟对非骨相器官的影响 |
| 1.3.1 氟对神经系统的影响 |
| 1.3.2 氟对心血管系统的影响 |
| 1.3.3 氟对生殖系统的影响 |
| 1.3.4 氟对泌尿系统的影响 |
| 1.3.5 氟对消化系统的影响 |
| 1.4 氟的发病机制和研究进展 |
| 1.4.1 氟致自由基损伤学说 |
| 1.4.2 氟致内质网应激 |
| 1.4.3 氟致细胞凋亡 |
| 1.4.4 氟致钙矛盾学说 |
| 1.5 钙与氟中毒 |
| 1.5.1 钙与氟中毒的研究进展 |
| 1.5.2 钙离子通道的种类 |
| 1.5.3 L-型钙通道与氟中毒 |
| 1.6 研究意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验动物与分组 |
| 2.2 实验器材与试剂 |
| 2.3 试验方法 |
| 2.3.1 肾脏脏器系数以及组织匀浆的制备 |
| 2.3.2 肾脏血液相关指标测定 |
| 2.3.3 肾脏组织中总蛋白含量检测 |
| 2.3.4 测定肾脏组织匀浆上清液中GSH-Px、SOD活力和MDA含量 |
| 2.4 小鼠肾脏组织结构观察 |
| 2.5 TUNEL法检测各组小鼠肾脏细胞凋亡情况 |
| 2.6 RT-PCR检测m RNA表达 |
| 2.7 Western Blot检测蛋白表达 |
| 2.8 数据分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 氟暴露对小鼠体重及脏器系数的影响 |
| 3.2 肾脏损伤相关血液指标的测定结果 |
| 3.3 氟暴露对肾脏组织形态学的影响 |
| 3.4 小鼠肾脏氧化及抗氧化相关指标的检测 |
| 3.5 氟暴露对肾脏细胞凋亡的影响 |
| 3.6 氟暴露对小鼠肾脏相关基因表达的影响 |
| 3.7 氟暴露对小鼠肾脏相关蛋白表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
四、氟骨症患者心血管系统损害的研究（论文参考文献）
- [1]基于流行病学证据明确氟对多器官系统影响是当前迫切需要解决的科学问题[J]. 高彦辉. 中华地方病学杂志, 2022(02)
- [2]慢性氟中毒SD大鼠正畸牙移动的位移及速率变化[J]. 丁雪,贾莹,刘纯,杨世榕,赖灵妍,杨桦,丁琪. 中国组织工程研究, 2022
- [3]NRH：醌氧化还原酶2介导慢性氟中毒大鼠脑组织氧化应激损伤及自噬功能改变的机制研究[D]. 冉龙艳. 贵州医科大学, 2021(02)
- [4]不同膳食钙水平下氟暴露致雄性小鼠生殖毒性及分子机制[D]. 张佳勇. 浙江师范大学, 2021(02)
- [5]基于RANKL/OPG系统的DNA甲基化探讨甜菜碱对氟骨症的影响[D]. 陈婷. 遵义医科大学, 2021
- [6]氟暴露、线粒体相关基因遗传变异及其交互作用与儿童智力水平的关联研究[D]. 于星辰. 华中科技大学, 2020
- [7]阿托伐他汀治疗慢性氟中毒大鼠脊髓损伤[D]. 曹仰敬. 天津医科大学, 2020(06)
- [8]Cbfa1在氟诱导成纤维细胞成骨中的作用机制探讨[D]. 王岚. 吉林大学, 2019(11)
- [9]p16基因甲基化在氟所致成骨细胞异常增殖中的作用研究[D]. 吴守丽. 贵州医科大学, 2019(07)
- [10]L-型钙通道在氟致肾脏损伤中的作用及机理的研究[D]. 汪晓宇. 浙江师范大学, 2019(02)