一、Inhalation of nitric oxide in the treatment of SARS in Beijing（论文文献综述）
中华医学会呼吸病学分会哮喘学组[1]（2022）在《咳嗽的诊断与治疗指南（2021）》文中认为近年来, 咳嗽的诊断、治疗与发病机制研究取得了许多新的进展。为及时反映国内外相关研究结果, 中华医学会呼吸病学分会哮喘学组组织了呼吸内科、消化内科、反流外科、耳鼻咽喉科、儿科、中医科等多个学科的专家, 对中国《咳嗽的诊断与治疗指南（2015）》重新进行了修订。对原有的证据等级、推荐强度进行了审核与更新, 新增、删除了部分推荐意见。指南的基本结构保持不变, 主要内容包括咳嗽的定义、流行病学与发病机制, 咳嗽的诊断、评估与检查, 急性、亚急性、慢性咳嗽的诊断与治疗, 咳嗽的经验性治疗与对症治疗等。
中国医药教育协会慢性气道疾病专业委员会,中国哮喘联盟[2]（2021）在《呼出气一氧化氮检测及其在气道疾病诊治中应用的中国专家共识》文中研究表明呼出气中的一氧化氮（NO）水平与气道炎症及气道高反应性密切相关。近年来, 包括上下气道、大小气道NO检测技术的发展为支气管哮喘、慢性咳嗽、上气道疾病、慢性阻塞性肺疾病甚至少见气道疾病的诊断和治疗提供了重要参考。中国医药教育协会慢性气道疾病专业委员会和中国哮喘联盟在2015年发表的"无创气道炎症评估哮喘的临床应用中国专家共识"的基础上, 参照国际相关指南以及重要文献, 撰写本共识, 针对气道NO检测的方法学、质量控制、结果判读以及临床应用等方面提出指导意见, 以助更好应用该项技术指导临床诊疗。
袁也[3]（2021）在《加味参苓白术散联合穴位埋线治疗肺脾两虚型支气管哮喘慢性持续期临床观察》文中研究指明目的:观察加味参苓白术散与穴位埋线联合西药舒利迭治疗肺脾两虚型支气管哮喘慢性持续期患者的临床疗效,对比治疗前及治疗后患者肺功能指标、炎症相关指标呼出气一氧化氮（FeNO）、哮喘控制测试（ACT）评分、中医证候评分、缓解药物的使用情况、复发情况,为临床治疗支气管哮喘提供新思路。方法:本研究收集2019年1月至2020年7月就诊于秦皇岛市中医医院肺病科门诊及病房符合纳入标准的患者80例。按照随机对照原则,分为对照组（40例）和治疗组（40例）。对照组给予沙美特罗替卡松粉（舒利迭）吸入治疗。治疗组在对照组治疗基础上加服加味参苓白术散并联合穴位埋线治疗。1个月为1疗程,2组均连续治疗3个疗程。比较两组治疗前后肺功能指标,一氧化氮检测（FeNO）,哮喘控制测试（ACT）评分,中医证候积分,应急预案使用情况,复发情况。同时记录脱落和不良事件。选用软件SPSS23.0进行统计数据分析,评价疗效。结果:（1）肺功能指标（FEV1%、PEF）比较:治疗前后两组肺功能（FEV1%、PEF）水平比较,均有显着统计学差异（P<0.01）;治疗后两组组间比较,统计学差异显着（P<0.01）。（2）炎症相关指标（FeNO）比较:治疗前后两组FeNO水平比较,均有显着统计学差异（P<0.01）;治疗后两组组间比较,统计学差异显着（P<0.01）。（3）哮喘控制测试（ACT）评分比较:两组治疗前后ACT评分比较,均有显着统计学差异（P<0.01）;治疗后两组组间比较,统计学差异显着（P<0.01）。（4）中医证候积分比较:总疗效比较:对照组总有效率为76.92%,治疗组总有效率为97.37%,两组疗效比较有显着统计学差异（P<0.01）。治疗后,对照组腹胀便溏、倦怠乏力症状积分与治疗前比有统计学差异（P<0.05）,喘息气急、咳嗽、咳痰、哮鸣音、自汗而黏症状积分与治疗前比有显着统计学差异（P<0.01）;治疗组所有症状均与治疗前比有显着统计学差异（P<0.01）。治疗后,两组喘息气急、咳痰、哮鸣音症状积分比较无统计学差异（P>0.05）,咳嗽症状积分比较有统计学差异（P<0.05）,腹胀便溏、自汗、倦怠乏力症状积分有显着统计学差异（P<0.01）。（5）使用应急预案情况比较:两组患者治疗期间使用应急预案的患者例数比较有统计学差异（P<0.05）。（6）复发率比较:两组治疗结束后3个月复发率比较有统计学差异（P<0.05）。（7）安全性比较:两组患者治疗前后各安全性指标均在正常范围内,未见明显异常。结论:加味参苓白术散联合穴位埋线能有效改善肺脾两虚型支气管哮喘慢性持续期患者的肺功能水平,降低气道炎症水平,提高哮喘控制水平,降低中医证候积分,改善临床症状,降低复发率,减少急性发作;治疗过程中显示安全性良好,未见严重不良反应,值得推广应用。
陈芳芳[4]（2021）在《脂肪细胞来源外泌体在糖尿病动脉粥样硬化疾病中的作用及机制研究》文中提出研究背景糖尿病是21世纪全球最严重的公共卫生问题之一,我国已成为糖尿病患者总数最多的国家。与未患糖尿病的成年人相比,大约75%的2型糖尿病患者死于心血管并发症。研究表明,冠心病合并2型糖尿病患者的冠状动脉受累程度高且弥漫病变较多、狭窄程度较重,临床治疗困难明显增加。经皮冠状动脉介入治疗（Percutaneous coronary interventions,PCI）是目前用于治疗冠心病合并糖尿病的有效手段。但是在PCI日臻完善的今天,糖尿病一直是PCI术中并发症和术后近、远期预后不良的独立危险因素。糖尿病患者PCI术后支架内再狭窄发生率显着升高,是严重影响患者预后的主要因素。支架内再狭窄（Int-stentrestenosis,ISR）是涉及多种机制的复杂疾病过程,是恶化2型糖尿病心血管并发症患者预后的核心问题。现有观点认为以平滑肌细胞增殖为核心的血管内膜增生是支架内再狭窄的主要病理过程和关键环节。以此为靶点开发的雷帕霉素、紫杉醇药物洗脱支架可在一定程度上降低支架内再狭窄的发生率,但存在“晚期追赶现象”,且晚期支架内再狭窄发生率仍高达10%。由此推测平滑肌细胞增殖可能只是血管内膜增生的主要中间过程而非启动因素,而糖尿病导致PCI术后支架内再狭窄发生率显着增高的关键机制也尚未阐明。因此,探索糖尿病条件下血管内膜增生的启动环节,寻找以此为靶点的干预方法,才能从源头上阻断支架内再狭窄的发生发展。对于血管结构而言,内皮细胞作为管壁组织与血液中各种病理性刺激的天然屏障,是保护平滑肌细胞免受刺激因素干扰的关键,在血管内膜增生过程中可能是先于平滑肌细胞发挥作用的核心角色。支架的植入过程中存在内皮细胞受损,内皮细胞损伤是启动动脉粥样硬化的关键步骤。围手术期药物的规范应用已在最大程度上保护了内皮细胞的完整性,而平滑肌细胞仍能不断受到刺激而增殖。近期关于内皮细胞在刺激因素下向间质细胞转变即内皮间质转化（Endothelial-Mesenchymal Transition,EndMT）的研究给了我们一定的启示。EndMT 是指在某些特定的生理或病理条件下,内皮细胞失去其自身特异性抗原,而获得间质细胞抗原,同时其生物学特性明显改变,获得较强的增殖、迁移、收缩能力。EndMT在冠状动脉和肺动脉的发育过程中可使内皮细胞向平滑肌细胞进行转化,对心血管系统的正常发育有至关重要的作用。EndMT参与了诸多与血管内膜增生相关疾病的发生过程,促进动脉粥样硬化,但未涉及PCI术后再狭窄防治的研究。因此,EndMT可能是支架内再狭窄发生的关键步骤。近来研究证实,多种外界刺激因素在内皮细胞发生EndMT中起重要作用,包括高糖、炎症、低氧、脂代谢异常、氧化应激、机械牵张力、吸烟等,但是糖尿病、动脉粥样硬化及支架内再狭窄的发病机制复杂,涉及上述多种机制的协同作用。外泌体（Exosomes）能够携带大量蛋白质、核酸及脂质成分,整合来源细胞的有效刺激信息,有效实现信号的级联放大和远距离传输。Exosomes所携带、传递的信息成分多与其来源细胞/组织密切相关。糖尿病状态下,脂肪细胞来源外泌体（Adipocyte-derived exosomes,AdExos）含有脂肪组织炎症及胰岛素抵抗的相关蛋白及核酸成分,能够通过作用于靶细胞诱发多种生物学功能,可能是链接胰岛素抵抗的脂肪组织与糖尿病动脉血管之间的重要桥梁,是整合机体多种刺激因素,诱发EndMT的关键载体。Sonic hedgehog（Shh）作为Hedgehog蛋白三种同源形式之一,表达最广泛,活性最高,是参与胚胎发育的关键蛋白。在肿瘤领域的研究发现,Shh具有激活Snail信号通路促进上皮间质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）的作用,而EndMT是EMT的一种特殊类型。进一步研究证实,Snail信号通路亦是调节EndMT形成的关键信号通路。综上,我们提出研究假说:糖尿病状态下,携带Shh的AdExos增多,被内皮细胞摄取,AdExos通过其表面携带的Shh激活Snail依赖的EndMT过程,导致内皮细胞发生表型转换,逐渐向间质细胞转化,促进血管内膜增生,最终导致支架内再狭窄的发生。鉴于以上假说,我们将进行体内及体外实验,在整体和细胞水平研究脂肪细胞来源外泌体在血管再狭窄中的作用及具体机制。研究目的1.在整体动物水平证实AdExos通过其携带的Shh促进内皮间质转化,加剧血管内膜增生,进而影响糖尿病血管再狭窄的发生;2.从细胞水平探索AdExos促内皮间质转化的特性,验证AdExos通过其携带的Shh激活内皮细胞Snail信号通路并促进EndMT,为2型糖尿病PCI术后支架内再狭窄防治提供新的靶点。研究方法1.培养、诱导分化3T3-L1前脂肪细胞并建立胰岛素抵抗模型首先,我们通过胰岛素、3-异丁基-1-甲基,黄嘌呤与地塞米松联合诱导的方法将3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟的脂肪细胞,再通过高糖联合高胰岛素的方法建立胰岛素抵抗的脂肪细胞模型,采用无exosomes血清培养并收集细胞上清,获取对照组（Control,Ctrl）及胰岛素抵抗组（Insulin resistance,IR）脂肪细胞上清。2.Shh腺病毒转染3T3-L1脂肪细胞在建立胰岛素抵抗模型的基础上,我们再将Shh干扰及过表达的腺病毒转染入成熟脂肪细胞中,采用无exosomes血清培养后,收集细胞上清,获取胰岛素抵抗组、Shh干扰的胰岛素抵抗组、Shh过表达的胰岛素抵抗组及空载体胰岛素抵抗组的脂肪细胞上清。3.AdExos的分离提取及特征鉴定将前文中获得的多种脂肪细胞上清通过超速差速离心法,分离提取上清中的外泌体,由此获得对照组外泌体（Ctrl-AdExos）、胰岛素抵抗组外泌体（IR-AdExos）、Shh干扰的胰岛素抵抗组外泌体（IR-AdExosshh-）、Shh过表达的胰岛素抵抗组外泌体（IR-AdExosshh+）及空载体胰岛素抵抗组外泌体（IR-AdExosvector）;再采用透射电镜、动态光散射粒度仪、流式细胞仪及Western blot等方法进行AdExos的特征鉴定。4.2型糖尿病血管再狭窄ApoE-/-小鼠模型的构建4周龄的雄性ApoE-/-小鼠,适应性喂养1周后,禁食处理12～14小时,进行腹腔糖耐量试验（Intraperitoneal glucose tolerance test,IPGTT）后随机分为高脂饮食组和普通饮食组,高脂饮食组予以高脂饲料喂养,普通饮食组予以普通生长繁殖饲料喂养;6周后再次进行IPGTT试验,出现胰岛素抵抗的高脂饮食组小鼠给予一次性腹腔注射链脲佐菌素（Streptozotocin,STZ）（剂量标准为75mg/kg）,普通饮食组小鼠给予同等剂量的枸橼酸钠缓冲液进行腹腔注射;继续以原饲料喂养2周后,再次进行IPGTT试验和随机血糖检测,如果小鼠的随机血糖水平≥11.1mmol/L,且有多饮、多尿、多食等现象,则纳入2型糖尿病组。对2型糖尿病组小鼠和对照组小鼠通过植入股动脉袖套的方法构建血管再狭窄模型。分别给予生理盐水、IR-AdExos及IR-AdExosshh-经尾静脉注射,最后得到动物分组分别为普通饮食再狭窄组（Chow）、普通饮食+IR-AdExos再狭窄组（Chow+IR-AdExos）、普通饮食+IR-AdExosshh-再狭窄组（Chow+IR-AdExosshh）、糖尿病再狭窄组（DM）、糖尿病+IR-AdExos再狭窄组（DM+IR-AdExos）及糖尿病+IR-AdExosshh-再狭窄组（DM+IR-AdExosshh-）。5.小鼠体内血管对AdExos的摄取为了验证小鼠血管能够摄取AdExos,我们采用PKH26染料标记AdExos,经尾静脉注射入再狭窄模型小鼠,制作血管标本切片,通过免疫荧光染色观察AdExos在体内的摄取情况。6.病理组织学染色观察血管再狭窄情况对股动脉再狭窄部位组织标本切片进行Hematoxylin-eosin staining（HE）染色、Verhoeffs Van Gieson弹性纤维染色及免疫组化染色,观察血管再狭窄情况。7.免疫荧光染色检测再狭窄部位EndMT发生情况通过进行 CD31 和 SM22α、CD31 和 Vimentin、Ve-Cadherin 和 SM22α、Ve-Cadherin和Vimentin免疫荧光共定位染色的方法检测血管再狭窄部位EndMT的发生情况。8.分离提取小鼠主动脉内皮细胞,验证内皮细胞对AdExos的摄取为了进一步研究AdExos对内皮细胞发生内皮间质转化的影响,我们进行了体外细胞实验,通过酶消法提取小鼠主动脉内皮细胞,给予PKH26标记的AdExos,采用鬼笔环肽标记细胞骨架蛋白,显微镜下观察内皮细胞对AdExos的摄取。9.AdExos刺激孵育小鼠主动脉内皮细胞,检测细胞中EndMT发生情况再将所获取的Ctrl-AdExos、IR-AdExos、IR-AdExosshh-、IR-AdExosshh+、IR-AdExosvector等不同培养条件来源的AdExos及TGF-β、SHH重组蛋白用以刺激孵育小鼠主动脉内皮细胞,通过免疫荧光染色及Western blot的方法评价内皮标记物和间质标记物的表达变化及EndMT的发生情况。10.Western blot 检测分子机制方面,取AdExos及重组蛋白刺激孵育后的小鼠主动脉内皮细胞,提取蛋白质,采用Western blot方法检测Shh、内皮细胞及间质细胞标记物的表达及信号通路分子的表达情况。研究结果1.建立3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型3T3-L1前脂肪细胞诱导分化至成熟脂肪细胞后,细胞质内出现较多、较大的脂滴;高糖高胰岛素条件培养成熟脂肪细胞24h后,脂肪细胞总蛋白中总IRS1表达量显着减少,磷酸化Ser307位点的IRS1表达量显着增高,Akt的磷酸化水平降低;脂肪细胞细胞膜蛋白Glut4表达减少而细胞浆蛋白Glut4表达增加,提示胰岛素抵抗状态下Glut4细胞膜转位减少;胰岛素抵抗状态下,脂肪细胞脂质沉积增多。上述结果表明我们成功建立了 3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型。2.AdExos的分离提取及特征鉴定透射电镜观察下发现AdExos呈膜包被的囊泡状,直径在30～100nm范围内;动态光散射粒度仪结果表明AdExos直径范围分布于30～100nm;Western blot及流式细胞学结果表明AdExos阳性表达CD63、TSG101及CD81,而不表达GRP94和Calnexin。3.构建2型糖尿病血管再狭窄ApoE-/-小鼠模型ApoE-/-小鼠通过高脂饮食饲养联合链脲佐菌素（Streptozotocin,STZ）一次性注射的方法构建2型糖尿病模型,糖尿病小鼠随机血糖≥11.1 mmol/L,且有多饮、多尿、多食等现象。在此模型的基础上,通过股动脉袖套植入的方式构建再狭窄模型。4.糖尿病脂肪组织来源外泌体富集Shh分子通过Western blot方法检测对照组和糖尿病组小鼠脂肪组织来源外泌体蛋白中Shh分子的表达情况,结果表明糖尿病组小鼠脂肪组织来源外泌体中Shh含量显着高于对照组,证明糖尿病脂肪组织来源外泌体富集Shh分子。5.小鼠体内血管对AdExos的摄取在免疫荧光显微镜下进行观察,发现PKH26标记的AdExos呈红色荧光,分布于小鼠血管范围内,证明小鼠血管能够成功摄取AdExos。6.IR-AdExos通过携带的Shh分子促进血管再狭窄高分辨率显微超声技术检测股动脉收缩期最大流速（Peak systolic velocity,PSV）,HE染色分析血管再狭窄,综合二者结果确定血管再狭窄情况。结果表明,糖尿病组小鼠股动脉再狭窄情况与普通饮食组相比明显加重;与普通饮食组或糖尿病组相比,普通饮食+IR-AdExos组或糖尿病+IR-AdExos组的再狭窄情况进一步加重;而Shh蛋白敲减后的IR-AdExos,其促血管再狭窄的能力有所下降,即普通饮食+IR-AdExosshh-组小鼠股动脉再狭窄较普通饮食+IR-AdExos组小鼠更轻,糖尿病+IR-AdExosshh-组小鼠股动脉再狭窄程度比糖尿病+IR-AdExos组小鼠更轻。7.IR-AdExos通过携带的Shh分子促进股动脉再狭窄部位EndMT的发生通过免疫荧光共定位的方法检测血管再狭窄部位发生EndMT的情况,免疫荧光共定位时,如果内皮细胞同时表达内皮细胞特征性标志物（CD31、Ve-Cadherin）和间充质细胞特征性标志物（SM22α、Vimentin）则记为发生内皮细间质转化的细胞。结果表明糖尿病状态下,内皮细胞标志物减少,间质细胞标志物增加,提示发生EndMT;尾静脉注射IR-AdExos能够进一步促进EndMT的发生,而敲减Shh的IR-AdExos其促EndMT作用减弱,证明IR-AdExos表面的Shh分子是IR-AdExos发挥促EndMT作用的主要分子靶点。8.成功提取原代小鼠主动脉内皮细胞,小鼠主动脉内皮细胞能够摄取AdExos我们采用酶消法成功提取小鼠主动脉内皮细胞,经免疫荧光染色证明所提取的内皮细胞阳性表达内皮细胞标记物CD31,证明小鼠主动脉内皮细胞提取成功。将PKH26标记的AdExos与小鼠主动脉内皮细胞共同孵育,显微镜下观察可见细胞浆内有红色荧光,即为被小鼠主动脉内皮细胞摄取的AdExos,证明小鼠主动脉内皮细胞能够摄取AdExos。9.AdExos促进内皮细胞发生EndMT将 Ctrl-AdExos、IR-AdExos、IR-AdExosshh-、IR-AdExosshh+、IR-AdExosvector等不同培养条件来源的AdExos及TGF-β、SHH重组蛋白刺激孵育小鼠主动脉内皮细胞后,通过免疫荧光共定位的方法检测内皮细胞EndMT的发生。免疫荧光共定位时,如果内皮细胞同时表达内皮细胞特征性标志物（CD31、Ve-Cadherin）和间充质细胞特征性标志物（α-SMA、FAP、FSP-1）则记为发生内皮细间质转化的细胞。与Ctrl组相比,IR-AdExos组内皮细胞发生EndMT增多;与IR-AdExos组相比,IR-AdExosshh-组发生EndMT的内皮细胞数量并无显着增加,而IR-AdExosshh+组中发生EndMT的内皮细胞数量进一步增加;TGF-β作为阳性对照,在其刺激下,发生EndMT的内皮细胞数量显着增加;SHH重组蛋白刺激组中,发生EndMT的内皮细胞数量也有显着增加。上述结果表明,IR-AdExos能够促进内皮细胞发生EndMT,且该作用是经由其携带的Shh分子发挥的。另,TGF-β及SHH也具有促进内皮细胞发生EndMT的作用。10.IR-AdExos促进血管再狭窄EndMT的分子机制与Ctrl组相比,IR-AdExos组内皮细胞中Snail和Slug表达显着升高。证明IR-AdExos的促EndMT作用是通过其表面的Shh作用于下游的Snail和Slug分子发挥作用。研究结论1.胰岛素抵抗条件下,脂肪细胞中脂质含量增多,脂肪细胞来源外泌体富集Shh分子;2.IR-AdExos能够通过携带的Shh分子,经由Shh/Snail/Slug信号通路促进小鼠主动脉内皮细胞发生EndMT;3.富集Shh的IR-AdExos能够明显促进血管内皮细胞发生间质转化,进而加剧糖尿病小鼠血管再狭窄的发生,可能是糖尿病脂肪组织促进血管再狭窄的重要机制之一,IR-AdExos有望成为进一步防治糖尿病ISR的新靶点。研究背景糖尿病已成为21世纪威胁人类生命健康的重大慢性疾病之一。近年来,我国糖尿病患病率增长迅速,中国已成为全球糖尿病患者总数最多的国家。心血管疾病是糖尿病患者的主要死亡原因。粥样斑块破裂导致的急性冠脉综合征是糖尿病患者心血管事件的主要原因。但是糖尿病患者冠状动脉病变严重、易损斑块发生率高的机制尚未完全阐明。循证医学证据表明,积极控制血糖可以降低糖尿病患者微血管病变的发生率,但强化降糖治疗能否降低2型糖尿病患者心血管事件的发生率尚未得到证实。这提示血糖和胰岛素水平仅能反映代谢水平,而不是糖尿病患者冠状动脉病变严重、易损斑块发生率高的根本原因。因此,亟需深入探讨糖尿病患者大血管并发症增加的深层次机制。既往研究发现动脉粥样硬化斑块内常出现病理性新生血管,且在易损斑块和斑块易损部位尤为明显,与斑块稳定性密切相关。病理性新生血管是动脉粥样硬化易损斑块形成的关键环节。越来越多的证据表明,动脉损伤部位病理性新生血管形成与粥样硬化斑块引起的急性冠脉综合症有关,这些斑块脆性较大且易发生破裂,进而导致血管阻塞。除了斑块内出血机制以外,病理性新生血管还通过白细胞征募来促进动脉粥样硬化斑块的不稳定性。2型糖尿病和动脉粥样硬化同属慢性炎症性疾病,在2型糖尿病状态下,脂质在脂肪细胞中不断存储,随着脂肪细胞逐渐增大,导致脂肪细胞功能失调,脂肪因子分泌紊乱,大量促炎因子合成释放,引发全身代谢性炎症反应、胰岛素抵抗,从而加速斑块进展,促进易损斑块的形成。此外,有研究发现,脂肪细胞能够分泌内皮特异性丝裂原和促血管生长因子,参与新生血管的形成。但功能失调的脂肪组织如何促进斑块内新生血管的形成,从而促进斑块发生发展的确切机制至今尚未见报道。近期,有学者认为外泌体（Exosomes）是脂肪组织与血管间信息传递的重要载体。Exosomes是由多种细胞（如血小板、内皮细胞、单核细胞等）产生的,携带大量与其细胞/组织来源和功能密切相关的蛋白质、核酸和脂质成分。可实现信号的级联放大和远距离传输。在人体内所有exosomes中,脂肪细胞来源的exosomes（Adipocyte-derived exosomes,AdExos）与糖尿病动脉粥样硬化的发生发展及新生血管形成的关系日益引起人们的关注。Hulsmans等认为,AdExos是将脂肪组织产生的炎症及氧化应激信息传递到血管的重要使者,从而引起内皮损伤、诱发动脉粥样硬化。但是,AdExos对于斑块稳定性变化及斑块内病理性新生血管的形成有无影响尚未见报道。研究发现AdExos富含纤粘连蛋白、层粘连蛋白,有利于循环中的AdExos粘附、迁移、浸润于内皮细胞。糖尿病慢性低度炎症状态下,受损的内皮细胞通透性增加且炎症因子（IL-6、IL-8）、趋化因子（MCP-1）、粘附因子（VCAM-1、E-selectin）表达上调,为循环中的AdExos粘附、浸润创造了良好的条件。此外,AdExos携带丰富的促血管生成miRNA,如miR221、miR27b、miR21、miR17～92等。脂肪组织作为内分泌器官,是多器官间相互联系的纽带。Hedgehog 蛋白在哺乳动物中有 Sonichedgehog（Shh）、Indianhedgehog（Ihh）及Desert hedgehog（Dhh）三种同源形式,其中Shh表达最广泛,活性最高。Hedgehog在斑马鱼胚胎发育中通过VEGF促进主动脉生成。Shh缺失的小鼠发育中的肺缺乏正常血管化的能力。Hedgehog信号可通过控制众多促血管生成因子包括VEGF-a,VEGF-b,VEGF-c及AngII的表达而调控新生血管的生成。Hedgehog蛋白促血管生成功能的发挥是通过连接到一种12次跨膜受体蛋白--Patched实现的。在正常情况下,Patched受体与另一种7次跨膜受体蛋白——Smoothened（Smo）相结合且抑制Smo的作用。当Hedgehog蛋白与Patched受体结合后,解除了对Smo的抑制作用,进而启动信号转导。Smo是Hedgehog信号通路的信息转换器,把细胞外的Hedgehog蛋白信号向细胞内传递,激活胶质瘤相关原癌基因（Glioma-associated oncogene homolog,Gli）转录因子。综上所述,我们提出了如下假说:糖尿病状态下,功能失调的脂肪组织释放入循环血液中的AdExos数量增多,其通过其表面的Hedgehog蛋白与内皮细胞上的Patched受体结合,促进病理性新生血管的形成,加速斑块进展及易损斑块的形成。研究目的1.从细胞水平分析AdExos促血管生成的特性;2.体外验证AdExos是否通过启动Hedgehog信号通路,促进新生血管的形成。研究方法1.培养、诱导分化3T3-L1前脂肪细胞并建立胰岛素抵抗模型通过胰岛素、3-异丁基-1-甲基-黄嘌呤与地塞米松联合诱导的方法将3T3-LI前脂肪细胞诱导分化为成熟的脂肪细胞。再通过高糖+高胰岛素的方法建立胰岛素抵抗的脂肪细胞模型。采用无exosomes血清培养并收集细胞上清,获取对照组（Control,Ctrl）及胰岛素抵抗组（Insulin resistance,IR）脂肪细胞上清。2.Shh腺病毒转染3T3-L1脂肪细胞在建立胰岛素抵抗模型的基础上,我们再将Shh干扰及过表达的腺病毒转染入成熟脂肪细胞中,采用无exosomes血清培养后,收集细胞上清,获取胰岛素抵抗组、Shh干扰的胰岛素抵抗组、Shh过表达的胰岛素抵抗组及空载体胰岛素抵抗组的脂肪细胞上清。3.AdExos的分离提取将前文中获得的多种脂肪细胞上清通过超速差速离心法,分离提取上清中的外泌体,由此获得对照组外泌体（Ctrl-AdExos）、胰岛素抵抗组外泌体（IR-AdExos）、Shh干扰的胰岛素抵抗组外泌体（IR-AdExosshh-）、Shh过表达的胰岛素抵抗组外泌体（IR-AdExosshh+）及空载体胰岛素抵抗组外泌体（IR-AdExosvector）。4.分离提取小鼠主动脉内皮细胞,验证内皮细胞对AdExos的摄取为了进一步研究AdExos对内皮细胞血管新生能力的影响,我们进行了体外细胞实验,通过酶消法提取小鼠主动脉内皮细胞,给予PKH26标记的AdExos,显微镜下观察内皮细胞对AdExos的摄取。5.AdExos刺激孵育小鼠主动脉内皮细胞,检测内皮细胞功能的改变将所获取的 Ctrl-AdExos、IR-AdExos、IR-AdExosshh-、IR-AdExosshh+、IR-AdExosvector等不同培养条件来源的AdExos及VEGF、SHH重组蛋白用以刺激孵育小鼠主动脉内皮细胞,通过PCNA/KI67免疫荧光染色检测内皮细胞增殖功能,通过细胞划痕实验检测迁移功能。6.小管形成实验检测AdExos促血管新生的特性将 Ctrl-AdExos、IR-AdExos、IR-AdExosshh-、IR-AdExosshh+、IR-AdExosvector等不同培养条件来源的AdExos及VEGF、SHH重组蛋白用以刺激孵育小鼠主动脉内皮细胞,通过小管形成实验观察小管形成的数量及分支长度,评价AdExos的促血管新生的能力。7.Hedgehog信号通路在AdExos促血管新生中的作用分子机制方面,给予Hedgehog蛋白阻断剂——环巴胺阻断Hedgehog信号通路,通过小管形成实验观察小管形成的数量及分支长度,检测内皮细胞的小管形成功能。给予Hedgehog蛋白阻断剂——环巴胺和Gli抑制剂——Gant61刺激孵育,提取小鼠主动脉内皮细胞的蛋白质,通过Western blot方法检测信号通路分子的表达情况。研究结果1.成功提取原代小鼠主动脉内皮细胞,小鼠主动脉内皮细胞能够摄取AdExos我们采用酶消法成功提取小鼠主动脉内皮细胞,经免疫荧光染色证明所提取的内皮细胞阳性表达内皮细胞标记物CD31,证明小鼠主动脉内皮细胞提取成功。将PKH26标记的AdExos与小鼠主动脉内皮细胞共同孵育,显微镜下观察可见细胞浆内有红色荧光,即为被小鼠主动脉内皮细胞摄取的AdExos,证明小鼠主动脉内皮细胞能够摄取AdExos。2.IR-AdExos改变小鼠主动脉内皮细胞的增殖和迁移功能用Ctrl-AdExos、IR-AdExos、VEGF及SHH重组蛋白刺激孵育小鼠主动脉内皮细胞。首先进行PCNA和KI67免疫荧光染色,结果显示:与对照组相比,Ctrl-AdExos刺激组的PCNA和KI67的表达量有所增加,IR-AdExos刺激组的PCNA和KI67的表达量显着增加,以VEGF作为促血管新生的阳性对照用以刺激内皮细胞,结果发现,与对照组相比,VEGF刺激组中内皮细胞的PCNA及KI67表达量均显着增加。表明IR-AdExos、VEGF能够显着增强内皮细胞的增殖功能。细胞划痕实验结果显示:与对照组相比,Ctrl-AdExos刺激组的细胞迁移率有增加,IR-AdExos细胞迁移率显着增加,VEGF刺激组细胞迁移率明显增加。表明IR-AdExos、VEGF能够显着增强内皮细胞的迁移功能。3.AdExos促进小鼠主动脉内皮细胞的小管形成功能用Ctrl-AdExos、IR-AdExos、VEGF及SHH重组蛋白刺激孵育小鼠主动脉内皮细胞。进行小管形成实验,结果发现:与对照组相比,Ctrl-AdExos刺激组细胞小管形成数量、分支长度增加,IR-AdExos刺激组细胞小管形成数量、分支长度显着增加,VEGF阳性对照组内皮细胞小管形成数量、分支长度显着增加。表明IR-AdExos、VEGF能够明显增强内皮细胞的小管形成功能。4.Shh基因干预的IR-AdExos影响小鼠主动脉内皮细胞的增殖和迁移功能用 IR-AdExos、IR-AdExosshh-、IR-AdExosshh+、IR-AdExosvector 等不同培养条件来源的AdExos及VEGF、SHH重组蛋白刺激孵育小鼠主动脉内皮细胞。进行PCNA和KI67免疫荧光染色,结果显示:与IR-AdExos组相比,IR-AdExosshh-组中内皮细胞PCNA、KI67的表达量有所降低,IR-AdExosshh+组内皮细胞中PCNA、KI67的表达量显着增加。表明Shh是IR-AdExos促进内皮细胞增殖功能的重要分子。细胞划痕实验结果显示:与IR-AdExos组相比,IR-AdExosshh-组中细胞迁移率降低,IR-AdExosshh+组内皮细胞细胞迁移率显着增加。表明Shh是IR-AdExos促进内皮细胞迁移功能的重要分子。5.Shh基因干预的IR-AdExos影响小鼠主动脉内皮细胞的小管形成功能用 IR-AdExos、IR-AdExosshh-、IR-AdExosshh+、IR-AdExosvector 等不同培养条件来源的AdExos及VEGF、SHH重组蛋白刺激孵育小鼠主动脉内皮细胞。进行小管形成实验,结果显示:与IR-AdExos组相比,IR-AdExosshh-组中内皮细胞小管形成数量、分支长度降低,IR-AdExosshh+组内皮细胞小管形成数量、分支长度显着增加。表明Shh是IR-AdExos促进内皮细胞血管新生的重要分子。6.Hedgehog信号通路在AdExos促血管新生中的作用给予 Hedgehog 抑制剂环巴胺和 IR-AdExos、IR-AdExosshh-、IR-AdExosshh+、IR-AdExosvector等不同培养条件来源的AdExos以及VEGF重组蛋白刺激孵育小鼠主动脉内皮细胞和人脐静脉内皮细胞,检测内皮细胞小管形成功能,结果表明IR-AdExos+环巴胺组的小管形成数量、分支长度显着降低,证明Hedgehog是AdExos促血管新生的关键分子。7.AdExos促血管新生信号通路分子的表达情况给予Hedgehog抑制剂环巴胺、Gli抑制剂Gant61及IR-AdExosshh+刺激孵育小鼠主动脉内皮细胞和人脐静脉内皮细胞。Western blot结果显示:IR-AdExosshh+刺激条件下,小鼠主动脉内皮细胞中Gli表达量显着升高;给予环巴胺和Gant61（Gli抑制剂）后,Gli表达量显着降低,证明AdExos通过Patched/Gli信号通路促进血管新生。研究结论1.IR-AdExos能够增强小鼠主动脉内皮细胞增殖、迁移和小管形成功能,促进血管新生;2.Shh是IR-AdExos促进内皮细胞功能改变的关键分子;3.IR-AdExos通过Patched/Gli信号通路促进血管新生。
姜临霞[5]（2021）在《基于M1型巨噬细胞靶向的姜黄素脂质体干预ALI细胞因子风暴研究》文中研究表明目的:急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征（ALI/ARDs）是COVID-19的常见并发症,其引发的呼吸衰竭是导致COVID-19患者死亡的主要原因。多种细胞因子大量释放引发的细胞因子风暴是导致ALI/ARDs的重要原因,其会引起机体过度的炎症反应以及免疫系统对机体的猛烈攻击。对COVID-19死亡患者进行解剖发现,患者肺部主要存在以肺泡巨噬细胞为主的炎症浸润,表明具有促炎表型的M1型肺泡巨噬细胞是参与COVID-19细胞因子风暴形成的主要免疫细胞。鉴于M1型肺泡巨噬细胞在COVID-19细胞因子风暴中的核心作用,本研究选择具有抗炎活性的姜黄素为模型药物,L-精氨酸为靶向配体,制备L-精氨酸修饰的姜黄素脂质体（Arg-Cur-Lip）,经肺部雾化给药,基于M1型巨噬细胞靶向实现对细胞因子风暴炎性环境的精确给药,增加药物在炎性环境的浓度,最大限度的干预细胞因子风暴反应,提高药物的治疗作用。为研发干预COVID-19等肺部急性感染性疾病细胞因子风暴的有效药物提供新的思路和理论支撑。方法:（1）采用薄膜分散-探头超声法制备了姜黄素脂质体（Cur-Lip）,将Cur-Lip与L-精氨酸通过EDC/NHS反应进行共价偶联,制得Arg-Cur-Lip,并对其外观、微观形态、粒径、Zeta电位、包封率以及L-精氨酸对于脂质体氨基的修饰效率进行评价。（2）利用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜评价了 Arg-Cur-Lip对M1型巨噬细胞的体外靶向性,M0、M1和M2型巨噬细胞对于Arg-Cur-Lip摄取能力的差异以及M1型巨噬细胞内吞Arg-Cur-Lip的机制。（3）制备了包载荧光染料DiR的脂质体（DiR-Lip）和L-精氨酸修饰的DiR脂质体（Arg-DiR-Lip）,通过肺部液体定量雾化器将Arg-DiR-Lip递送到大鼠肺部,利用小动物活体成像测定其在大鼠ALI模型肺部和各组织中的分布,评价其肺部靶向性。（4）在体外,利用一氧化氮试剂盒（NO）、酶联免疫试剂盒（ELISA）及实时荧光定量PCR（qRT-PCR）等方法评价了 Arg-Cur-Lip对LPS诱导的M1型巨噬细胞炎症模型的抑制作用。（5）通过肺部液体定量雾化器将Arg-Cur-Lip递送到大鼠ALI模型的肺部,初步评价Arg-Cur-Lip对大鼠ALI模型的治疗作用。结果:（1）制备的Arg-Cur-Lip外观呈黄色,分散均匀无沉淀,并伴有乳光现象,粒径分散均匀,平均粒径 142.73±13.47nm,PDI 0.17±0.03,Zeta 电位-24.67±0.56 mV,包封率103.27±3.86%,L-精氨酸对于脂质体上氨基的修饰效率19.15±5.51%。（2）流式细胞仪和激光共聚焦显微镜的结果均显示Arg-Cur-Lip在M1型巨噬细胞中具有更强的荧光强度,表现出良好的靶向性;与M0和M2型巨噬细胞相比,M1型巨噬细胞对Arg-Cur-Lip具有更强的摄取能力;此外,在多种内吞抑制剂的作用下,仅有氯丙嗪（CPZ）显着抑制了 M1型巨噬细胞对于Arg-Cur-Lip的摄取（P<0.01）,其摄取抑制率为65.23%,因此,我们推测网格蛋白介导型的内吞作用是M1型巨噬细胞内吞Arg-Cur-Lip的主要途径。（3）小动物活体成像的结果表明,与DiR-Lip组相比,Arg-DiR-Lip组在给药后4 h、12h、24h肺部具有更强的荧光强度,表明Arg-DiR-Lip具有明显的肺部靶向性。（4）体外抗炎实验结果表明,地塞米松（Dex）、姜黄素、Cur-Lip、Arg-Cur-Lip均能显着抑制LPS诱导的M1型巨噬细胞NO、炎症因子及其mRNA表达水平的上调,与Dex或姜黄素相比,Cur-Lip、Arg-Cur-Lip均显示出更强的抑制作用;但与Cur-Lip组相比,Arg-Cur-Lip仅对NO的表达显示出更强的抑制作用,在抑制炎症因子及其mRNA表达水平上,Arg-Cur-Lip并未显示出明显的优势。（5）体内初步药效学实验结果表明,Cur-Lip、Arg-Cur-Lip 均能改善 LPS 诱导的大鼠 ALI 模型的肺组织损伤性病变,显着抑制LPS诱导的TNF-α和IL-6表达水平的上调,Arg-Cur-Lip组对大鼠ALI模型的药效稍强于Cur-Lip,但两组在炎症因子表达水平上无统计学差异。结论:本研究利用L-精氨酸对姜黄素脂质体表面进行修饰,制备得到具有M1型巨噬细胞靶向的Arg-Cur-Lip。实验结果表明,Arg-Cur-Lip分别在体外和体内表现出对M1型巨噬细胞和肺组织的靶向性。药效学实验表明,Arg-Cur-Lip对LPS体外诱导的炎症模型和体内诱导的大鼠ALI模型,均具有较强的治疗作用。综上所述,本研究针对细胞因子风暴制备的Arg-Cur-Lip,能够实现药物对于炎性细胞/环境的靶向性,并对多种炎症因子的表达具有较强的抑制作用,其为研发干预COVID-19等肺部急性感染性疾病细胞因子风暴的有效药物和治疗手段提供了新的思路和理论依据。
张静怡[6]（2021）在《呼出气一氧化氮水平与慢性咳嗽中医证候的相关性研究及祛风咳敏方的疗效观察》文中认为目的1.比较不同FeNO值水平的慢性咳嗽患者在一般资料、证候表现、中医证型以及血嗜酸粒细胞方面分布情况的差异,探讨FeNO值水平与慢性咳嗽中医证候的相关性。2.通过一项临床随机对照试验对孙增涛教授经验方祛风咳敏方治疗咳嗽变异性哮喘的疗效进行观察分析,明确其在治疗咳嗽变异性哮喘中的优势。资料与方法1.研究病例来源于2019年11月至2021年2月就诊于天津中医药大学第二附属医院呼吸科门诊的132例符合纳入标准的慢性咳嗽患者。根据FeNO值水平将全部病例分为FeNO正常组与FeNO升高组,其中FeNO正常组61例,FeNO升高组71例。两组患者均使用临床证候调查表进行证候调查,并详细记录相关辅助检查,并使用SPSS 22.0进行统计学分析。2.采用临床随机对照试验设计,将2019年11月至2021年2月期间门诊收治的符合纳入标准的64例咳嗽变异性哮喘患者进行分组治疗,中药组（祛风咳敏方）与西药组（布地奈德福莫特罗粉吸入剂）各32例,两组连续用药治疗2周,对两组患者治疗前后的咳嗽VAS评分、中医证候积分、莱彻斯特咳嗽生活质量评分的情况进行比较,并使用SPSS 22.0进行统计学分析。结果1.第一部分研究收录的132例慢性咳嗽患者中,女性患者较为多见,在临床症状中,夜间咳嗽、阵咳、痰量少、干咳无痰、泡沫痰、痰色透明、异味刺激和咽痒症状发生的频率随着FeNO水平增高存在明显的上升趋势;在证型分布情况上,风邪伏肺、肺脾两虚、痰热郁肺三项证型最为常见,风邪伏肺证的FeNO值较其他证型明显增高,并且在证型分布中所占比例随着FeNO水平的升高存在一定的上升趋势。两组患者血嗜酸粒细胞百分比与FeNO水平呈正相关。2.祛风咳敏方治疗咳嗽变异性哮喘风邪伏肺证的结果显示,在咳嗽VAS评分方面,两组患者治疗前后比较,中药组Z=-4.916,P=0.00（<0.01）,西药组Z=-1.528,P=0.127（<0.05）,均存在统计学差异。两组组间比较Z=-0.587,P=0.558（>0.05）,无统计学意义。3.在改善各单项症状方面,两组治疗对日间咳嗽、夜间咳嗽、咳痰咽干咽痒、遇刺激物诱发或加重、气急和胸闷症状方面均有改善（P<0.05）。组间对比显示,在改善日间咳嗽、咽干咽痒、遇刺激物诱发或加重、气急和胸闷症状方面,两组间有统计学差异（P<0.05）,在改善夜间咳嗽、咳痰症状方面,两组间无统计学差异（P>0.05）。4.中医证候积分方面,两组组内比较,中药组Z=-4.953,P=0.00（<0.01）,西药组Z=-4.891,P=0.00（<0.01）,均具有统计学差异,两组组间比较,Z=-3.743,P=0.00（<0.01）,具有统计学差异。5.生活质量方面,根据莱彻斯特咳嗽问卷评分,两组治疗在咳嗽生活质量的心理、生理、社会和总分数方面均有改善（P<0.05）,组间对比显示,两组在咳嗽生活质量的心理、生理、社会和总分数方面无明显统计学差异（P<0.05）。6.总有效率方面,中药组中1例临床控制（3.13%）、9例显效（28.13%）、21例有效（65.63%）、1例无效（3.13%）,总有效率为96.88%;西药组中0例临床控制、2例显效（6.25%）、28例有效（87.5%）、2例无效（6.25%）,总有效率为93.75%。对两组有效率进行比较X2=6.717,P=0.046,两组间存在统计差异。结论1.第一部分研究表明慢性咳嗽患者以女性较为多见,随着FeNO水平的增高,夜间咳嗽、阵咳、痰量少、干咳无痰、泡沫痰、痰色透明、异味刺激和咽痒症状发生的频率存在明显增高。慢性咳嗽的证型以风邪伏肺、肺脾两虚、痰热郁肺最为常见,其中,风邪伏肺证与FeNO值的升高关系密切。两组肺功能指标无统计学差异,表明呼出气一氧化氮比肺功能更加敏感,能够反映慢性咳嗽患者中医证候特征。在反映气道炎症及临床特征方面血嗜酸粒细胞百分比与FeNO水平可以相互补充。2.第二部分研究表明祛风咳敏方在治疗咳嗽变异性哮喘风邪伏肺证上,能明显改善患者咳嗽症状、伴随症状、中医证候及生活质量,且安全性高,无明显副作用,值得进一步推广于临床。
徐琳[7]（2021）在《呼出气一氧化氮测定在慢性咳嗽患者应用布地奈德福莫特罗吸入剂疗效评价》文中指出目的探讨呼出气一氧化氮（FeNO）测定对指导慢性咳嗽患者合理吸入布地奈德福莫特罗治疗的临床价值。方法选取2019年1—12月该院收治的78例慢性咳嗽患者作为观察组,将布地奈德福莫特罗吸入剂治疗4周后治疗有效的患者列为A组（52例）、治疗无效的患者列为B组（26例）,另选取25例正常健康志愿者为对照组,比较各组对象的FeNO水平,采用ROC曲线评价FeNO值对慢性咳嗽患者应用布地奈德福莫特罗吸入剂治疗效果的预测价值。结果观察组治疗前FENO值均明显高于对照组,治疗后观察组FeNO值均较治疗前明显下降,差异有统计学意义（t=25.142、18.360,P<0.05）;治疗前,A组、B组间FeNO值比较,差异无统计学意义（t=0.422,P>0.05）;治疗后,A组、B组的FeNO值均明显低于治疗前（t=30.155、5.199,P<0.05）,且A组患者治疗后FeNO值为（27.15±8.69）ppb明显低于B组（50.16±16.11）ppb,差异有统计学意义（t=8.213,P<0.05）。ROC曲线显示,FeNO预测应用布地奈德福莫特罗吸入剂治疗效果的曲线下面积（AUC）为0.868。结论 FeNO对于慢性咳嗽的评估及指导治疗有一定的临床意义。
秦良楠[8]（2021）在《苏黄止咳胶囊联合盐酸西替利嗪片治疗感冒后咳嗽的临床疗效及安全性研究》文中研究表明目的:苏黄止咳胶囊和盐酸西替利嗪片是目前对感冒后咳嗽既安全又有效的两种药物,但是两药独自应用仍然无法达到满意的疗效。本研究通过对（日间、夜间、总）咳嗽症状评分、视觉模拟评分（VAS）、呼出气一氧化氮（FeNO）水平及安全性指标的分析来评价联合使用苏黄止咳胶囊和盐酸西替利嗪片对感冒后咳嗽的疗效及安全性,旨在为感冒后咳嗽寻求一种更有效的药物治疗新方法。方法:严格根据入选标准和排除标准筛选出感冒后咳嗽患者66例,按照随机数字表法,随机分为苏黄止咳胶囊组（A组）、盐酸西替利嗪片组（B组）、联合治疗组（C组）,A组每日早、中、晚各给予苏黄止咳胶囊3粒（1.35g）口服,B组每晚给予盐酸西替利嗪片1片（10mg）口服,C组给予苏黄止咳胶囊联合盐酸西替利嗪片口服,用法同前,每组治疗期均为7天。在初诊时（基线期）和治疗期7天末,对各种疗效指标[（日间、夜间、总）咳嗽症状评分、VAS、FeNO水平]及安全性指标进行检测。采用SPSS 25.0软件进行统计学分析,计量资料数据采用x±s表示,符合方差齐的数据其组间比较采用单因素方差分析,组内前后比较采用配对t检验,组间两两比较采用独立样本t检验,计数资料以百分数表示采用x2检验,等级资料采用秩和检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果:1.最终纳入符合方案疗效分析的患者65例,其中A组21例、B组22例、C组22例。三组在性别、年龄、病程、吸烟史及体重指数等人口学及（日间、夜间、总）咳嗽症状评分、VAS、FeNO水平、肺功能等基线特征方面比较差异均无统计学意义（P>0.05）,具有可比性。2.各组治疗后与本组治疗前比较:三组的（日间、夜间、总）咳嗽症状评分、VAS、FeNO水平均显着降低,具有统计学差异（均P<0.01）。3.治疗后C组与A组比较:（1）C组的（日间、夜间、总）咳嗽症状评分、VAS均明显降低（P<0.05或P<0.01）,均有统计学差异;（2）C组的FeNO水平虽有降低趋势,但无统计学差异（P>0.05）。4.治疗后C组与B组比较:（1）C组的（日间、夜间、总）咳嗽症状评分、VAS均显着降低（均P<0.01）,均有统计学差异;（2）C组的FeNO水平虽有降低趋势,但无统计学差异（P>0.05）。5.治疗后A组与B组比较:（1）A组的（日间、夜间、总）咳嗽症状评分、VAS均略低于B组,但无统计学差异（P>0.05）;（2）A组的FeNO水平虽有降低趋势,但无统计学差异（P>0.05）。6.咳嗽症状改善有效率比较:A组的总有效率是85.7%,B组的总有效率是81.8%,C组的总有效率是95.5%,C组的总有效率明显高于单独用药组。7.治疗后,A组中有1例出现胃部不适（1/21）,B组中有1例出现嗜睡（1/22）,C组中有1例出现胃部不适（1/22）,除此以外三组未再出现其他不良反应。出现的1例嗜睡和2例胃部不适患者症状均非常轻,继续用药2～3天后嗜睡或胃部不适症状均自行消失,以后未再出现。三组不良反应发生率,经x2检验,均无统计学差异（均P>0.05）。结论:1.苏黄止咳胶囊能明显改善感冒后咳嗽患者的咳嗽症状和咳嗽程度,并能在一定程度上降低患者的气道炎症。2.盐酸西替利嗪片能明显改善感冒后咳嗽患者的咳嗽症状和咳嗽程度,并能在一定程度上降低患者的气道炎症。3.苏黄止咳胶囊和盐酸西替利嗪片联合应用优于各自单独治疗,具有协同增效的作用,能更有效改善感冒后咳嗽患者的咳嗽症状和咳嗽程度,对患者的气道炎症有进一步降低的趋势。4.苏黄止咳胶囊和盐酸西替利嗪片无论单独应用还是联合应用均具有较高的安全性。
邓怡平[9]（2021）在《穿心莲活性成分高值化加工利用应用基础研究》文中提出穿心莲（Andrographis paniculata（Burm.f.）Nees）为一年生草本,药用部位为其地上部分,具有清热解毒,凉血消肿之效,是我国的传统中药。其主要成分穿心莲内酯（Andrographolide,AD）是一种二萜内酯类化合物,具有抗炎、抗病毒、抗血栓生成、镇静、抗生育、保肝、抗癌、调节免疫和糖尿病的作用。尤其是以它的高抗炎作用,以及对上呼吸道感染的治疗特性而被广泛认可,有“中药消炎药”、“天然抗生素”的美誉。但其脂溶性较低、水溶性极低,生物利用度低,这制约了其药效的发挥。且穿心莲内酯味极苦,服用较大剂量时会导致胃脘不适。将其制备成聚合物后,可以改善穿心莲内酯的吸收和分布,同时提高肺部和结肠的抗炎效果,降低毒副作用,丰富穿心莲内酯的剂型选择,提高穿心莲内酯稳定性;还可以减少病人用量,节约中药资源,进而可以减少穿心莲栽培量,节约宝贵的土地资源。为了达到穿心莲有效成分高值化利用的目的,本研究中选用穿心莲叶为原料,利用超声微波辅助胶束提取法来提取穿心莲有效成分,并将其中的穿心莲内酯进行纯化。将穿心莲内酯与甘露低聚糖进行共价连接形成两亲性的聚合物,其可以在水中形成稳定的胶束,并考察了其理化表征、体外和体内评价以及抗炎活性。本研究中选择十二烷基二甲基甜菜碱作为表面活性剂并利用超声微波辅助胶束提取法来提取穿心莲有效成分。在超声功率为固定的50 W的基础上,最终确定了穿心莲提取的最优条件为:表面活性剂用量为3%,料液比为1:20,微波功率为800 W,微波时间为8 min。在该条件下,最终的穿心莲内酯提取率为2.41%,脱水穿心莲内酯的提取率为1.32%。将穿心莲提取液用盐沉降后,所得的提取液用乙酸乙酯萃取,并经过脱色纯化后,得到了纯度为97.85%的穿心莲内酯结晶,总收率为70.62%。将穿心莲内酯与琥珀酸酯反应形成脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯（DAS）,与甘露低聚糖链通过共价键连接形成两亲性聚合物结构,即脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯-甘露低聚糖聚合物（DAS-Man）。通过高效液相色谱、红外光谱和核磁共振氢谱检测其化学结构,发现制备成的DAS-Man成功将甘露低聚糖和穿心莲内酯通过琥珀酸酐连接到了一起。以DAS-Man的临界胶束浓度作为考察标准,确定了 DAS-Man的最佳制备比例为,穿心莲内酯和甘露低聚糖单个糖单元之间的摩尔比例为2:1,反溶剂类型为乙酸乙酯,所得产物的收率为28.79%,载药量为9.78%,临界胶束浓度为0.43 mg/mL。通过激光粒度仪的检测可以发现,DAS-Man胶束的平均粒径为115.1±13.74 nm,冻干后复溶的DAS-Man胶束的平均粒径为133.0±11.86 nm。电镜结果表明,DAS-Man粉体为40-70 nm小微粒构成的疏松的块状,DAS-Man胶束粒子为球形,部分粒子可以观察到明显的核壳结构,冻干使DAS-Man胶束的粒径变大,但对其分散性和溶解性无明显影响。XRD和DSC图谱中显示出,穿心莲内酯是典型的晶体结构,DAS-Man和DAS-Man冻干粉是以无定形态存在。穿心莲内酯吸热时伴随着失重,说明穿心莲内酯在熔融过程中同时伴有分解。DAS-Man和冻干DAS-Man的失重曲线与甘露低聚糖的类似,其原因可能是穿心莲内酯在DAS-Man中的载药量偏低导致。同时说明,DAS-Man溶解冻干后对其热稳定性无明显影响。DAS-Man中乙酸乙酯和DMSO的残留量分别为0.06%和0.09%,远小于中国药典中对Ⅲ类溶剂的要求,可以安全使用。体外溶出、释放、稳定性和模拟消化结果表明,DAS-Man可在水溶液中形成稳定的胶束,且在去离子水,人工胃液和人工肠液中的溶出度均接近完全溶出,在人工胃液中的释放率低于其他两种介质。DAS-Man的化学键和其形成的胶束在这三种溶剂体系中均稳定存在,其结构不易在水中被破坏,这有助于其以整体的胶束状态被摄入细胞,同时有助于其以完整状态进入结肠发挥作用。体外模拟消化实验表明,DAS-Man在模拟体液中以胶束状态存在。在经历了口腔、胃、小肠、大肠阶段的模拟消化以后,口腔中的游离的穿心莲内酯含量仅为投药量的 0.02±0.01%,在胃中为 0.17±0.02%,在小肠中为 0.63±0.02%,在大肠中为 16.63 ±1.82%。DAS-Man在口腔、胃、小肠中的粒径稳定,释放量低;在大肠中粒径变大、游离药物量增加,其原因可能是聚合物结构受到模拟大肠液中的细菌作用,部分共价键被破坏,穿心莲内酯被释放出来一部分,同时其胶束结构也受到影响,粒径增大。说明DAS-Man的胶束结构和聚合物结构在口腔到小肠阶段中非常稳定,而在大肠阶段中在细菌作用下被破坏,穿心莲内酯被释放,达到结肠给药的效果。生物利用度结果表明,DAS组和DAS-Man组的AUC值分别是是穿心莲内酯组的0.59倍和1.85倍,DAS-Man出峰时间比穿心莲内酯组晚,且存在双峰现象。组织分布实验结果表明,穿心莲内酯组在达到脾脏、肾脏和小肠峰值的时间为0.5 h,达到心脏、肝脏、肺脏中的达峰时间为1h,在脑、脊髓、大肠中达到峰值的时间为4 h。DAS-Man组在心脏、脾脏、肺脏、肾脏、小肠中的达峰时间为1h,在肝脏中的达峰时间为2 h,在大鼠脑、脊髓、大肠中的达峰时间为4 h。其原因可能是有部分DAS-Man以聚合物或者胶束的状态被摄取入细胞,并在肝脏中代谢成游离穿心莲内酯,另外有一部分在大肠中被分解后形成游离穿心莲内酯后再进入血液循环。DAS-Man组的肝肾中药物含量高于穿心莲内酯组,原因可能是其血流丰富,同时其也是穿心莲内酯的代谢部位。除肝肾外,DAS-Man在肺中的穿心莲内酯含量也高于穿心莲内酯组,其原因除了血药浓度高于穿心莲内酯组外,穿心莲内酯连接的亲水端甘露糖对肺部的靶向性也应该是其中一个原因,这对其在用于肺部炎症和感染的时候提高药效有一定作用。以脂多糖（LPS）致肺炎小鼠和恶唑酮（OXZ）致结肠炎作小鼠为模型动物对穿心莲内酯和DAS-Man的抗炎作用进行了考察。DAS-Man和穿心莲内酯能够降低LPS致急性肺炎小鼠肺组织的湿/干比、脾脏系数和髓过氧化物酶（MPO）活性,同时也能够降低血清和组织中的TNF-α、IL-6和IL-1β炎症因子含量,改善肺组织病理状态。DAS-Man 和穿心莲内酯能够延长 OXZ 致结肠炎小鼠生存时间,降低炎症小鼠结肠组织的DAI评分,减轻结肠缩短,降低脾脏系数,同时也能够降低血清和组织中的MPO活性、NO、TNF-α、IL-4和IL-1β炎症因子含量,降低水肿程度,改善结肠病理状态。DAS-Man对肺炎小鼠和结肠炎小鼠抗炎效果好于穿心莲内酯,提示DAS-Man对LPS所致的急性肺损伤和OXZ所致的结肠炎症具有一定的保护作用,其作用机制可能与穿心莲内酯可以抑制细胞炎症因子分泌有关。
方超[10]（2021）在《FeNO联合肺功能检测用于指导支气管哮喘患儿糖皮质激素治疗的临床研究》文中研究说明目的:探讨呼出气一氧化氮（Fractional exhaled nitric oxide,FeNO）联合肺功能检测指导支气管哮喘患儿吸入性糖皮质激素（Inhaled corticosteroids,ICS）剂量调整的价值,以及FeNO和肺功能在哮喘治疗过程中的转归特点。方法:选取2018年10月至2020年10月在我院就诊的133例6～12岁初治支气管哮喘患儿为研究对象,其中中度哮喘105例,重度28例。入院后随机分为实验组（n=68）和对照组（n=65）,分组后两组患儿按照2016年中华医学会儿科学分会呼吸组修订的儿童支气管哮喘诊断与防治指南进行治疗。治疗3个月后,实验组根据患儿控制情况结合肺功能及FeNO检测结果调整ICS治疗剂量,对照组根据患儿控制情况结合肺功能检测结果调整ICS治疗剂量。再次治疗3个月后,对比并分析两组患儿哮喘急性发作情况、肺功能及FeNO变化,并采用儿童哮喘控制测试（Childhood Asthma Control Test,C-ACT）评价两组患儿得分。结果:（1）实验组及对照组肺功能在治疗3个月后较治疗前改善,FeNO在治疗3个月后降低,实验组与对照组肺功能正常率分别为55.9%和55.4%;实验组与对照组FeNO正常率分别为19.1%和18.5%;治疗3个月后实验组与对照组肺功能及FeNO对比无统计学意义（P>0.05）;两组治疗后哮喘控制率及C-ACT评分无统计学差异（P>0.05）。（2）治疗6个月后,实验组与对照组肺功能较治疗3个月改善,FeNO较治疗3个月降低,治疗3个月和6个月对比差异有统计学意义（P<0.05）;实验组与对照组肺功能正常率分别为85.3%和67.7%;实验组与对照组FeNO正常率分别为91.2%和75.4%,两组对比差异有统计学意义（P<0.05）。（3）治疗6个月时,实验组哮喘急性发作率低于对照组,实验组有17.7%的哮喘患儿有哮喘急性发作,对照组有35.4%的哮喘患儿有哮喘急性发作,两组对比有统计学意义（P<0.05）;实验组总控制（控制+部份控制）率高于对照组,实验组为91.2%,对照组为76.9%,两组对比有统计学意义（P<0.05）;实验组C-ACT评分高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:PEF及FEV1等大气道功能恢复至正常所需时间较FeNO恢复正常水平所需时间短,而小气道功能（MMEF）恢复较慢,这提示ICS剂量的调整应考虑FeNO变化,同时应长期随访哮喘患儿小气道功能恢复情况。FeNO联合肺功能检测作为哮喘ICS治疗调整的指标,能提高哮喘控制率,降低哮喘急性发作率,促进肺功能恢复,改善气道炎症,有一定的临床指导意义。
二、Inhalation of nitric oxide in the treatment of SARS in Beijing（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Inhalation of nitric oxide in the treatment of SARS in Beijing（论文提纲范文）
（3）加味参苓白术散联合穴位埋线治疗肺脾两虚型支气管哮喘慢性持续期临床观察（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1 研究对象 |
| 2 诊断标准 |
| 2.1 西医诊断标准 |
| 2.2 中医诊断标准 |
| 3 病例选择标准 |
| 3.1 纳入病例标准 |
| 3.2 排除病例标准 |
| 3.3 剔除标准 |
| 3.4 脱落病例标准 |
| 3.5 脱落病例的处理 |
| 4 研究方法 |
| 4.1 病例分组 |
| 4.2 治疗方法 |
| 4.3 观察疗程 |
| 5 观察项目及指标 |
| 5.1 一般项目 |
| 5.2 安全性指标 |
| 5.3 疗效性指标 |
| 6 疗效标准 |
| 7 应急预案 |
| 8 统计学方法 |
| 结果 |
| 1 完成病例数 |
| 2 一般资料可比性分析 |
| 3 疗效性指标分析 |
| 3.1 肺功能评价 |
| 3.2 呼出气一氧化氮(FeNO)疗效比较 |
| 3.3 哮喘控制测试(ACT)评分比较 |
| 3.4 中医证候积分比较 |
| 4 复发率观察 |
| 5 应用紧急预案情况 |
| 6 安全性指标分析 |
| 讨论 |
| 1 西医对哮喘的认识 |
| 2 中医对肺脾两虚型哮喘的认识 |
| 3 组方及选穴思路 |
| 3.1 遣方用药原理 |
| 3.2 药物分析 |
| 3.3 埋线的中医作用机制 |
| 3.4 选穴依据 |
| 3.5 埋线的西医作用机制 |
| 3.6 穴位分析 |
| 4 疗效指标分析 |
| 4.1 肺功能指标分析 |
| 4.2 炎症水平指标(FeNO)分析 |
| 4.3 哮喘控制水平(ACT)测试分析 |
| 4.4 中医证候积分分析 |
| 5 复发率分析 |
| 6 应急预案使用分析 |
| 7 安全性分析 |
| 8 不足和展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 支气管哮喘的中西医研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）脂肪细胞来源外泌体在糖尿病动脉粥样硬化疾病中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 论文Ⅰ 脂肪细胞来源外泌体介导的内皮间质转化在糖尿病血管再狭窄中的作用及机制研究 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 创新点 |
| 限制性 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 论文Ⅱ 脂肪细胞来源外泌体在血管新生中的作用及机制研究 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 创新点 |
| 限制性 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的论文 |
| SCI论文Ⅰ |
| SCI论文Ⅱ |
| SCI论文Ⅲ |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（5）基于M1型巨噬细胞靶向的姜黄素脂质体干预ALI细胞因子风暴研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 第一章 肺泡巨噬细胞在COVID-19细胞因子风暴中的作用 |
| 1 细胞因子风暴在COVID-19发病机理中的核心作用 |
| 2 肺泡巨噬细胞的极化和功能 |
| 3 肺泡巨噬细胞在COVID-19细胞因子风暴中的重要作用 |
| 4 针对COVID-19细胞因子风暴的治疗策略 |
| 第二章 靶向巨噬细胞药物递送系统的研究进展 |
| 1 巨噬细胞的生理作用 |
| 2 巨噬细胞靶向策略 |
| 3 巨噬细胞对递送载体的内吞机制 |
| 4 靶向巨噬细胞治疗疾病的研究进展 |
| 第三章 肺部给药研究进展 |
| 1 肺部给药的优势 |
| 2 影响肺部给药的主要因素 |
| 3 肺部给药的剂型 |
| 4 新型肺部药物递送系统 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 实验研究 |
| 第一章 Arg-Cur-Lip的制备与质量评价 |
| 1 仪器与试剂 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 小结与讨论 |
| 第二章 Arg-Cur-Lip体外靶向性及其内吞机制研究 |
| 1 仪器与试剂 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 小结与讨论 |
| 第三章 雾化吸入Arg-DiR-Lip的肺部靶向性评价 |
| 1 仪器与试剂 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 小结与讨论 |
| 第四章 Arg-Cur-Lip对RAW 264.7细胞炎症模型的影响 |
| 1 仪器与试剂 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 小结与讨论 |
| 第五章 雾化吸入Arg-Cur-Lip对大鼠ALI模型的初步药效学评价 |
| 1 仪器与试剂 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 小结与讨论 |
| 全文总结 |
| 1 主要研究工作与结果 |
| 2 研究的创新性 |
| 3 课题的不足 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（6）呼出气一氧化氮水平与慢性咳嗽中医证候的相关性研究及祛风咳敏方的疗效观察（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词对照 |
| 前言 |
| 第一部分 FeNO值水平与慢性咳嗽中医证候的相关性研究 |
| 1 研究目的 |
| 2 研究对象 |
| 2.1 研究对象的选择 |
| 2.2 诊断标准 |
| 2.3 纳入标准 |
| 2.4 排除标准 |
| 3 研究方法 |
| 3.1 分组 |
| 3.2 研究流程 |
| 4 统计方法 |
| 5 研究结果 |
| 5.1 一般资料 |
| 5.2 证型分布 |
| 5.3 临床表现 |
| 5.4 肺功能 |
| 5.5 血嗜酸性粒细胞 |
| 6 讨论 |
| 6.1 性别、年龄、体重、病程与FeNO值 |
| 6.2 中医证候与FeNO值 |
| 6.3 肺功能与FeNO值 |
| 6.4 血嗜酸性粒细胞百分比与FeNO值 |
| 7 小结 |
| 第二部分 祛风咳敏方治疗咳嗽变异性哮喘风邪伏肺证的疗效观察 |
| 1 研究目的 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 研究设计 |
| 2.2 研究对象 |
| 2.3 诊断标准 |
| 2.4 纳入标准 |
| 2.5 排除标准 |
| 2.6 剔除标准 |
| 2.7 病例退出/脱落标准 |
| 3 干预措施 |
| 4 干预疗程及观察指标 |
| 4.1 基线资料 |
| 4.2 疗效评价指标 |
| 5 随机化分组 |
| 6 安全性观察与评价 |
| 7 依从性 |
| 8 数据管理及统计分析 |
| 8.1 数据管理 |
| 8.2 统计分析 |
| 9 研究结果 |
| 9.1 两组患者治疗前基线比较 |
| 9.2 两组患者治疗前后效果比较 |
| 9.3 安全性分析 |
| 10 讨论 |
| 10.1 中医学对咳嗽变异性哮喘的认识 |
| 10.2 现代医学对CVA的认识 |
| 10.3 祛风咳敏方用药思路及方解 |
| 10.4 关于本研究结果的分析 |
| 10.5 不足与展望 |
| 11 小结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）呼出气一氧化氮测定在慢性咳嗽患者应用布地奈德福莫特罗吸入剂疗效评价（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 观察指标 |
| 1.4 统计方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 观察组和对照组Fe NO值的比较 |
| 2.2 A组和B组诊断结果的比较 |
| 2.3 A组和B组Fe NO值的比较 |
| 2.4 Fe NO测定对布地奈德福莫特罗吸入剂疗效评价的价值 |
| 3 讨论 |
（8）苏黄止咳胶囊联合盐酸西替利嗪片治疗感冒后咳嗽的临床疗效及安全性研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 前言 |
| 对象与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 感冒后咳嗽的发病机制和药物治疗现况 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）穿心莲活性成分高值化加工利用应用基础研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 穿心莲简介 |
| 1.2.1 穿心莲的生物学特性 |
| 1.2.2 穿心莲的生长特性 |
| 1.2.3 穿心莲资源分布 |
| 1.2.4 穿心莲化学成分研究 |
| 1.2.5 穿心莲有效成分含量的影响因素 |
| 1.2.6 穿心莲的药理作用 |
| 1.2.7 穿心莲有效成分的提取方法 |
| 1.3 穿心莲内酯研究概况 |
| 1.3.1 穿心莲内酯结构和理化性质 |
| 1.3.2 穿心莲内酯的药理作用及其临床应用 |
| 1.4 聚合物胶束研究进展 |
| 1.4.1 pH响应性聚合物胶束 |
| 1.4.2 还原响应性聚合物胶束 |
| 1.4.3 温度响应性聚合物胶束 |
| 1.4.4 光响应性聚合物胶束 |
| 1.4.5 酶响应性聚合物胶束 |
| 1.4.6 多响应性聚合物胶束 |
| 1.4.7 聚合物前药胶束 |
| 1.5 课题研究意义、内容及技术路线 |
| 1.5.1 研究意义 |
| 1.5.2 研究内容 |
| 1.5.3 研究技术路线 |
| 2 穿心莲中有效成分的提取和纯化 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料和仪器 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 HPLC法检测穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量 |
| 2.3.2 穿心莲原料内有效成分含量的确定 |
| 2.3.3 表面活性剂的选择 |
| 2.3.4 超声微波辅助胶束提取穿心莲有效成分的工艺优化 |
| 2.3.5 提取率计算 |
| 2.3.6 穿心莲内酯的纯化 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯标准曲线的绘制 |
| 2.4.2 穿心莲原料中有效成分含量测定 |
| 2.4.3 提取工艺优化结果 |
| 2.4.4 穿心莲内酯纯化结果 |
| 2.5 本章小结 |
| 3 脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯-甘露低聚糖聚合物(DAS-Man)的制备 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与仪器 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯的制备 |
| 3.3.2 DAS-Man的制备 |
| 3.3.3 制备体系中高沸点溶剂的去除 |
| 3.3.4 DAS-Man制备条件优化 |
| 3.4 材料表征和评价方法 |
| 3.4.1 HPLC法检测脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯含量 |
| 3.4.2 傅里叶红外光谱的检测(FTIR) |
| 3.4.3 紫外吸收光谱检测 |
| 3.4.4 核磁共振氢谱检测(~1H NMR) |
| 3.4.5 临界胶束浓度(CMC)的测定 |
| 3.5 实验结果与讨论 |
| 3.5.1 DAS标准曲线的绘制 |
| 3.5.2 脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯的合成结果 |
| 3.5.3 DAS-Man的合成结果和收率 |
| 3.5.4 DAS-Man的红外光谱 |
| 3.5.5 DAS-Man的紫外光谱 |
| 3.5.6 DAS-Man的核磁共振氢谱结果 |
| 3.5.7 临界胶束浓度(CMC)的测定结果 |
| 3.6 本章小结 |
| 4 DAS-Man的理化性质和溶剂残留 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料与仪器 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 实验仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 粒径检测 |
| 4.3.2 扫描电镜检测(SEM) |
| 4.3.3 透射电镜检测(TEM) |
| 4.3.4 原子力显微镜检测(AFM) |
| 4.3.5 X射线衍射检测(XRD) |
| 4.3.6 示差扫描热量分析(DSC) |
| 4.3.7 热重分析(TG) |
| 4.3.8 溶剂残留检测 |
| 4.4 实验结果与讨论 |
| 4.4.1 粒径检测结果 |
| 4.4.2 扫描电镜结果 |
| 4.4.3 透射电镜结果 |
| 4.4.4 原子力显微镜结果 |
| 4.4.5 X射线衍射结果 |
| 4.4.6 示差扫描热量分析结果 |
| 4.4.7 热重分析结果 |
| 4.4.8 溶剂残留检测结果 |
| 4.5 本章小结 |
| 5 DAS-Man自组装胶束的体外评价 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料与仪器 |
| 5.2.1 实验材料 |
| 5.2.2 实验仪器 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 HPLC法和UV法检测药物浓度 |
| 5.3.2 穿心莲内酯的饱和溶解度检测 |
| 5.3.3 溶出度检测 |
| 5.3.4 释放率检测 |
| 5.3.5 稳定性检测 |
| 5.3.6 体外消化稳定性 |
| 5.3.7 体外毒性检测 |
| 5.4 实验结果与讨论 |
| 5.4.1 DAS-Man标准曲线的绘制 |
| 5.4.2 饱和溶解度检测 |
| 5.4.3 溶出度检测 |
| 5.4.4 释放率检测结果 |
| 5.4.5 稳定性检测结果 |
| 5.4.6 体外模拟消化结果 |
| 5.4.7 毒性实验结果 |
| 5.5 本章小结 |
| 6 DAS-Man胶束的体内药代动力学研究 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 实验材料与仪器 |
| 6.2.1 实验材料 |
| 6.2.2 实验仪器 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.3.1 HPLC法检测药物浓度 |
| 6.3.2 生物利用度测定 |
| 6.3.3 组织分布测定 |
| 6.4 实验结果与讨论 |
| 6.4.1 生物利用度测定结果 |
| 6.4.2 组织分布测定结果 |
| 6.5 本章小结 |
| 7 DAS-Man胶束对LPS致肺炎小鼠的抗炎活性评价 |
| 7.1 引言 |
| 7.2 实验材料与仪器 |
| 7.2.1 实验材料 |
| 7.2.2 实验仪器 |
| 7.3 实验方法 |
| 7.3.1 LPS致小鼠肺炎模型的制备和给药 |
| 7.3.2 样品处理和含量测定 |
| 7.3.3 含量测定 |
| 7.4 实验结果与讨论 |
| 7.4.1 小鼠肝脏系数检测结果 |
| 7.4.2 小鼠脾脏系数检测结果 |
| 7.4.3 肺湿/干比检测结果 |
| 7.4.4 MPO含量测定 |
| 7.4.5 NO含量测定 |
| 7.4.6 TNF-α含量测定 |
| 7.4.7 IL-6含量测定 |
| 7.4.8 IL-1β含量测定 |
| 7.4.9 肺脏HE染色结果 |
| 7.5 本章小结 |
| 8 DAS-Man胶束对恶唑酮致结肠炎小鼠的抗炎活性评价 |
| 8.1 引言 |
| 8.2 实验材料与仪器 |
| 8.2.1 实验材料 |
| 8.2.2 实验仪器 |
| 8.3 实验方法 |
| 8.3.1 OXZ致小鼠结肠炎模型的制备和给药 |
| 8.3.2 疾病活动指数评价(DAI) |
| 8.3.3 样品处理 |
| 8.3.4 含量测定 |
| 8.4 实验结果与讨论 |
| 8.4.1 小鼠存活数量 |
| 8.4.2 小鼠DAI评分 |
| 8.4.3 小鼠结肠形态 |
| 8.4.4 小鼠肝脏系数检测结果 |
| 8.4.5 小鼠脾脏系数检测结果 |
| 8.4.6 MPO含量测定 |
| 8.4.7 NO含量测定 |
| 8.4.8 TNF-α含量测定 |
| 8.4.9 IL-4含量测定 |
| 8.4.10 IL-1β含量测定 |
| 8.4.11 结肠HE染色结果 |
| 8.5 本章小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
| 东北林业大学 博士学位论文修改情况确认表 |
（10）FeNO联合肺功能检测用于指导支气管哮喘患儿糖皮质激素治疗的临床研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英汉缩略词对照表 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 研究方法 |
| 1.3 检测项目 |
| 1.4 主要使用药物 |
| 1.5 技术路线 |
| 1.6 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 两组患儿入院时临床基本情况 |
| 2.2 两组患儿治疗3 个月后情况 |
| 2.3 两组治疗6个月肺功能与FeNO变化 |
| 2.4 两组治疗6 个月哮喘控制情况对比 |
| 2.5 两组患儿入院至治疗6 月肺功能及FeNO变化 |
| 3 讨论 |
| 3.1 哮喘分型及其标记物 |
| 3.2 FeNO检测在哮喘治疗决策中的作用 |
| 3.3 肺功能检测在哮喘治疗中的作用及价值 |
| 3.4 FeNO联合肺功能对ICS调整的意义 |
| 3.5 结语 |
| 4 不足与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 FeNO在评估儿童哮喘控制水平及优化治疗方案的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及获得的科研成果 |
四、Inhalation of nitric oxide in the treatment of SARS in Beijing（论文参考文献）
- [1]咳嗽的诊断与治疗指南（2021）[J]. 中华医学会呼吸病学分会哮喘学组. 中华结核和呼吸杂志, 2022(01)
- [2]呼出气一氧化氮检测及其在气道疾病诊治中应用的中国专家共识[J]. 中国医药教育协会慢性气道疾病专业委员会,中国哮喘联盟. 中华医学杂志, 2021(38)
- [3]加味参苓白术散联合穴位埋线治疗肺脾两虚型支气管哮喘慢性持续期临床观察[D]. 袁也. 河北北方学院, 2021(01)
- [4]脂肪细胞来源外泌体在糖尿病动脉粥样硬化疾病中的作用及机制研究[D]. 陈芳芳. 山东大学, 2021(10)
- [5]基于M1型巨噬细胞靶向的姜黄素脂质体干预ALI细胞因子风暴研究[D]. 姜临霞. 北京中医药大学, 2021
- [6]呼出气一氧化氮水平与慢性咳嗽中医证候的相关性研究及祛风咳敏方的疗效观察[D]. 张静怡. 天津中医药大学, 2021(01)
- [7]呼出气一氧化氮测定在慢性咳嗽患者应用布地奈德福莫特罗吸入剂疗效评价[J]. 徐琳. 世界复合医学, 2021(03)
- [8]苏黄止咳胶囊联合盐酸西替利嗪片治疗感冒后咳嗽的临床疗效及安全性研究[D]. 秦良楠. 承德医学院, 2021(01)
- [9]穿心莲活性成分高值化加工利用应用基础研究[D]. 邓怡平. 东北林业大学, 2021(09)
- [10]FeNO联合肺功能检测用于指导支气管哮喘患儿糖皮质激素治疗的临床研究[D]. 方超. 右江民族医学院, 2021(01)