一、心脏的起源和细胞谱系（论文文献综述）
李昕宇[1]（2021）在《小鼠Kupffer细胞的转分化研究》文中认为研究背景及目的:KCs是肝脏长期驻留的巨噬细胞,在慢性肝损伤期间KCs被激活并分泌促炎症和促纤维化细胞因子,作用于HSCs转分化形成肌成纤维细胞,最终产生胶原沉积,学术界广泛认可,HSCs是肝脏中胶原沉积的主要来源,也是肝纤维化病理过程的核心环节,而KCs除了能辅助HSCs参与纤维化以外,是否有其他途径产生胶原沉积尚未阐明。HSCs转分化成为肌成纤维细胞是肝纤维化的关键步骤,除了HSCs转分化以外,肝脏中还存在大量其他细胞转分化的现象,例如有实验研究证明了动物模型中肝细胞和胆管细胞相互转化。在肝外组织中的巨噬细胞,例如皮肤、心肌、肾脏等组织中巨噬细胞可更进一步转分化为纤维细胞并分泌胶原蛋白,和伤口损伤愈合修复密切相关。通过上述类比,提出KCs可以发生转分化的猜想,KCs转分化为类成纤维细胞后可能产生胶原沉积,甚至有可能参与肝组织损伤修复乃至肝纤维化形成。KCs的转分化理论提供了不同于传统纤维化理论着眼于HSCs的不同视角,把肝硬化的过程视为河流,HSCs的转分化可视作主干道,而KCs则可作为支流,提供了未来肝纤维化治疗的新思路和新靶点,同时给成纤维细胞提供了新的来源,完善了对肝纤维化的认识。材料和方法:首先本研究在两个不同的体外实验模型中进行平行实验:体外肝脏非实质细胞培养和精密肝切片培养。具体步骤如下:（1）构建特异性追踪KCs谱系的动物模型Emr1Cre+/-::Ribo Tag+/-的小鼠追踪KCs谱系。（2）分离KCs后进行体外培养。（3）使用精密肝切片培养技术进行精密肝片培养。（4）使用免疫荧光成像分析培养后的KCs表达的蛋白。（5）利用多聚体免疫共沉淀富集KCs,提取RNA,合成c DNA。（6）实时定量PCR（Fludigm）。其次在小鼠肝切片中进行胶原沉积研究,使用氯膦酸盐脂质体耗竭KCs,进行精密肝切片培养,对肝切片进行Masson三色染色和RT-PCR基因表达分析。最后使用IL1r敲除小鼠和Nlrp3基因敲除小鼠,使用精密肝切片培养技,实时定量PCR分析基因表达,使用LDH检测套盒定量分析肝片中细胞死亡情况。结果:（1）随着体外培养时间的推移,体外非实质细胞培养和精密肝切片培养两种模型中均发生:KCs的特征基因以及调控其表达的转录因子表达下调。（2）随着体外培养时间的推移,体外非实质细胞培养和精密肝切片培养两种模型中均发生:KCs中纤维化相关的基因以及调控其表达的转录因子表达上调。上述效应在非实质细胞培养和肝组织切片培养之间是高度一致的。（3）清除KCs后肝切片中胶原沉积减少。（4）Il-1r敲除小鼠的肝片中细胞死亡相关基因表达与对照组没有显着差异。（5）Nlrp3敲除小鼠肝片中细胞死亡相关基因表达与对照组没有显着差异。结论:KCs转分化在体外非实质细胞培养和精密肝切片培养两种模型中均有发生。KCs的转分化在体外培养中相对保守反应,转分化为类似成纤维细胞样的细胞,可以分泌胶原沉积相关蛋白。
王新[2]（2021）在《基于肥大细胞调控肥胖和能量代谢的机制研究白杨素干预高脂饮食相关代谢性疾病的作用》文中指出脂肪组织作为主要的储能器官,在维持体内能量稳态过程中发挥重要作用。白色脂肪组织中不仅有典型的白色脂肪细胞,还零星分布着可以诱导产热的浅棕色脂肪细胞。白色脂肪组织基质血管相（stromal vascular faction,SVF）中的肥大细胞（MC）等免疫细胞、前脂肪细胞以及内皮细胞等,通过与脂肪细胞的互作而调控脂肪组织和机体的能量稳态。2009年,本团队报道了MC通过影响白色脂肪组织血管化,关键地控制了高胆固醇的西方饮食（Western diet,WD）所诱导的肥胖和胰岛素抵抗。此后,另一些研究团队报道,对于高脂饮食（High-fat diet,HFD）所诱导的肥胖和胰岛素抵抗,MC没有明确的影响。为进一步明确MC及其食品源稳定剂白杨素调控饮食诱导的肥胖（Diet-induced obesity,DIO）和能量消耗的作用机制,本研究开展了以下三个方面的工作:1)明确了MC在饮食诱导的肥胖和胰岛素抵抗发生中的作用。在WD、HFD和胆固醇补充的高脂饮食（High-fat Diet+cholesterol,HFD+Cho）喂养的小鼠中,我们分别探究了MC稳定剂色甘酸钠（disodium cromoglycate,DSCG）和酮替芬腹腔注射对DIO和胰岛素敏感性的影响。在WD和HFD+Cho等高胆固醇饮食喂养的小鼠中,DSCG和酮替芬显着改善了小鼠的肥胖和胰岛素抵抗;在HFD喂养的小鼠中,酮替芬改善肥胖和胰岛素抵抗的效果相对于高胆固醇饮食喂养的小鼠明显减弱,而DSCG则完全没有作用。DSCG和酮替芬处理,阻止了高胆固醇饮食诱导的血液组胺升高和脂肪组织MC脱颗粒,且血浆中组胺浓度与总胆固醇或低密度脂蛋白（Low-density lipoprotein,LDL）呈显着正相关。LDL等处理显着激活MC,DSCG和酮替芬抑制了LDL所诱导的MC活化,而LDL受体缺失则抵消了DSCG或酮替芬对LDL所诱导MC活化的作用。这些结果表明,MC在高胆固醇饮食诱导的肥胖和胰岛素抵抗中发挥关键作用,而食品源胆固醇导致了相关的MC活化。2)揭示了MC调控机体脂肪组织棕色化和能量消耗的作用机制。既然MC在DIO的发生中起着固有的关键作用,我们有必要去揭示其对脂肪细胞棕色化和相关能量消耗的影响。因此,本论文进一步研究了MC功能失活后的能量消耗和脂肪组织棕色化水平的改变。MC的缺失和药物稳定显着增强了去甲肾上腺素诱导的能量代谢,提升了皮下脂肪组织（Subcutaneous adipose tissue,SAT）的棕色化。在MC缺失的Kitw-sh/w-sh小鼠SAT中回复MC则可逆转这些变化。机制研究表明,MC失活促进SAT中血小板生长因子受体（Platelet-derived growth factor receptor,PDGFR）α阳性脂肪细胞祖细胞的增殖和棕色分化。进一步,我们确定了MC是脂肪组织中5-羟色胺的主要来源,而MC分泌的5-羟色胺抑制了SAT的棕色化和系统能量消耗。总之,MC通过释放5-羟色胺,抑制了小鼠SAT的棕色化和系统的能量消耗。3)阐明了食品源MC稳定剂白杨素干预小鼠DIO和能量消耗作用机制。白杨素是一种食品源的MC强稳定剂。我们研究发现白杨素作为饮食补充剂,可改善HFD诱导的小鼠体重获得和脂肪组织重量增加,降低机体胰岛素抵抗。白杨素增加了系统能量消耗,提升了SAT棕色化及浅棕色前脂肪细胞数量和血管生成,升高了SAT中PDGFRα的表达、PDGFRα+脂肪细胞祖细胞的数量和棕色化水平。进一步,我们发现白杨素诱导了SAT的SVF细胞的棕色分化,而PDGFRα特异性抑制剂伊马替尼逆转了这一作用。最后,我们发现,饮食白杨素降低了小鼠SAT中抑制PDGFRα活化或脂肪细胞棕色化的micro RNA表达水平。综上,饮食白杨素通过调控PDGFRα活化及相关micro RNA表达,促进小鼠的SAT的棕色化和系统能量消耗,进而改善DIO和胰岛素抵抗。综上所述,本论文明确了MC在饮食诱导的肥胖和胰岛素抵抗发生中的关键作用;揭示了MC通过释放5-羟色胺抑制SAT棕色化和系统能量消耗的机制;阐明了食品源MC稳定剂白杨素可通过调控PDGFRα活化及相关micro RNA表达,启动小鼠的SAT的棕色化和系统能量消耗,进而改善DIO和胰岛素抵抗。
晏婧[3]（2021）在《人胚骨骼干祖细胞的起源研究》文中提出骨骼干细胞（Skeletal stem cells,SSCs）是一群具有自我更新并分化产生软骨细胞、成骨细胞和基质细胞“三谱系”的组织特异性干细胞。作为骨发育过程中的重要事件,越来越多的证据表明骨骼干细胞在骨骼发育和损伤修复过程中发挥重要作用,其起源及表型和功能富集一直受到广泛关注。通过目的分选和遗传谱系示踪研究,多潜能和自我更新的骨骼干细胞陆续在早期出生后小鼠生长板、静息区和骨膜中鉴定出来。最新研究显示,骨骼干细胞也存在于17周的人类胎儿长骨生长板中。然而,骨骼干细胞在人类早期胚胎中的起源、分子特征及其调控机制仍不清楚。在本研究中,首先,我们选取了初级骨化中心发生前后,孕5周人类胚胎上下肢芽及孕8周四肢长骨进行单细胞转录组高通量测序。肢芽和长骨的整合分析鉴定发现了16个主要细胞类群。其中肢芽样本富集显着异质性的间质细胞和上皮细胞类群,且通过已知的标志基因我们在转录组上进一步将肢芽沿着近端-远端和前端-后端轴进行匹配分析;而长骨样本则富集软骨细胞和成骨前体细胞类群。此外,根据非监督分层聚类分析、主成分分析及假时序分析,我们在肢芽和长骨样本中发现高表达TWIST2和PDGFRA的的成骨-软骨祖细胞（Osteo-chondrogenic progenitor,OCP）,提示最早的骨骼干祖细胞可能包含于其中。其次,我们通过对胚胎长骨的成骨-软骨祖细胞进一步分群聚类,在转录组上得到了3群干祖细胞类群,包括肢芽来源的TWIST2+间质细胞、高表达CXCL2和PDGFRA的骨髓基质细胞、以及一群具有分化为软骨细胞和成骨前体细胞潜能的胚骨骼干祖细胞（e SSPCs）。转录调控网络分析发现,胚骨骼干祖细胞富集转录因子FOXP1/2网络。免疫荧光染色进一步显示FOXP1/2+细胞主要定位于软骨膜外层和新生的初级骨化中心内部,这也与此前在小鼠中发现的软骨外膜前体细胞非常相似。随后,通过差异基因筛选,我们明确了一组用于分选富集胚骨骼干祖细胞群体的细胞表面标志物:PDGFRAlow/-PDPN+CADM1+,并发现其具有较强的体外克隆形成能力。连续性克隆传代及体内外分化实验证明,胚骨骼干祖细胞具有自我更新和成软骨、成骨分化潜能,但无法维持造血微环境。此外,我们对孕8周人类胚胎脑颅骨进行了单细胞转录组测序,发现了一群同样具有相似表型:PDGFRAlow/-PDPN+CADM1+的神经嵴源性细胞（Neural crest derived cells,NCDCs）,其同样富集FOXP1/2转录因子网络,并在颅骨矢状缝和软骨膜内富集,暗示这群神经嵴源性细胞可能在颅骨发育和膜内成骨过程中发挥重要作用。综上所述,本研究首次绘制了早期人类胚胎骨骼形成过程中的单细胞图谱,是国际上首次针对早期人类胚胎骨骼干细胞起源的研究,从转录组和功能学层面鉴定了一群位于软骨膜外层的胚胎骨骼干祖细胞（e SSPCs）,揭示了人胚骨骼生成过程中的细胞异质性和谱系层级,有助于深入理解人类骨骼发育及损伤修复机制,为骨骼再生障碍性疾病的治疗提供了新思路。
黄涛[4]（2021）在《单细胞精度解析人胚巨噬细胞的起源和特化》文中指出巨噬细胞在组织稳态和炎症中发挥着不可替代的作用,是机体固有免疫的重要组成成分,还行使着重要的组织特异性功能。同时,它们也参与了多种疾病的病理生理学过程,如肿瘤免疫、移植免疫及神经退行性病变等。长期以来,成体小鼠中巨噬细胞一直被认为来源于造血干细胞,但新近研究发现,小鼠大部分组织驻留型巨噬细胞都来源于胚胎时期卵黄囊的原始造血巨噬细胞或者多潜能的红系-髓系祖细胞（Erythro-myeloid progenitor,EMP）。尽管传统观念认为哺乳类动物血液系统的发育是非常保守的,但人体中是否如小鼠一样,存在非造血干细胞来源的组织驻留型巨噬细胞尚缺乏明确证据。理清人体中巨噬细胞的谱系关系,阐明不同谱系来源的巨噬细胞功能的异同,将有助于开发治疗重大疾病的新方法。近年来单细胞测序技术突飞猛进,尤其适用于研究存在高度异质性的造血系统及胚胎发育早期的细胞群体。因此,我们利用单细胞转录组测序技术精准解析了人胚期（孕8周内）不同发育阶段和组织位点的CD45+造血细胞。经过数据降维,我们一共识别并注释了15个造血群体。之后我们对这些造血群体的转录组特征和时空动力学进行了深度解析。我们的研究发现,与小鼠中组织驻留巨噬细胞来源于原始造血巨噬细胞或EMP类似,人体胚胎组织驻留巨噬细胞也存在两种非造血干细胞起源,分别是原始造血巨噬细胞和CD45+CD34+CD44+人体卵黄囊来源的髓系偏向祖细胞（Yolk-sac-derived myeloid-biased progenitor,YSMP）,其中YSMP可能是小鼠中EMP在人胚中的对应细胞。我们接下来还重点研究了头部小胶质细胞在人胚期的发育。我们发现头部的巨噬细胞具有明显的发育阶段异质性,CX3CR1、SALL1和P2RY12等特征基因的表达证实了其连续的特化过程。最后,我们对胚胎期、儿童期和成体期的巨噬细胞转录组数据做比较后发现,头部、肝脏中组织驻留型巨噬细胞的特化在胚胎期已经发生,而皮肤、肺中驻留型巨噬细胞的特化程度较轻甚至没有特化。总之,我们的研究跨越人体胚胎的多个发育阶段,覆盖多个组织器官,绘制了人胚早期造血细胞的发育图谱,明确了人胚巨噬细胞的多重起源,定义了人胚第一个具有多系分化潜能的造血祖细胞群体（YSMP）,解析了组织驻留型巨噬细胞特化过程中的关键分子特征。此外,我们的研究提供了目前最翔实可靠的人胚巨噬细胞单细胞转录组数据,这些数据可以为人体巨噬细胞的后续研究提供参考和依据。
康宇[5]（2020）在《非人灵长类早期胚胎发育与疾病模型研究》文中进行了进一步梳理哺乳动物的胚胎早期发育开始于精子和卵子融合形成合子,之后经历卵裂、囊胚孵化、子宫定植等过程最终发育为完整个体。胚胎植入前发育的过程中会发生一系列重要的生物学事件,如母源——合子转化、合子基因激活、细胞谱系分化等。这些事件的有序发生均依赖于细胞内复杂的分子调控机制,并且极易受到环境应激因素的影响,如高温和内分泌干扰素都会干扰发育中的配子和胚胎正常发育,甚至产生可遗传的表观遗传变异。非人灵长类（NHPs）由于与人类极高的相似性,对其植入前胚胎发育机制的研究有助于解答人类早期胚胎发育的重要问题,同时,非人灵长类也是人类疾病研究的重要动物模型。本论文以猕猴和食蟹猴为对象,利用体外受精技术,开展植入前胚胎发育的转录调控机制和转化研究。研究通过收集猕猴植入前胚胎各个发育阶段的胚胎单细胞样本进行转录组测序,建立了完整的猕猴体外受精胚胎植入前发育转录组图谱。之后经过深入分析胚胎植入前发育过程的转录调控模式,发现灵长类早期胚胎发育中存在转录阻滞现象,桑葚胚时期的胚胎中有部分细胞的转录组停滞在合子基因激活之前阶段。在研究中还构建了体细胞核移植胚胎和单性生殖胚胎,这两类胚胎是研究合子基因组重编程机制及父源/母源印记基因调控的重要材料,通过获取这些胚胎的植入前发育单细胞转录组数据并与正常体外受精胚胎进行比较,发现体细胞核移植（SCNT）和单性生殖（孤雄/孤雌）胚胎的转录模式存在更为普遍的延迟,分析表明这种延迟主要是由异常的表观遗传修饰而导致的合子基因组激活不完全,胚胎发育率下降。通过外源手段消除体细胞核移植胚胎异常的H3K9me3,可以提高体细胞核移植胚胎发育率并且获得克隆动物。非人灵长类是研究人类疾病的理想动物模型。本论文利用CRISPR/Cas9技术进行了食蟹猴植入前胚胎的靶向基因编辑,获得DAX1基因突变猴模型。模型动物出现人类患者肾上腺发育不全（AHC）和低促性腺素性功能减退症（HH）的相关表型,经分析发现Wnt/β-catenin信号通路的异常激活导致的血管发生缺陷可能是DAX1基因突变胎儿时期肾上腺发育不良的主要原因。研究同时发现雄性食蟹猴DAX1缺陷导致的肾上腺和性腺发育缺陷在胎儿期性腺决定阶段就已经开始。通过食蟹猴植入前胚胎的干细胞嵌合实验,证明了非人灵长类胚胎干细胞（ESC）、诱导多能干细胞（i PS）和体细胞核移植来源的胚胎干细胞（NT-ESC）都可以实现食蟹猴胚胎和成体水平嵌合,并且具有三胚层及胚外组织分化潜能。通过收集分析嵌合胚胎的单细胞转录组数据发现,食蟹猴多能干细胞的胚胎嵌合效率差异与其自身的多能性状态密切相关,并且受到嵌合胚胎微环境的调控。综上,本论文研究了非人灵长类胚胎早期发育的转录调控,并构建了疾病动物模型以及嵌合体,从而开展疾病机制和干细胞多能性研究。首次绘制了完整的灵长类植入前发育转录图谱,是对灵长类早期发育调控研究领域的重要补充;利用CRISPR/Cas9技术构建的疾病猴模型表现了其它物种不能出现的、与病人高度相似的表型,是人类复杂疾病研究的理想动物模型。
沈忠福[6]（2020）在《哺乳动物大脑新皮层神经胶质细胞发生的克隆分析》文中研究说明神经元和神经胶质细胞是哺乳动物大脑新皮层基本细胞组成,几乎都由放射状胶质细胞（Radial glial progenitors,RGPs）分裂产生。目前对大脑新皮层RGP的神经元发生的分裂行为已经有了系统的研究和明确的认识,但是对神经胶质细胞的发生机制还知之甚少。我们通过对小鼠大脑新皮层RGP进行系统性的双荧光标记的嵌合分析（Mosaic analysis with double markers,MADM）,在单细胞水平下确定了RGP的行为和神经胶质发生的程序。在发育过程中,RGPs逐渐完成从神经发生到神经胶质细胞发生的转换,在胚胎期第16天（E16）有超过50%的转换,在E17基本完成转换。单个RGP按照特定比例进行神经胶质细胞产生:星形胶质细胞发生:少突胶质细胞发生:星形胶质细胞和少突胶质细胞发生=～60%:15%:25%,最终形成三种特定谱系的胶质细胞克隆。另外,单个RGP通过随机过程产生命运受限的神经胶质中间前体细胞,神经胶质中间前体细胞只产生数量相对确定的同一亚型或分化状态的星形胶质或少突胶质细胞,分布在同一皮层区域,形成离散局部克隆簇。星形胶质细胞发生和少突胶质细胞发生在单个RGP水平是独立的。以上研究系统性地阐明了新皮层神经胶质细胞发生的基本细胞机制。为了进一步研究神经胶质细胞发生的分子调控机制,我们利用MADM研究肿瘤抑制蛋白NF1在单细胞水平上对神经胶质细胞发生的调控。虽然神经胶质细胞和神经元都起源于RGPs,但研究发现,在RGP中去除NF1显着增加神经胶质细胞产生,但没有影响神经元的产生。更有意思的是,尽管NF1的去除均导致星形胶质和少突胶质细胞的生成增多,但影响程度和细胞机制明显不同。NF1的去除导致星形胶质细胞增加～2倍,但少突胶质细胞的增加超过15倍。进一步研究表明,NF1的去除导致单个RGP产生的星形胶质中间前体细胞数量增加,但不影响单个星形胶质中间前体细胞的产出;相比之下,NF1的去除不仅显着性增加了少突胶质中间前体细胞的数量,也大大促进了单个少突胶质中间前体细胞的产出,导致了巨型少突胶质细胞克隆的形成,其中含有成百上千个少突胶质前体细胞。这些研究暗示少突胶质细胞谱系可能与神经肿瘤的发生紧密相关。综上所述,本论文阐明了哺乳动物大脑新皮层中RGP的精确行为和神经胶质细胞发生的基本细胞程序,并提示了原发性神经肿瘤发生的独特细胞和谱系起源。
蒋泽平[7]（2020）在《铜腙诱导的脱髓鞘和再髓鞘化过程中NG2-glia的异质性特征研究》文中研究说明研究目的:少突胶质细胞前体细胞（Oligodendrocyte precursor cells,OPCs）,因特异性表达NG2分子,又称为NG2-glia,是中枢神经系统中一群不同于星形胶质细胞、少突胶质细胞和小胶质细胞的第四类胶质细胞,其均匀分布于成年中枢神经系统各个区域。近年来大量研究表明,NG2-glia是一个具有高度异质性的细胞群体,不仅在发育过程中起源于三个不同区域,而且在成年后不同脑区甚至在同一脑区也存在着异质性,表达不同的标记分子。目前认为,NG2-glia的主要功能是在生理和病理环境下分化为少突胶质细胞,促进髓鞘形成和修复。此外,NG2-glia作为成年大脑中除生发区外数量最多的具有增殖分裂能力的神经细胞,通过细胞形态变化、运动与迁移能力提升、增殖与分化潜能改变等方式,能够对机械外伤、神经退行性疾病以及脱髓鞘病变等做出反应性应答,从而表现出许多新功能。例如,与神经元形成突触、外伤后直接参与或在冻伤后分化成星形胶质细胞参与胶质疤痕的形成、吞噬髓鞘碎片以及参与免疫反应等。因此,了解NG2-glia这一群胶质细胞对于机体损伤和病理改变的反应性以及可能存在的异质性,对于我们寻找神经系统疾病新的临床治疗靶点具有重要意义。然而目前对NG2-glia的反应性和异质性的研究还十分局限,对于其是否存在亚群以及亚群是否存在特定新功能,仍有待进一步探索。研究方法:本实验采用单细胞转录组测序技术（10X Genomics）对脱髓鞘经典模型——铜腙毒性脱髓鞘模型的三个阶段（铜腙饲喂第3周/脱髓鞘期,第5周/脱髓鞘高峰期,以及饲喂5周后停药2周/再髓鞘化期）小鼠分离出的OPCs进行单细胞测序分析。运用多种生物信息学手段,进行差异表达分析以及拟时序分析等,寻找可能存在的新亚群,探究新亚群的特征以及可能具有的功能。针对特定的亚群标志性分子,综合运用细胞生物学,分子生物学以及形态学等研究手段进一步验证测序分析结果,即明确亚群随着疾病模型的不同阶段的出现以及演变规律,探究新亚群的功能。研究结果:我们制备了铜腙毒性脱髓鞘模型的三个阶段以及对照组的PDGFR-H2B-EGFP小鼠全脑单细胞悬液,通过流式分选出GFP+的细胞,进行单细胞转录组测序分析。结果显示,模型小鼠脑内少突胶质细胞谱系的细胞存在四大细胞类型共15个亚群,其中包括少突胶质细胞前体细胞（OPCs）、分化命运决定的少突胶质细胞前体/新形成少突胶质细胞（COP/NFOL）、成髓鞘的少突胶质细胞（MFOL1/2）、成熟少突胶质细胞（MOL）等少突胶质细胞谱系的细胞,还有小胶样细胞（4群、14群）,周细胞/血管细胞以及软脑膜细胞（9群、11群）。通过将实验组与对照组合并分析,我们发现在铜腙刺激下会出现正常情况下没有或者仅存在极少细胞比例的反应性新亚群（1群、3群、5群、7群、13群）。其中13群高表达与干扰素反应以及抗原提呈相关的分子,可能是一群参与免疫反应的OPCs;1群、3群、7群虽然在分群上有差异,但各群特异性上调分子的功能大多都与囊泡分泌与膜筏装配相关。我们针对这些亚群特征分子利用免疫荧光和原位杂交技术进行了验证,结果证实在铜腙模型中确实存在反应性新亚群。
康佳[8]（2020）在《小鼠M（?）llerian管发育的分子机制研究》文中研究指明研究背景:哺乳动物胚胎早期,雌、雄两性均有两套生殖管道,一对中肾管（又叫Wolffian管）和一对副中肾管（又称Mullerian管）。在雌性,Mullerian管发育成输卵管、子宫和阴道上段,Wolffian管退化。Mullerian管发育过程中不同节点发育不良可导致不同程度的生殖道畸形,但发育异常的机制尚不清楚。Mullerian管由的“均一”的管道分化成输卵管、子宫、宫颈和阴道上段,必定有上调或下调的基因和关键的信号通路调控其向不同方向分化,即Mullerian管间质出现异质性。探索Mullerian管间质细胞的异质性、异质细胞的表达基因和可能的信号通路将有助于揭示Mullerian管不同节点发育异常的机制。单细胞转录组测序技术因其针对单个细胞的转录组进行测序而成为全面分析细胞异质性的有力工具。研究目的:1.研究雌性小鼠Mullerian管间质的异质性;2.探索调控Mullerian管间质细胞向输卵管和子宫分化的关键基因和信号通路。研究方法:我们将基因型为Amhr2-Cre小鼠与报告基因小鼠mT/mG交配,获得基因型为mT/mG;Amhr2-Cre的小鼠。基于Cre-LoxP重组系统的原理,该种基因型小鼠的Mullerian管间质细胞被标记上绿色荧光蛋白（Green Fluorescent Protein,GFP）。我们选取从小鼠Mullerian管完全形成到完全分化成输卵管和子宫这段发育时期的5个连续的发育时点:胚胎期14.5天、15.5天、16.5天、18.5天和出生当天,分别取相应时期的mT/mG;Amhr2-Cre雌性小鼠胚胎中肾组织或生殖道消化成单细胞悬浮液后进行10xgenomics单细胞转录组测序分析。我们利用Cellranger软件基于聚类分析将细胞聚类分群;基于细胞分群的结果得到亚群的差异表达基因;利用基因本体（geneontology,GO）数据库对差异表达基因进行功能注释和富集分析;利用Monocle软件对绿色荧光蛋白（GFP）阳性的细胞群进行拟时间分析（pseudotime analysis）,构建细胞间的变化轨迹,重塑细胞随着时间的变化过程。利用Beam分析法对拟时间排序后的细胞数据以及指定的节点进行分析,进而发现与分支相关的差异基因。研究结果:1.排除免疫细胞、内皮细胞、幼红细胞和双细胞后,单细胞转录组测序将发育中的小鼠中肾分为15群细胞;2.小鼠胚胎期14.5天,Mullerian管间质即出现异质性,包括Hoxa10+Hoxa11+和Hoxa7+Hoxc8+的两群异质细胞;3.分化为输卵管的Mullerian管间质细胞特异表达的基因有Hoxa7、Hoxc8、Celf2、Itm2a、Nr2f1、Vstm2b;分化为子宫的Mullerian管间质细胞特异表达的基因有Hoxa10、Hoxa11、Pkdcc、Fn1等,这些基因有望成为Mullerian管间质、输卵管间质和子宫间质新的标志基因。4.小鼠Mullerian管间质起源于Amhr2+的体腔上皮细胞,体腔上皮有两个分化方向:一个方向为Hoxa7+Hoxc8+的Mullerian管间质细胞,该群细胞最终分化为输卵管间质;另一个方向为Hoxa10+Hoxa11+的Mullerian管间质细胞,该群细胞最终分化为子宫间质。5.随着体腔上皮细胞向输卵管方向分化,Hoxa7、Hoxc8、Celf2的表达水平上升,Hoxa10、Hoxa11的表达水平下降,合成RA的酶——Aldh1a2的表达水平下降;未发现BMP信号、抗BMP信号和Wnt信号分子表达的显着变化。6.随着体腔上皮细胞向子宫方向分化,Hoxa10、Hoxa11的表达水平上升,合成RA的酶——Aldh1a2的表达水平上升,Hoxa7、Hoxc8的表达下降。未发现BMP信号、抗BMP信号和Wnt信号分子的显着变化。研究结论:1.Mullerian管间质起源于Amhr2+的体腔上皮;Mullerian管间质包括Hoxa1 0+Hoxa11+和Hoxa7+Hoxc8+的两群异质细胞,分别分化为子宫间质和输卵管间质。2.Hoxa7、Hoxc8、Celf2调控体腔上皮向Mullerian管输卵管间质分化,Hoxa10和Hoxa11调控体腔上皮向Mullerian管子宫间质分化;RA可能启动Mullerian管子宫间质的分化。研究背景和目的:哺乳动物胚胎早期,雌、雄两性均有两套生殖管道,一对中肾管（又叫Wolffian管）和一对副中肾管（又称Mullerian管）。在雌性,Mullerian管发育成输卵管、子宫和阴道上段,Wolffian管退化。Mullerian管的任何发育异常都有可能导致雌性生殖道畸形。但是,人们对调节这些过程的机制知之甚少。威尔氏肿瘤1（Wilms’tumor 1,Wt1）基因参与体内多个器官的发育调控。Wt1在生殖道发育中的作用主要是,Wt1分子参与诱导雄性小鼠中Mullerian管的退化。但其在雌性小鼠生殖道发育中的作用尚不清楚。抗苗勒氏管激素Ⅱ型受体（Anti-Mullerianhormone receptor 2,Amhr2）表达在雌性小鼠体腔上皮和Mullerian管间质细胞表面,因此,Amhr2-Cre的小鼠常被用于在Mullerian管间质细胞中条件性敲除靶基因研究小鼠Mullerian管的发育和退化。鉴于Wt1在胚胎发育中扮演重要角色,而且我们的预实验结果显示Wt1与Amhr2在小鼠中肾中表达模式重叠,因此我们提出假设:用Amhr2-Cre的小鼠在Mullerian管间质细胞中条件性敲除Wt1分子可能会导致Mullerian管严重发育缺陷甚至无法形成,进而可以揭示某些生殖道畸形（如MRKH综合症）的发病机制。为了研究Wt1分子在雌性小鼠生殖道发育中的作用,我们设计了该部分实验。研究方法:我们基于Cre-LoxP重组系统作用原理,利用Amhr2-Cre小鼠,在Mullerian管间质细胞中条件性敲除Wt1分子,运用苏木素-伊红（Hematoxylin-Eosin）染色研究雌性成年小鼠生殖道的形态变化。研究结果:1)Wt1分子表达在小鼠中肾体腔上皮、Mullerian管间质细胞以及中肾间质细胞中,其在小鼠中肾中的表达模式与Amhr2有部分重叠:二者均表达在体腔上皮和Mullerian管间质细胞中;2)利用Amhr2-Cre在Mullerian管间质细胞中条件性敲除Wt1分子后,不影响Mullerian管的形成,但雌性成年小鼠生殖道发育异常,表型变异较大:轻者肉眼观生殖道形态正常,重者可见阴道远端闭锁,阴道上段、子宫因积液膨大,输卵管无卷曲。3)利用Amhr2-Cre在Mullerian管间质细胞中条件性敲除Wt1分子后,雌性成年小鼠子宫肌层发育不良,子宫内层环形肌和纵行肌的厚度均较对照小鼠子宫肌层厚度薄（P<0.05）,子宫内膜腺体减少,而且随着阴道表型的加重,子宫发育不良的表型更加明显;4)利用Amhr2-Cre在Mullerian管间质细胞中条件性敲除Wt1分子后,雌性成年小鼠阴道上皮分化异常,表现为:敲除小鼠阴道上皮失去典型的复层鳞状上皮结构,虽有分层,上皮层次变薄,基底层细胞增生,排列紊乱,阴道上皮无明确角化。研究结论:1.利用Amhr2-Cre条件性敲除小鼠Mullerian管间质细胞的Wt1基因不影响雌性小鼠Mullerian管的形成,但导致雌性小鼠生殖道的分化异常,Wt1是维持雌性小鼠生殖道正常分化的重要分子;2.间质表达的Wt1分子调控阴道上皮的分化,利用Amhr2-Cre条件性敲除Wt1后,成年雌性小鼠阴道上皮分化异常,表现为阴道上皮基底层细胞异常增殖和分层,阴道上皮失去正常角化。
赵巧雪[9]（2020）在《特异性失调Pax2谱系的颅神经嵴细胞中的BMP信号通路导致颅面部器官发育异常》文中认为颅神经嵴细胞起源于背侧神经管,之后随着胚胎发育从鳃弓组织迁移到颅面部,进一步分化成为颅颌面各种间充质组织。许多研究表明,颅神经嵴细胞在胚胎发育时期的迁移与分化异常会导致颅面发育畸形。因此解析颅神经嵴细胞的细胞谱系和迁移过程有着重要意义。目前对于细胞谱系追踪,常使用各种Cre小鼠与Cre的报告基因小鼠交配,通过观察Cre阳性的细胞迁移和分化进行谱系追踪。颅神经嵴细胞谱系最经典的Cre标记小鼠是Wnt1-cre小鼠,我们最近的研究发现Pax2-cre小鼠也能特异性标记颅面部间充质的细胞,因此,我们将对Pax2谱系的颅神经嵴细胞在胚胎发育过程中进行精细得谱系追踪,并且与Wnt1-cre小鼠进行比较,以期望发现新的颅神经嵴细胞标记工具小鼠。首先,我们利用Pax2-cre小鼠与Cre报告基因(R26Rm Tm G)小鼠交配,收取E15.5天的胚胎,发现Pax2-cre小鼠能特异性标记颅面部间充质的细胞谱系。进一步我们在颅神经嵴细胞迁移的关键时间点（E10.5-E12.5）对Pax2谱系的颅神经嵴细胞的迁移和发育过程进行精细解析,并与Wnt1-cre小鼠标记的颅神经嵴细胞谱系模式进行对比。结果显示,Pax2谱系的颅神经嵴细胞特异性在E10.5-E11.5小鼠第一鳃弓的间充质组织中表达,不在在第二鳃弓组织中表达,而Wnt1-cre小鼠标记的颅神经嵴细胞谱系是在第一和第二鳃弓的间充质组织中表达。表明Pax2-cre小鼠所标记的颅神经嵴细胞谱系可能是一种尚未研究过的,新型的颅神经嵴细胞谱系。其次,我们分别将Wnt1-cre小鼠、Pax2-cre小鼠与p Mes-Bmp4小鼠（Bmp4的条件性过表达）进行交配,试图从基因的功能方面来分析Pax2-cre小鼠和Wnt1-cre小鼠所标记的颅神经嵴细胞谱系的异同点。Wnt1-cre;p Mes-Bmp4小鼠出生即死亡,颅面部组织中眼部发育缺陷,上下颌前端发生不完全融合,牙齿发育异常和腭裂;Pax2-cre;p Mes-Bmp4小鼠也是出生即死亡且颅面发育异常,其表型与Wnt1-cre;p Mes-Bmp4小鼠有相似,但是牙齿发育正常,没有发生腭裂。进一步,我们对不同胚胎时期的Pax2-cre;p Mes-Bmp4转基因小鼠的颅面畸形表型进行精细分析。通过表观观察和组织形态学分析发现该小鼠眼球突出、头部略圆、上下颌的前端稍微融合、舌突出肿大、牙齿发育无异常,同时还出现了一个有趣的表型,口腔内在舌头的两侧出现了一对类似于上腭板的增生组织。我们对Pax2-cre;p Mes-Bmp4转基因小鼠的口腔内增生组织进行相关基因的表达分析,发现口腔内增生组织虽然形似于上腭板,但其并不表达上腭板间充质的特异性基因Msx1,同时也没有发生成骨分化,表明其可能只是普通的间充质组织增殖异常。随后,我们对Pax2-cre;p Mes-Bmp4小鼠的E10.5胎龄的头部组织进行了细胞增殖与凋亡检测发现,细胞增殖水平提高,凋亡水平无明显变化。因此,Pax2-cre;p Mes-Bmp4小鼠出现的颅面部畸形表型很有可能是细胞异常增殖导致的。最后,我们利用p Mes-Bmpr1a（BMP信号通路条件性激活小鼠）、p Mes–Noggin（BMP信号通路条件性阻断小鼠）、R26Rfgf8（Fgf8条件性过表达小鼠）小鼠分别与Pax2-cre小鼠交配,探究在Pax2谱系的颅面部神经嵴细胞中激活和阻断BMP信号通路对小鼠颅面发育的影响。结果显示,在Pax2谱系的颅神经嵴细胞中提高与降低BMP信号通路活性水平,发现都会导致小鼠出现早期胚胎死亡并伴随一系列的颅面畸形,表明Pax2谱系的颅面部神经嵴细胞中信号通路的异常确实是会导致颅面发育异常。综上所述,本研究利用一系列遗传修饰小鼠,发现在颅神经嵴细胞迁移到鳃弓组织时,在第一鳃弓和第二鳃弓存在着2种不同谱系的颅神经嵴细胞,表现为第一鳃弓的颅神经嵴细胞为Pax2谱系的细胞。在Pax2细胞谱系中过表达Bmp4、激活和抑制BMP信号通路都会导致的小鼠颅面发育畸形。本研究的实验结果对进一步理解小鼠发育过程中颅面部神经嵴细胞的迁移和BMP信号通路的稳态失衡与颅面发育异常具有普遍的意义。
吕萃[10]（2020）在《多能干细胞分化再生T细胞的体内抗肿瘤评估及再生可移植髓系细胞研究》文中研究表明从多能干细胞诱导分化出可移植、有功能的血液及免疫细胞一直是再生医学领域的研究热点和难点。本文第一部分证明小鼠胚胎干细胞分化来源、体内成熟的T细胞可以结合CAR-T技术改造实现体内清除肿瘤的目的,第二部分初步实现诱导小鼠胚胎干细胞获得可移植的髓系祖细胞种子,移植后可在体内短期再生髓系细胞（包括粒细胞、单核-巨噬细胞）。本研究为再生T细胞以及可移植髓系细胞的转化研究提供了技术借鉴。嵌合抗原受体 T 细胞（Chimeric Antigen Receptor T cells,CAR-T）疗法已成为临床上治疗血液肿瘤的有效手段。通常CAR-T细胞是通过分离患者外周血来源的T细胞在体外进行基因编辑而制备,但是患者自身的T细胞数量有限且经常出现功能异常或耗竭,因此需要探索T细胞新的来源。本研究基于课题组已开发的定向诱导T细胞技术,利用Runx1-Hoxa9条件性表达的多能干细胞系诱导分化出可植入免疫缺陷鼠（B-NDG）的造血祖细胞（induced hematopoietic progenitorcells,iHPCs）,移植B-NDG小鼠5周后,从脾脏中分离出再生的T细胞（induced T cells,iT）,通过将iT细胞感染CD19-CAR逆转录病毒制备CD19-CAR iT细胞。为了验证CD19-CAR iT细胞在体内针对B淋巴瘤细胞的杀伤功能,本研究首先通过移植表达荧光素酶（luciferase）的B淋巴瘤细胞（Ka539-luciferase）构建了基于C57BL/6的肿瘤负荷鼠模型,随后分别将CD19-CAR iT细胞和Ctrl-CARiT细胞（阴性对照）过继移植到肿瘤模型中,流式检测发现CD19-CAR iT细胞可以持久抑制外周血中CD19+B细胞的产生,这表明了其具有针对特异抗原的直接杀伤能力。同时小鼠活体成像实验证实CD19-CAR iT细胞可以有效缓解肿瘤模型鼠的肿瘤负荷,并且相比于对照组,经过CD19-CAR iT细胞治疗的肿瘤鼠能够显着延长生存时间（>70天）。其次,CD19-CAR iT细胞在体内接受到CD19抗原刺激后能够快速增殖,并且可被大量激活（CD44+CD62L-）,从侧面印证了 CD19-CARiT细胞功能的有效性。以上结果说明CD19-CAR iT细胞可以有效清除B淋巴瘤细胞,也验证了由多能干细胞诱导再生的iT细胞可以用于制备CAR-T细胞,这为T细胞疗法的新细胞来源提供了技术参考。与此同时,髓系细胞,特别是粒细胞和单核-巨噬细胞,是天然免疫系统重要成员,在吞噬、杀菌和抗病原体感染中发挥关键作用。因此,再生有功能的髓系细胞对移植和化疗后的抗感染治疗具有重要的临床意义。本研究发现,Runx1-Hoxa10二因子条件性诱导表达的mES细胞系（iR10 mESCs细胞系）可诱导分化获得可移植的造血细胞种子,移植后体内再生出髓系细胞,包括粒细胞和单核-巨噬细胞。具体而言,首先通过形成拟胚体（Embryoid bodies,EBs）的方式模拟胚胎发育早期阶段,随后通过诱导Runx1和Hoxa10的表达和添加特定造血细胞因子进行培养获得诱导型生血内皮细胞（iHECs,CD31+CD41lowCD45-c-Kit+CD201hi）。生成的iHECs再和OP9-DL1基质细胞共培养获得诱导型造血祖细胞（induced hematopoietic progenitor cells,iHPCs）,这些 iHPCs 植入半致死辐照后的Rag1-/-小鼠后成功再生髓系细胞（CD11b+）。PCR测序结果证明体内再生的髓系细胞确实插入了目的基因Runx1和Hoxa10。此外,在骨髓和脾脏组织中均检测到再生的髓系细胞,包括粒细胞（CD11b+Gr1+）、单核细胞（CD11b+Gr1-F4/80-）和巨噬细胞（CD11b+F4/80+）。最后,iHPCs在移植入半致死辐照后的野生型受体鼠后也成功再生髓系细胞。结合再生髓系细胞的功能实验结果,本研究将为再生人髓系细胞提供技术参考,也有望为临床上抗感染细胞疗法等提供新的细胞来源。
二、心脏的起源和细胞谱系（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、心脏的起源和细胞谱系（论文提纲范文）
（1）小鼠Kupffer细胞的转分化研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 中英文缩写词对照表 |
| 前言 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 肝脏概述 |
| 1.2 肝脏纤维化 |
| 1.2.1 肝细胞的死亡与凋亡 |
| 1.2.2 肝纤维化发展 |
| 1.2.3 肝纤维化中肌成纤维细胞的组成 |
| 1.3 KCs在肝脏学中的研究进展 |
| 1.3.1 KCs的起源 |
| 1.3.2 KCs在肝脏结构中的定位 |
| 1.3.3 KCs的免疫作用 |
| 1.3.4 KCs的异质性 |
| 1.3.5 KCs的可塑性 |
| 1.3.6 KCs与肝脏疾病 |
| 1.4 细胞谱系追踪技术 |
| 1.4.1 细胞谱系追踪技术的基本原理 |
| 1.4.2 细胞谱系追踪的标记方法 |
| 1.4.3 细胞谱系追踪在肝脏研究中的应用 |
| 1.4.4 细胞谱系追踪的未来 |
| 1.6 细胞的转分化 |
| 1.6.1 细胞转分化概述 |
| 1.6.2 自然发生的转分化 |
| 1.6.3 实验性转分化 |
| 1.6.4 肝脏中的转分化 |
| 1.6.5 转分化应用于再生医学的优点和局限性 |
| 第2章 KCs在体外非实质细胞培养过程中的形态和表型变化研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.2.3 主要实验耗材与设备 |
| 2.2.4 主要实验试剂配制 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 非实质细胞分离 |
| 2.3.2 收集培养的非实质细胞 |
| 2.3.3 多聚体免疫共沉淀 |
| 2.3.4 RNA提取 |
| 2.3.5 基因表达分析 |
| 2.3.6 免疫荧光成像 |
| 2.3.7 统计学方法 |
| 2.4 结果 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 第3章 精密肝切片培养实验过程中,KCs特征性基因表达下调 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 实验试剂 |
| 3.2.3 主要实验耗材与设备 |
| 3.2.4 主要实验试剂配制 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 第4章 在精密肝切片培养和体外非实质细胞培养实验中,KCs中纤维化相关基因表达分析研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 实验动物 |
| 4.2.2 主要实验试剂 |
| 4.2.3 主要实验耗材与设备 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.4 结果 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 第5章 KCs在培养过程中转录因子基因表达研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料 |
| 5.2.1 实验动物 |
| 5.2.2 实验试剂 |
| 5.2.3 主要实验耗材与设备 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.4 结果 |
| 5.5 讨论 |
| 5.6 小结 |
| 第6章 KCs与肝片中胶原沉积的初步探索研究 |
| 6.1 引言 |
| 6.1.1 实验动物 |
| 6.1.2 实验试剂 |
| 6.1.3 主要实验耗材与设备 |
| 6.1.4 主要实验试剂配制 |
| 6.2 实验方法 |
| 6.2.1 KCs耗竭 |
| 6.2.2 肝片培养、基因分析等方法同前所述 |
| 6.3 结果 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 小结 |
| 结论 |
| 本实验创新点 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（2）基于肥大细胞调控肥胖和能量代谢的机制研究白杨素干预高脂饮食相关代谢性疾病的作用（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| abstract |
| 缩写词对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 肥胖、能量代谢和营养摄入 |
| 1.1.1 肥胖的定义、流行和危害 |
| 1.1.2 能量代谢 |
| 1.1.3 营养摄入 |
| 1.2 能量代谢与脂肪组织棕色化 |
| 1.2.1 脂肪细胞类型和分布 |
| 1.2.2 脂肪细胞的发育起源 |
| 1.2.3 促进脂肪组织棕色化的因素 |
| 1.3 免疫细胞与能量代谢以及肥胖的关系 |
| 1.3.1 免疫细胞与脂肪组织炎性 |
| 1.3.2 免疫细胞与脂肪组织产热 |
| 1.4 MC研究进展 |
| 1.4.1 MC简介 |
| 1.4.2 MC的激活 |
| 1.4.3 MC分泌的介质 |
| 1.4.4 MC参与多种代谢性疾病 |
| 1.5 MC稳定剂及其生物活性 |
| 1.5.1 人工合成的MC稳定剂 |
| 1.5.2 天然MC稳定剂 |
| 1.5.3 食品源MC稳定剂白杨素研究进展 |
| 1.6 研究背景以及拟解决的关键科学问题 |
| 1.6.1 研究背景 |
| 1.6.2 拟解决的关键科学问题 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 主要试剂与实验材料 |
| 2.2 主要仪器设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 饲料配制 |
| 2.3.2 小鼠饲养和饮食 |
| 2.3.3 细胞培养 |
| 2.3.4 小鼠葡萄糖耐受(GTT)以及胰岛素耐受(ITT)试验 |
| 2.3.5 血浆脂蛋白以及脂肪组织中脂质的检测 |
| 2.3.6 组胺和β-己糖胺酶检测 |
| 2.3.7 组织脱水包埋切片 |
| 2.3.8 甲苯胺蓝染色 |
| 2.3.9 HE染色 |
| 2.3.10 UCP1免疫组化染色 |
| 2.3.11 UCP1与PDGFRα免疫荧光共定位染色 |
| 2.3.12 小鼠能量代谢检测 |
| 2.3.13 小鼠体温的检测 |
| 2.3.14 组织和细胞的总RNA提取及逆转录 |
| 2.3.15 定量PCR(Real-time PCR) |
| 2.3.16 组织总蛋白提取 |
| 2.3.17 Western blot |
| 2.3.18 脂肪组织中5-羟色胺的提取和检测 |
| 2.3.19 流式细胞仪分析 |
| 2.4 数据处理与分析 |
| 第三章 结果与分析 |
| 3.1 MC在饮食诱导的肥胖和胰岛素抵抗发生中的作用 |
| 3.1.1 MC稳定剂DSCG不减少普通高脂饮食诱导的肥胖和胰岛素抵抗 |
| 3.1.2 MC稳定剂DSCG和酮替芬能减少高胆固醇西方饮食诱导的肥胖和胰岛素抵抗 |
| 3.1.3 MC稳定剂DSCG和酮替芬能够减轻高胆固醇高脂饮食诱导的肥胖和胰岛素抵抗 |
| 3.1.4 饮食中摄入的Cho影响MC的激活 |
| 3.1.5 MC稳定剂会抑制LDL诱导的MC脱颗粒 |
| 3.2 MC调控机体脂肪组织棕色化和能量消耗的作用机制 |
| 3.2.1 MC失功能会增强小鼠能量消耗 |
| 3.2.2 Kit~(w-sh/w-sh)小鼠SAT中回复MC会抑制能量消耗降低产热 |
| 3.2.3 MC直接抑制脂肪细胞产热和棕色分化 |
| 3.2.4 MC通过分泌5-羟色胺(5-hydroxytryptamine)调节SAT棕色化和产热 |
| 3.3 食品源MC稳定剂白杨素干预小鼠DIO和能量消耗作用机制 |
| 3.3.1 白杨素改善HFD诱导的肥胖和胰岛素抵抗 |
| 3.3.2 白杨素减少高脂饮食喂养的小鼠体内脂肪过多 |
| 3.3.3 白杨素增强HFD喂养的小鼠能量消耗激活产热基因的表达 |
| 3.3.4 白杨素通过激活PDGFRα表达促进SAT浅棕色脂肪组织分化 |
| 3.3.5 白杨素激活SAT中PDGFRα的表达 |
| 3.3.6 白杨素影响骨髓来源巨噬细胞极化 |
| 3.3.7 白杨素通过miR调节SAT棕色化 |
| 3.3.8 结论 |
| 第四章 讨论、展望与创新点 |
| 4.1 讨论与展望 |
| 4.1.1 MC在饮食诱导的肥胖和胰岛素抵抗发生中的作用 |
| 4.1.2 MC调控机体脂肪组织棕色化和能量消耗的作用机制 |
| 4.1.3 食品源MC稳定剂白杨素干预小鼠饮食诱导肥胖和能量消耗的作用 |
| 4.2 创新点 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间的学术活动及成果情况 |
（3）人胚骨骼干祖细胞的起源研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验小鼠 |
| 1.1.2 基础试剂 |
| 1.1.3 流式抗体与免疫组织抗体信息 |
| 1.1.4 实验仪器和设备 |
| 1.1.5 实验耗材 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 人胚样本取材 |
| 1.2.2 肢芽或长骨样本单细胞悬液准备 |
| 1.2.3 流式细胞分析和分选 |
| 1.2.4 成纤维集落形成和间充质成球分析实验 |
| 1.2.5 三系分化实验:成脂、成骨和成软骨分化实验 |
| 1.2.6 核糖核酸提取和定量聚合酶链反应 |
| 1.2.7 肾包膜下移植 |
| 1.2.8 肾包膜下移植切片的五色套染法 |
| 1.2.9 免疫荧光染色 |
| 1.2.10 苏木素-伊红染色 |
| 1.2.11 单细胞转录组测序 |
| 1.2.12 单细胞转录组测序数据的处理 |
| 1.2.13 非线性降维和聚类 |
| 1.2.14 物种比较分析 |
| 1.2.15 差异基因表达分析 |
| 1.2.16 单细胞基因调控网络分析 |
| 1.2.17 重建单细胞发育轨迹 |
| 1.2.18 转录组速率分析 |
| 1.2.19 转录本平均的细胞分选 |
| 1.2.20 基因功能注释分析 |
| 1.2.21 基因集分析 |
| 1.2.22 表面标志和转录因子分析 |
| 1.2.23 统计和重复性分析 |
| 1.2.24 线上数据获得途径 |
| 第二章 肢芽和长骨发育过程中单细胞转录组的整合分析 |
| 2.1 人胚肢芽和长骨样本的获得及预处理 |
| 2.2 人胚肢芽和长骨转录组数据中群体的整合性解析 |
| 第三章 肢芽发育过程中间质谱系特征的解析 |
| 3.1 肢芽发育过程中的群体转录组特征解析 |
| 3.2 肢芽发育过程中的进化保守性分析 |
| 第四章 长骨发育过程中成骨软骨谱系特征的解析 |
| 4.1 长骨发育过程中成骨软骨谱系群体转录组解析 |
| 4.2 长骨发育过程中的进化保守性分析 |
| 第五章 CADM1 鉴定为胚骨骼干祖细胞的表面分子 |
| 5.1 胚骨骼干祖细胞表面标志筛选和原位验证 |
| 5.2 CADM1 富集胚骨骼干祖细胞的功能学验证 |
| 第六章 胚骨骼干祖细胞自我更新,并经历成骨软骨生成分化 |
| 6.1 胚骨骼干祖细胞的自我更新和体外分化潜能解析 |
| 6.2 胚骨骼干祖细胞的体内分化潜能解析 |
| 第七章 脑颅骨发育过程中成骨生成谱系特征解析 |
| 7.1 颅骨发育中群体转录组特征解析 |
| 7.2 颅骨和长骨发育群体比较分析 |
| 7.3 颅骨群体不同源性群体成骨发育轨迹解析 |
| 第八章 结论、讨论与展望 |
| 8.1 结论 |
| 8.2 讨论 |
| 8.3 展望 |
| 参考文献 |
| 综述:骨发育和修复的骨骼干细胞 |
| 参考文献 |
| 作者在学期间取得的学术成果 |
| 主要简历 |
| 致谢 |
（4）单细胞精度解析人胚巨噬细胞的起源和特化（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 巨噬细胞的分类 |
| 1.1.1 巨噬细胞的传统分类 |
| 1.1.2 单核吞噬系统对巨噬细胞的分类 |
| 1.1.3 巨噬细胞的二元分类 |
| 1.1.4 巨噬细胞的多元分类 |
| 1.1.5 巨噬细胞的其它分类 |
| 1.2 巨噬细胞的起源 |
| 1.2.1 原始造血对巨噬细胞的贡献 |
| 1.2.2 瞬时定向造血对巨噬细胞的贡献 |
| 1.2.3 定向造血对巨噬细胞的贡献 |
| 1.3 巨噬细胞的特化 |
| 1.3.1 内在因素对巨噬细胞特化的影响 |
| 1.3.2 微环境对巨噬细胞特化的影响 |
| 1.4 巨噬细胞的功能 |
| 1.4.1 巨噬细胞的免疫功能 |
| 1.4.2 巨噬细胞的组织特异性功能 |
| 1.5 人类巨噬细胞的研究现状 |
| 1.5.1 人类胚胎造血发育简介 |
| 1.5.2 人类巨噬细胞的发育 |
| 1.6 单细胞转录组测序 |
| 1.6.1 单细胞测序平台的进展 |
| 1.6.2 单细胞转录组数据分析方法的进展 |
| 1.6.3 单细胞转录组测序在巨噬细胞研究中的应用 |
| 1.7 研究内容及意义 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 实验样本 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 抗体列表 |
| 2.1.4 软件列表 |
| 2.1.5 主要设备与器材 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 组织分离与单细胞化 |
| 2.2.2 单细胞流式分析与分选 |
| 2.2.3 造血祖细胞体外培养 |
| 2.2.4 单细胞转录组文库的构建及测序 |
| 2.2.5 原始数据预处理及质控 |
| 2.2.6 细胞群体识别及降维分析 |
| 2.2.7 差异表达基因分析与生物标志识别 |
| 2.2.8 SCENIC与GSEA分析 |
| 2.2.9 假时序分析 |
| 第三章 实验结果与分析 |
| 3.1 人胚早期造血细胞的时空转录图谱 |
| 3.1.1 实验流程和测序数据质控 |
| 3.1.2 人胚早期造血细胞的细胞类型及其分子特征 |
| 3.1.3 人胚早期造血群体的差异比较 |
| 3.1.4 STRT-seq测序数据的验证 |
| 3.2 人胚早期造血祖细胞的特征解析 |
| 3.2.1 人胚早期造血祖细胞的转录调控 |
| 3.2.2 人胚早期造血祖细胞的时间动力学分析 |
| 3.2.3 YSMP与HSPC的差异比较 |
| 3.3 YSMP在胚肝中的发育及其鉴定 |
| 3.3.1 YSMP的发育路径解析 |
| 3.3.2 YSMP发育的分子决定机制 |
| 3.3.3 YSMP的功能验证 |
| 3.4 人胚巨噬细胞的多重起源 |
| 3.4.1 巨噬细胞及相关群体的特征解析 |
| 3.4.2 人胚巨噬细胞的多重起源解析 |
| 3.5 人胚巨噬细胞在不同组织中的特化 |
| 3.5.1 人胚小胶质细胞的起源和特化 |
| 3.5.2 人胚巨噬细胞在肝脏的特化 |
| 3.6 人胚TRM与经典TRM的比较 |
| 3.6.1 人胚TRM与经典TRM的联合分析 |
| 3.6.2 人胚TRM与经典TRM的差异比较 |
| 第四章 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 作者在学期间取得的学术成果 |
| 主要简历 |
| 致谢 |
（5）非人灵长类早期胚胎发育与疾病模型研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 非人灵长类胚胎早期发育 |
| 1.2.1 配子形成 |
| 1.2.2 受精 |
| 1.2.3 卵裂 |
| 1.2.4 囊胚形成 |
| 1.2.5 植入 |
| 1.2.6 早期胚胎发育的分子调控 |
| 1.2.7 早期胚胎发育与环境应激 |
| 1.3 非人灵长类胚胎早期发育调控研究 |
| 1.3.1 单细胞组学技术揭示胚胎早期发育的分子调控 |
| 1.3.2 利用体细胞核移植研究胚胎重编程过程 |
| 1.4 非人灵长类疾病模型研究 |
| 1.4.1 非人灵长类基因组编辑研究现状 |
| 1.4.2 基因编辑技术的安全性问题 |
| 1.5 小结 |
| 第二章 基于单细胞转录组测序的猕猴胚胎植入前发育研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验设计 |
| 2.3 实验材料与方法 |
| 2.3.1 动物来源 |
| 2.3.2 实验主要试剂 |
| 2.3.3 实验主要仪器 |
| 2.3.4 卵母细胞采集 |
| 2.3.5 建立体外受精/体细胞核移植/孤雌激活/孤雄发育胚胎 |
| 2.3.6 胚胎培养 |
| 2.3.7 单细胞样本收集 |
| 2.3.8 单细胞转录组数据分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 单精子注射、体细胞核移植、单性生殖胚胎的植入前转录图谱 |
| 2.4.2 猕猴胚胎植入前发育的转录阻滞 |
| 2.4.3 猕猴植入前胚胎转录组的母源—合子转化 |
| 2.4.4 表观遗传调控相关基因的异常表达与胚胎阻滞相关 |
| 2.4.5 通过降低核移植胚胎中异常的H3K9me3修饰提高胚胎发育率 |
| 2.5 讨论及小结 |
| 第三章 建立DAX1基因靶向编辑的食蟹猴模型 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验设计 |
| 3.3 实验材料与方法 |
| 3.3.1 实验主要试剂和仪器 |
| 3.3.2 动物来源、卵采集、体外受精 |
| 3.3.3 建立DAX1基因靶向编辑食蟹猴 |
| 3.3.4 编辑效率检测:T7酶切及测序 |
| 3.3.5 脱靶检测 |
| 3.3.6 H&E染色 |
| 3.3.7 免疫组化和免疫荧光检测 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 建立DAX1基因靶向修饰的食蟹猴模型 |
| 3.4.2 Cas9介导的模型猴生殖系细胞DAX1基因靶向突变 |
| 3.4.3 DAX1基因突变引起模型猴猴睾丸发育异常 |
| 3.4.4 DAX1基因突变不会导致支持细胞发育异常 |
| 3.4.5 DAX1基因突变导致Wnt/β-catenin信号通路异常上调 |
| 3.4.6 DAX1基因突变引起模型猴肾上腺发育异常 |
| 3.5 讨论及小结 |
| 第四章 食蟹猴胚胎的干细胞嵌合研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验设计 |
| 4.3 实验材料与方法 |
| 4.3.1 食蟹猴多能干细胞系的建立 |
| 4.3.2 多能干细胞的荧光标记 |
| 4.3.3 干细胞体外分化实验 |
| 4.3.4 构建嵌合体胚胎 |
| 4.3.5 胚胎培养/延迟培养及胚胎移植 |
| 4.3.6 免疫组化染色 |
| 4.3.7 胚胎移植、孕检、胎儿及新生猴组织样本采集 |
| 4.3.8 胎猴/新生猴组织处理 |
| 4.3.9 特异性基因PCR检测 |
| 4.3.10 单细胞RNA-seq |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 建立多能干细胞嵌合猴胚胎 |
| 4.4.2 建立多能干细胞嵌合食蟹猴 |
| 4.4.3 通过基因表达谱分析揭示多能干细胞的嵌合机制 |
| 4.4.4 食蟹猴pESCs在成体猴生殖系的嵌合 |
| 4.4.5 胚胎微环境影响多能干细胞嵌合效率 |
| 4.5 讨论及小结 |
| 第五章 结论与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 A 攻读博士期间发表论文目录 |
| 附录 B 实验动物伦理审批表 |
| 附录 C 其他需要说明的内容 |
（6）哺乳动物大脑新皮层神经胶质细胞发生的克隆分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 主要英文缩略词对照表 |
| 第1章 前言 |
| 1.1 问题的提出 |
| 1.2 选题背景及意义 |
| 1.3 文献综述 |
| 1.3.1 RGP与大脑新皮层发育 |
| 1.3.2 神经胶质细胞多样性及其发生 |
| 1.3.3 Nf1 基因与神经胶质瘤 |
| 1.4 论文研究方法 |
| 1.5 论文结构 |
| 第2章 实验材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 耗材和试剂 |
| 2.1.3 抗体 |
| 2.2 实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 转基因小鼠的交配与基因型鉴定 |
| 2.3.2 双荧光标记嵌合分析系统 |
| 2.3.3 胚胎阶段RGP的标记和克隆的采集 |
| 2.3.4 乳鼠阶段神经胶质中间前体细胞的标记和克隆的采集 |
| 2.3.5 MADM系统小鼠的合笼与检栓 |
| 2.3.6 代乳母鼠 |
| 2.3.7 他莫昔芬诱导 |
| 2.3.8 小鼠的剖腹产与代乳 |
| 2.3.9 灌流 |
| 2.3.10 切片 |
| 2.3.11 免疫荧光 |
| 2.3.12 封片与装片 |
| 2.3.13 玻片扫描仪 |
| 2.3.14 激光共聚焦显微镜 |
| 2.3.15 三维重构 |
| 2.3.16 NND分析 |
| 2.3.17 Mean shift聚类分析 |
| 2.3.18 数据拟合 |
| 第3章 RGP神经胶质细胞克隆的分析 |
| 3.1 神经胶质细胞克隆 |
| 3.1.1 星形胶质细胞和少突胶质细胞克隆 |
| 3.1.2 星形胶质细胞克隆 |
| 3.1.3 少突胶质细胞克隆 |
| 3.2 神经胶质细胞克隆属性 |
| 3.2.1 神经胶质细胞克隆空间分布 |
| 3.2.2 不同时期标记的神经胶质细胞克隆 |
| 3.2.3 不同区域标记的神经胶质细胞克隆 |
| 3.3 RGP神经胶质发生模式 |
| 3.3.1 神经发生到神经胶质发生的转变 |
| 3.3.2 神经胶质发生既定的模式 |
| 3.3.3 星形胶质发生和少突胶质发生相互独立 |
| 3.4 小结和讨论 |
| 第4章 神经胶质中间前体细胞克隆分析 |
| 4.1 神经胶质中间前体细胞克隆分析 |
| 4.2 RGP克隆内局部克隆簇分析 |
| 4.2.1 Mean-shift聚类分析参数获取 |
| 4.2.2 局部克隆簇的空间分布 |
| 4.2.3 局部克隆簇内的胶质细胞数量 |
| 4.2.4 局部克隆簇的数量 |
| 4.3 小结和讨论 |
| 第5章 神经胶质细胞多样性和分布 |
| 5.1 RGP克隆内细胞亚型 |
| 5.2 神经胶质中间前体细胞克隆细胞亚型 |
| 5.3 神经胶质细胞在大脑新皮层中的分布 |
| 5.4 小结和讨论 |
| 第6章 NF1 在神经胶质发生中的作用 |
| 6.1 Nf1 缺失特异性地影响神经胶质发生而不是神经发生 |
| 6.2 Nf1 缺失极大促进了少突胶质细胞发生 |
| 6.3 Nf1 缺失促进了星形胶质中间前体细胞的发生 |
| 6.4 Nf1 缺失促进了少突胶质中间前体细胞的发生和输出 |
| 6.5 小结和讨论 |
| 第7章 神经元克隆分析 |
| 7.1 RGP神经发生潜能随时间推移减弱 |
| 7.2 神经元中间干细胞的发生和输出 |
| 7.3 RGP产生神经元克隆的分布 |
| 7.4 神经元中间前体细胞克隆的分布 |
| 7.5 小结和讨论 |
| 第8章 总结与展望 |
| 8.1 论文总结 |
| 8.2 论文展望 |
| 8.2.1 对RGP神经发生的探讨 |
| 8.2.2 对RGP神经胶质发生的探讨 |
| 8.2.3 对神经胶质细胞多样性来源和分层的探讨 |
| 8.2.4 Nf1 在神经胶质发生和神经胶质瘤发生中作用的探讨 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 |
（7）铜腙诱导的脱髓鞘和再髓鞘化过程中NG2-glia的异质性特征研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 实验材料与方法 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 结果 |
| 一、铜腙模型的构建及验证 |
| 二、单个NG2-glia的获取、测序及总体分群 |
| 三、铜腙诱导的脱髓鞘和再髓鞘化过程中NG2-glia总体类型与亚群特征 |
| 四、铜腙诱导的脱髓鞘和再髓鞘化过程中NG2-glia亚群变化与功能分析 |
| 五、NG2 glia亚群特征的验证 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 文献综述 铜腙模型的细胞和分子病理机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表论文和参加科研工作情况 |
| 致谢 |
（8）小鼠M（?）llerian管发育的分子机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 引言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 基于单细胞转录组测序技术对雌性小鼠M(?)llerian管发育的研究 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 实验材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.1.3 实验试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 配鼠、捡栓 |
| 2.2.2 小鼠标记 |
| 2.2.3 小鼠基因型鉴定 |
| 2.2.4 小鼠中肾取材 |
| 2.2.5 小鼠中肾消化成单细胞悬浮液 |
| 2.2.6 组织固定 |
| 2.2.7 石蜡包埋 |
| 2.2.8 石蜡切片的免疫组化染色 |
| 2.3 单细胞转录组测序 |
| 2.3.1 单细胞样本检测 |
| 2.3.2 10x genomics标记单细胞文库的构建 |
| 2.3.3 生物信息分析 |
| 第3章 结果 |
| 3.1 mT/mG;Amhr2-Cre小鼠的M(?)llerian管间质细胞被标记上绿色荧光蛋白(GFP) |
| 3.2 单细胞转录组测序技术将发育中的小鼠中肾分成15群细胞 |
| 3.3 细胞亚群的鉴定 |
| 3.4 绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞的单细胞转录组测序数据分析 |
| 3.4.1 GFP阳性细胞亚群的鉴定 |
| 3.4.2 GFP阳性细胞亚群差异表达基因的分析 |
| 3.4.3 GFP阳性细胞发育轨迹的重建 |
| 3.4.4 GFP阳性细胞差异基因的拟时间变化 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 雌性小鼠中肾的细胞图谱 |
| 4.2 雌性小鼠M(?)llerian管间质细胞的异质性 |
| 4.3 M(?)llerian管间质细胞谱系分化的路线图 |
| 4.4 M(?)llerian管发育的Hox基因调控和可能的分子级联调控机制 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 利用Amhr2-Cre小鼠条件性敲除Wt1基因对雌性小鼠生殖道发育影响的研究 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.1.3 实验试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 配鼠、捡栓 |
| 2.2.2 小鼠标记 |
| 2.2.3 小鼠基因型鉴定 |
| 2.2.4 小鼠生殖道取材 |
| 2.2.5 组织固定 |
| 2.2.6 石蜡包埋 |
| 2.2.7 苏木素-伊红染色(HE染色) |
| 2.2.8 石蜡切片的免疫荧光染色 |
| 2.2.9 石蜡切片的免疫组化染色 |
| 2.2.10 子宫肌层的测量 |
| 第3章 结果 |
| 3.1 Wt1与Amhr2共表达在雌性小鼠胚胎M(?)llerian管间质和体腔上皮 |
| 3.2 Amhr2-Cre;Wt1~(-/flox)的成年雌性小鼠生殖道发育异常 |
| 3.3 Amhr2-Cre;Wt1~(-/flox)的成年雌性小鼠子宫肌层发育不良,子宫内膜腺体减少 |
| 3.4 Amhr2-Cre;Wt1~(-/flox)的成年雌性小鼠阴道上皮分化异常 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 利用Amhr2-Cre敲除Wt1后不影响雌性小鼠M(?)llerian管的形成 |
| 4.2 利用Amhr2-Cre敲除Wt1后雌性小鼠输卵管和子宫形态破坏 |
| 4.3 利用Amhr2-Cre敲除Wt1后影响阴道上皮的分化 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 M(?)llerian管形成、发育和分化的分子调控机制 |
| 尿生殖系统的胚胎起源 |
| 小鼠M(?)llerian管的形成 |
| 小鼠M(?)llerian管的分化 |
| 人类M(?)llerian管形成和分化障碍 |
| M(?)llerian管发育不良综合征 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 攻读博士学位期间以第一作者发表论文情况 |
| 致谢 |
（9）特异性失调Pax2谱系的颅神经嵴细胞中的BMP信号通路导致颅面部器官发育异常（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 绪论 |
| 一、人类和小鼠颅面的发育过程 |
| 二、神经嵴细胞与颅颌面发育 |
| 三、神经嵴细胞与颅面发育异常 |
| 四、神经嵴细胞有关的标记基因 |
| 五、颅面部发育相关的信号通路 |
| 1、SHH信号通路 |
| 2、FGF信号通路 |
| 3、WNT信号通路 |
| 4、BMP信号通路 |
| 六、本课题的目的和意义 |
| 第一章 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验仪器与设备 |
| 1.1.3 实验药品 |
| 1.2 实验试剂配制 |
| 1.2.1 分子实验试剂 |
| 1.2.2 组织切片染色试剂 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.3.1 转基因小鼠的交配及胚胎收取 |
| 1.3.2 转基因小鼠的基因型鉴定 |
| 1.3.2.1 转基因小鼠鼠尾基因组的粗提取 |
| 1.3.2.2 蛋白酶K法提取转基因小鼠鼠尾基因组 |
| 1.3.2.3 转基因小鼠的基因型聚合酶链式反应(PCR)鉴定 |
| 1.3.3 组织石蜡包埋及切片 |
| 1.3.4 组织切片HE染色 |
| 1.3.5 组织切片免疫荧光技术 |
| 1.3.7 石蜡切片TUNEL |
| 第二章 实验结果 |
| 2.1 转基因小鼠基因型的鉴定 |
| 2.2 Pax2-cre小鼠特异性标记颅面部神经嵴细胞 |
| 2.3 Pax2-cre与Wnt1-cre所标记的颅神经嵴细胞谱系有所不同 |
| 2.4 Pax2 谱系的颅神经嵴细胞中特异性过表达Bmp4 对于颅面部胚胎发育的影响 |
| 2.4.1 利用Bmp4 条件性过表达小鼠在Pax2 谱系的颅神经嵴细胞中实现Bmp4的过表达 |
| 2.4.2 在Pax2 细胞谱系中持续性激活Bmp4 导致小鼠颅面部畸形 |
| 2.5 在Pax2 细胞谱系中持续性激活Bmp4 对小鼠上腭板、牙和舌的发育影响分析 |
| 2.6 对Pax2 细胞谱系中激活Bmp4 导致口腔出现的增生组织进行相关基因检测 |
| 2.7 Pax2-cre;R26R~(mTmG);pMes-Bmp4 小鼠口腔增生组织未发生成骨分化 |
| 2.8 Pax2-cre;R26R~(mTmG);pMes-Bmp4 小鼠颅面部增殖与凋亡水平检测 |
| 2.8.1 Pax2-cre;R26R~(mTmG);pMes-Bmp4 小鼠早期颅面部细胞增殖水平增高.. |
| 2.8.2 Pax2-cre;R26R~(mTmG);pMes-Bmp4 小鼠早期颅面部细胞凋亡水平未受影响 |
| 2.9 Pax2-cre;R26R~(mTmG);pMes-Bmp4 小鼠舌肌肉发育与野生型小鼠一致 |
| 2.10 在Pax2-cre谱系细胞中失调BMP信号通路对颅面部发育的影响 |
| 2.10.1 Pax2-cre谱系细胞中提高BMP信号通路水平导致小鼠颅面畸形及腭裂 |
| 2.10.2 Pax2-cre谱系细胞中降低BMP信号通路水平导致小鼠胚胎早期发育不全且死亡 |
| 第三章 分析与讨论 |
| 3.1 Pax2-cre小鼠特异性标记迁移到第一鳃弓的颅神经嵴细胞 |
| 3.2 在Pax2 谱系细胞中过表达Bmp4 导致小鼠颅面发育畸形 |
| 3.3 在Pax2-cre谱系细胞中失调BMP信号水平对小鼠发育的影响 |
| 第四章 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 |
| 致谢 |
| 索引 |
| 个人简历 |
（10）多能干细胞分化再生T细胞的体内抗肿瘤评估及再生可移植髓系细胞研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 多能干细胞分化再生的T细胞体内抗肿瘤评估 |
| 1.1 引言 |
| 1.1.1 癌症细胞免疫疗法概述 |
| 1.1.2 CAR-T细胞免疫疗法概述 |
| 1.1.3 再生T细胞的研究进展 |
| 1.2 实验材料和实验方法 |
| 1.2.1 实验动物 |
| 1.2.2 实验试剂 |
| 1.2.3 实验器材 |
| 1.2.4 实验方法 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.3.1 iR9 mESCs体外定向分化获得造血祖细胞iHPCs |
| 1.3.2 iR9 mESCs来源的iHPCs移植免疫缺陷鼠再生T淋巴细胞 |
| 1.3.3 CD19-CAR iT细胞体内肿瘤杀伤功能验证策略 |
| 1.3.4 CD19-CAR iT可有效清除肿瘤模型鼠外周血中的B淋巴细胞 |
| 1.3.5 CD19-CAR iT可有效消除肿瘤模型鼠的肿瘤负荷 |
| 1.3.6 CD19-CAR iT可有效延长肿瘤模型鼠的生存期 |
| 1.3.7 CD19-CAR iT细胞在小鼠体内显示出增殖和激活能力 |
| 1.4 总结和讨论 |
| 第2章 多能干细胞再生可移植髓系细胞研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.1.1 髓系细胞的发育和调控 |
| 2.1.2 再生髓系细胞的现状和进展 |
| 2.1.3 髓系细胞再生新思路 |
| 2.2 实验材料和方法 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.2.3 实验器材 |
| 2.2.4 实验方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 iRunx1-P2A-Hoxa10-EGFP mES打靶细胞系(iR10 mESCs)构建成功 |
| 2.3.2 iR10 mESCs体外诱导分化生成造血祖细胞 |
| 2.3.3 基质细胞OP9-DL1较MS5-DL1更能促进造血祖细胞产生 |
| 2.3.4 iR10 mESCs来源iHPCs移植Rag1~(-/-)小鼠能够再生髓系细胞 |
| 2.3.5 受体鼠各组织中能检测到再生髓系细胞 |
| 2.3.6 受体鼠骨髓中检测到再生的髓系祖细胞 |
| 2.3.7 iR10 mESCs来源髓系细胞在体内短期存在 |
| 2.3.8 野生型受体鼠体内再生髓系细胞 |
| 2.4 总结和讨论 |
| 参考文献 |
| 附录 缩略词 |
| 致谢 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 |
四、心脏的起源和细胞谱系（论文参考文献）
- [1]小鼠Kupffer细胞的转分化研究[D]. 李昕宇. 吉林大学, 2021(01)
- [2]基于肥大细胞调控肥胖和能量代谢的机制研究白杨素干预高脂饮食相关代谢性疾病的作用[D]. 王新. 合肥工业大学, 2021(02)
- [3]人胚骨骼干祖细胞的起源研究[D]. 晏婧. 军事科学院, 2021(02)
- [4]单细胞精度解析人胚巨噬细胞的起源和特化[D]. 黄涛. 军事科学院, 2021(02)
- [5]非人灵长类早期胚胎发育与疾病模型研究[D]. 康宇. 昆明理工大学, 2020(04)
- [6]哺乳动物大脑新皮层神经胶质细胞发生的克隆分析[D]. 沈忠福. 清华大学, 2020
- [7]铜腙诱导的脱髓鞘和再髓鞘化过程中NG2-glia的异质性特征研究[D]. 蒋泽平. 中国人民解放军海军军医大学, 2020(02)
- [8]小鼠M（?）llerian管发育的分子机制研究[D]. 康佳. 北京协和医学院, 2020(05)
- [9]特异性失调Pax2谱系的颅神经嵴细胞中的BMP信号通路导致颅面部器官发育异常[D]. 赵巧雪. 福建师范大学, 2020(12)
- [10]多能干细胞分化再生T细胞的体内抗肿瘤评估及再生可移植髓系细胞研究[D]. 吕萃. 中国科学技术大学, 2020(01)