一、同种异体成骨细胞移植的免疫学研究（论文文献综述）
路佳佳[1]（2021）在《BoneCeramic和Bio-Oss骨粉对狗骨髓间充质干细胞体外成骨分化能力影响的比较研究》文中进行了进一步梳理目的自体骨移植一直是治疗骨缺损的金标准,但由于各种各样的并发症,在临床上难以推广,因此人们对“骨移植替代物”的关注越来越大。合适的骨移植替代物不仅要有良好的生物相容性和促成骨分化性能,还需具有合适的降解速率。本研究主要是比较Bone Ceramic一种新型纯合成骨移植材料和Bio-Oss骨粉对狗骨髓充质干细胞（DBMSCs）的增殖、黏附和体外成骨分化能力的影响。方法比格犬经3%戊巴比妥钠静脉麻醉后,选取髂后脊为穿刺点,抽取骨髓,用密度梯度离心法培养原代细胞,待细胞达到80～90%融合,加入0.25%胰酶消化细胞进行传代培养,体外分离的DBMSCs进行成骨、成脂,成软骨分化鉴定。分别取Bio-Oss和Bone Ceramic两种骨粉颗粒,加入含10%FBS的DMEM培养基浸泡48 h后获取浸提液,浓度为0.1g/m L。将DBMSCs以4×104个/m L的密度接种在96孔板中,培养24h细胞贴壁后,将原培养液更换为浸提液,对照组不更换培养液。分别在培养1,3,5天,加入CCK8工作液,置于恒温培养箱2h,随后在450 nm波长处检测各孔的吸光度。将Bio-Oss和Bone Ceramic颗粒分别放入15ml离心管中,加入密度为1×106个/m L的DBMSCs,培养3天后,吸出培养液,PBS清洗,加入2.5%戊二醛,固定12 h后,PBS冲洗,采用60%、70%、80%、90%和100%的无水乙醇对细胞进行梯度脱水,临界点干燥,完成后镀金90 s,将镀金后的颗粒于扫描电子显微镜下进行观察。无菌环境下将BioOss和Bone Ceramic颗粒与细胞共培养1d后,将生长培养基（Growth medium,GM）更换为成骨培养基（Osteogenic medium,OM）,每2d换液。分组如下:Bio-Oss植入细胞（OM）:A组,Bone Ceramic植入细胞（OM）:B组,纯DBMSCs（OM）:C组,纯DBMSCs（GM）:D组。分别在培养的第4、7、10d后检测细胞培养上清中碱性磷酸酶ALP的水平。按照ALP定量检测的分组方法,分别于7、14d后提取细胞总RNA,进行RT-PCR定量检测OPN、OCN、RUNX-2和ALP基因的相对表达水平。结果从狗骨髓中分离培养的细胞符合间充质干细胞的特征。CCK-8结果显示两种骨粉浸提液均对DBMSCs没有明显的细胞毒性作用;扫描电子显微镜SEM结果显示,与Bio-Oss相比,DBMSCs在Bone Ceramic的表面分布的更加广范;ALP定量检测显示DBMSCs在Bone Ceramic表面比Bio-Oss更有利于其成骨分化,同时使OPN、OCN、RUNX-2和ALP基因的表达升高。结论体外研究表明,Bio-Oss和Bone Ceramic均具有良好的生物相容性,与Bio-Oss骨粉相比,Bone Ceramic更加有利于DBMSCs的成骨分化。
梁磊[2]（2019）在《体外冲击波对兔同种异体骨异位再血管化与骨活性的影响》文中研究指明背景由于交通事故、感染或骨肿瘤切除导致的骨缺损变得越来越多。同种异体骨正在更多的应用于该领域,但这种去抗原处理的同种异体骨大多为“死骨”。本实验团队前期研究已经证实,将兔的同种异体大段骨置于大腿隐动脉处的股直肌与股内侧肌的间隙内,能够完成其再血管化和骨活化进程;另外通过外源性局部泵入VEGF、BMP,还可以加快整个进程。但是由于操作相对复杂、花费相对高昂、增加感染的风险。所以本次实验就是来探讨体外冲击波是否可以加速同种异体骨移植后再血管化和骨活化进程。目的对同种异体骨异位再血管化和骨活化的兔子模型进行体外冲击波干预,研究其对同种异体骨异位的再血管化及骨活化进程影响。研究结果将为临床中找到一种经济、安全、可靠的促进同种异体骨异位再血管化和骨活化进程的方案。方法用健康中国白兔（6个月龄）140只,随机选20只,手术取出其双侧胫骨,制成同种异体骨段（长度1.2cm）;余120只随机分为对照组（同种异体骨组）、实验组（同种异体骨+ESWT组）,每组各60只。模型制备:将骨段包埋于右大腿隐动脉旁股直肌与股内侧肌间隙内,并用2根0.8mm的克氏针固定在股骨上。术后处理:实验组,从术后从第2周开始,每隔一周（2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12周）局部使用体外冲击波治疗一次;对照组,术后没有特殊处理。两组分别于术后2、4、6、8、10、12周随机选取10只处死,取出植入物,分别行大体标本观察、HE染色组织学检查、免疫荧光染色（CD34、I型胶原蛋白）、ELSA染色（碱性磷酸酶）检测,进而分析所取得的结果意义。采用SPSS 17.0统计软件对结果进行统计分析。计数资料、计量资料分别以构成比（%）、均数±标准差（x±s）表示;采用独立样本t检验进行实验组和对照组组间比较;P<0.05认为有统计学差异。结果1.大体标本观察:术后2周末时,按时拆线。取出植入骨段,观察到两组骨段表面均比较光滑,有少量的纤维组织膜包裹,极易被剥离。术后第4周,观察到实验组骨段表面上的结缔组织增多,骨段表面出现了一些较为表浅的骨吸收陷窝;对照组骨段表面见少量纤维组织覆盖,结构疏松,剥离后见骨段光滑、未出现明显陷窝。术后第6周,实验组的骨段表面的纤维组织进一步增多,包裹的更加紧密,骨段表面都出现较多凹陷;对照组骨段表面的纤维软组织也有所增多,与周围组织粘连相较前紧密一些,但是骨段表面凹陷有所增加。术后第8周,观察实验组骨段表面的纤维结缔组织继续增厚,剥开骨段发现骨段表面陷窝进一步增多、变深;对照组骨段表面纤维结缔组织也继续增厚,与周围组织粘连较为紧密,骨段表面可看见较多的骨凹陷。术后第10周,实验组骨段表面的纤维结缔组织已不再明显增加,形成较疏松、支架结构的结缔组织,骨段表面的陷窝继续加深,且骨皮质已变薄;对照组骨段表面的纤维结缔组织还在增加,也与周围组织粘连紧密,分离困难,骨凹陷进一步加深增多。术后12周,两组骨段表面的纤维结缔组织也几乎一样厚度,均被严密包裹、剥离困难,取出骨段观察到骨段表面陷窝程度差别已较小,对照组的骨凹陷较实验组略少,骨皮质均变薄。2.HE染色结果:第2周时,实验组和对照组可见小面积骨细胞坏死,可见小血管增生。第4周时,实验组可见大量小血管新生;对照组的小血管数量较实验组少。第6周时,实验组可见大量新生血管,骨密度增加;对照组的可见较多的新生血管,骨密度有所增强。第8周时,实验组血管较前无明显变化,但是骨密度仍在增加,有更多的新生骨组织,可见成熟骨小梁。对照组血管数较前增多,新生骨细胞进一步增多。第10周时,实验组较前变化不明显;对照组血管数无明显变化,但是新生骨细胞数增加。第12周时,两组和第10周相比较基本变化不大,两组对比也不明显。3.CD34结果（免疫荧光染色）:实验组和对照组CD34阳性血管数总体均呈先升高后降低趋势,分别于术后第6周和第8周达到峰值,峰值对比无统计学差异（P>0.05）。4.Ⅰ型胶原蛋白结果（免疫荧光染色）:变化趋势与CD34显示结果类似。实验组和对照组结果分别于术后第8周和第10周达到峰值,峰值对比无统计学意义（P>0.05）。5.骨源性碱性磷酸酶结果（ELSA染色）:变化趋势和I型胶原蛋白结果一致,两组结果总体呈先升高后降低趋势。实验组在第8周时达到峰值,对照组在第10周时达到峰值,两组峰值对比无统计学差异（P>0.05）。结论体外冲击波可加速兔同种异体骨异位再血管化和骨活化进程。
伏玺[3]（2019）在《电压门控钙通道亚基Cacnb3调控小鼠脂肪间充质干细胞成骨分化的研究》文中认为目的:间充质干细胞具有高度的自我更新能力、多向分化潜能和免疫调节功能。这些优势使它们成为极具吸引力的研究和临床应用工具。间充质干细胞在治疗骨相关疾病中具有非常重要的意义,此外,间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）在多种因子和细胞内信号的转录调控下,可分化为多种细胞类型,包括脂肪细胞和成骨细胞。但其在成骨分化中的具体机制还不完全清楚。钙离子电压门控?3亚基（Calcium Voltage-Gated Channel Auxiliary Subunit Beta 3,Cacnb3）作为电压门控通道的一个亚基,与钙离子调控相关,骨骼的形成离不开钙离子的参与。Cacnb3对间充质干细胞的成骨分化研究尚未见报道,因此探讨Cacnb3在间充质干细胞成骨分化中的作用具有重要意义,本研究主要关注了Cacnb3如何影响细胞的成骨分化及其作用机制。方法:（1）从GEO数据库中下载去乙酰化酶抑制剂（HDACi）处理小鼠前体成骨细胞（MC3T3-E1 preosteoblasts）的生物芯片,利用生物信息技术分析该生物芯片,与成骨基因数据集做合集分析,筛选成骨相关基因。（2）通过胶原酶消化法从小鼠脂肪中分离间充质干细胞,进行体外培养,流式细胞仪检测细胞表面标记物。（3）体外培养小鼠脂肪间充质干细胞ADSCs,成骨诱导培养基为实验组,正常培养基为对照组。培养到第14和21天进行碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）染色及茜素红染色,以检测小鼠ADSCs是否具有多向分化潜能和间充质干细胞所具有的干性特征。（4）对小鼠脂肪间充质干细胞ADSCs进行成骨诱导并进行定量分析,检测成骨相关基因和筛选基因的表达。在小鼠成骨前体细胞（MC3T3-E1 preosteoblasts）和人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）进行相同的实验验证基因表达的一致性。并在小鼠成骨前体细胞中成骨诱导14天进行相同的碱性磷酸酶和茜素红染色分析,以验证成骨诱导是否成功。（5）利用siRNA敲低Cacnb3在MC3T3-E1中的表达,检测敲低Cacnb3后对成骨相关基因表达的影响。同时,利用钙离子荧光探针Fluo-4 AM检测敲低Cacnb3对细胞内钙离子浓度水平的影响。结果:（1）利用生物信息技术分析表达谱数据筛选出22个基因,这些基因在成骨分化中表达上调,在脂肪分化中表达下调,且受去乙酰化酶抑制剂的严格调控。通过功能分析,发现有6个基因（Cacnb3、Lpcat2等）与钙离子调控相关。（2）利用酶消化法成功培养出小鼠脂肪间充质干细胞,传代稳定,增殖能力强,利用流式细胞仪检测证实有特定的间充质干细胞表面标记物表达（CD45、CD44、CD29、Sca-1）,表明我们所分离培养的小鼠脂肪间充质纯度较高,可用于后续实验。（3）小鼠ADSCs成骨诱导14天和21天后,碱性磷酸酶染色和茜素红染色可看出我们所分离的小鼠ADSCs具有成骨分化潜能和干细胞特有的干性。（4）小鼠ADSCs经成骨诱导后成骨相关基因（Runx2、Alp、Col1a1、Opn）和筛选出来的基因Cacnb3和Lpcat2的表达量在实验组中明显高于对照组（P<0.05）,进一步验证,发现在MC3T3-E1细胞系和人的骨髓间充质干细胞成骨诱导中具有相似的结果。（5）与siRNA-NC组细胞相比,siCacnb3细胞中Cacnb3基因的mRNA表达下调,且mRNA表达水平在敲低效率70%（P<0.001）,成骨相关基因（ALP、Runx2）在沉默第5天后siCacnb3组较siRNA-NC组mRNA表达均下降。此外,敲低Cacnb3后钙离子浓度明显低于siRNA-NC组。结论:Cacnb3在细胞的成骨分化过程中表达上调,表明Cacnb3基因在细胞的成骨分化中可能具有促进作用,敲低Cacnb3会影响细胞内钙离子水平,表明Cacnb3可能是通过钙离子通路调控细胞的成骨分化,本研究为进一步探索间充质干细胞的成骨分化机制奠定了基础。
李红[4]（2019）在《观察同种异体骨块通过上置法植骨术在牙槽骨重建中的效果》文中研究指明目的:观察同种异体骨块经上置法（Onlay）植骨术后牙槽骨水平向及垂直向骨量的变化。评估同种异体骨块在牙槽骨水平向及垂直向骨增量中的效果。方法:2017年9月至2018年10月在南昌大学附属口腔医院就诊,诊断为牙列缺损伴有牙槽骨垂直或（和）水平骨缺损,要求种植修复,且知情同意使用同种异体骨块修复材料,无手术禁忌征的3位患者为研究对象。根据术前口腔专科检查及CBCT检查进行术前评估,根据“修复为导向”的种植原则,制定详细的同种异体骨Onlay植骨手术方案。骨增量术后即刻和6个月行CBCT检查,通过Geomagic Stuio 2013软件对术前、术后即刻及术后6个月的CBCT数据进行处理,分析术区骨量高度和宽度的变化情况,评估骨增量效果。结果:1.病例一（35-37牙）:术后6个月CBCT与术前CBCT影像学数据对比显示牙槽骨水平向骨量平均增加4.48mm,垂直向骨量平均增加4.24mm。2.病例二（13-22牙）:术后6个月CBCT与术前CBCT影像学数据对比显示牙槽骨水平向骨量平均增加1.11mm。3.病例三（11、21牙）:术后6个月CBCT与术前CBCT影像学数据对比显示牙槽骨水平向骨量平均增加3.49mm,垂直向骨量平均增加2.07mm.结论:同种异体骨块经上置法（Onlay）植骨术是牙槽嵴水平向及垂直向骨缺损骨增量一种有效的方法。
修楠[5]（2019）在《同种异体牙骨粉在大鼠拔牙模型上免疫反应的研究》文中认为目的:观察比较同种异体牙骨粉与自体牙骨粉作为骨移植替代材料植入机体引起免疫反应的变化,为临床骨缺损修复替代材料的应用提供临床指导和理论依据。方法:选取45只SPF级SD雄性大鼠,6周龄,体重180±20g。拔除下颌左右中切牙,建立拔牙模型,去除中切牙牙周膜及牙髓,制备牙骨粉。将大鼠随机分成A、B、C、D、E 5组,A组.拔牙窝植入新鲜未处理自体牙骨粉,B组.拔牙窝植入新鲜经过脱矿等处理的自体牙骨粉,C组.拔牙窝植入新鲜未处理同种异体牙骨粉,D组.拔牙窝植入新鲜经过脱矿等处理的同种异体牙骨粉,E组.拔牙窝不植入骨移植材料作为空白对照组。按观察时限,根据术后1、2、4周分为3期。分别在术后1、2、4周取大鼠外周血进行T淋巴细胞亚群分析,并分离下颌骨制作切片进行苏木精-伊红（HE）染色,每个样本随机选取3张切片,分别在50倍、100倍、400倍镜下拍摄照片进行组织学观察分析,并对每个样本在400倍镜下随机选取5个视野（牙骨粉颗粒所占视野面积相近）,根据细胞核形态、核浆比例进行人工炎症细胞计数。将实验数据进行统计学分析,评估同种异体牙骨粉移植后的免疫反应。每个样本50倍镜下拍摄照片使用Image Pro Plus6.0软件进行图像处理拼接重建拔牙窝,分析计算各组拔牙窝骨小梁面积,分析各组的成骨效果。结果:一.大体观察:术后1天:面部轻微肿胀,进食量、活动量减少。术后1周:牙骨粉移植部位愈合良好,无红肿流脓现象,面部肿胀消除,大鼠饮食正常,活动恢复正常。二.流式细胞仪T淋巴细胞亚群分析:相同时间点不同组间比较:术后1、2、4周同种异体未处理组与其他各实验组CD4+/CD8+差异无统计学意义（p>0.05）,说明同种异体未处理组相比较其他实验组未引起明显的免疫差异,术后2周同种异体未处理组、自体未处理组CD4+/CD8+增加与空白对照组差异有统计学意义（p<0.05）。同组间不同时间点比较:相比较术后1、4周,术后2周各实验组CD4+/CD8+均增加,自体未处理组、同种异体未处理组CD4+/CD8+与术后1周、4周差异有统计学意义（p<0.05）,说明未处理组在术后2周可能达到免疫高峰。术后4周,各组CD4+/CD8+降低,与术后2周差异有统计学意义（p<0.05）。三.HE染色观察分析:术后1、2、4周,各组牙骨粉植入区周围均未发现明显大量的炎症细胞浸润灶,只存在少量的炎症细胞,术后2周各组拔牙窝内可见少量新生不规则骨小梁,术后4周经过脱矿处理的实验组骨小梁面积明显增加,牙骨粉颗粒降解吸收明显,周围被新生的骨小梁爬行替代,并且新生骨小梁与骨粉紧密相接,骨小梁之间有较多活跃骨细胞。根据细胞核形态人工炎症细胞计数分析检测:相同时间点不同组间比较:同种异体未处理组与其他各实验组差异无统计学意义（p>0.05）。经过Image Pro Plus 6.0软件骨小梁面积分析:相同时间点不同组间比较:术后2周时各组骨小梁面积均增加,自体未处理组、自体处理组、同种异体处理组增加明显与空白对照组差异有统计学意义（p<0.05）,术后4周时,同种异体处理组、自体处理组骨小梁面积增加明显,与同种异体未处理组、自体未处理组、空白对照组差异有统计学意义（p<0.05）,而同种异体处理组与自体处理组差异无统计学意义（p>0.05）。同组间不同时间点比较:术后2周各组拔牙窝内可见新生不规则骨小梁,骨小梁面积与术后1周差异有统计学意义（p<0.05）,术后4周各组骨小梁面积明显增加分别与术后1、2周差异有统计学意义（p<0.05）。结论:根据本实验得出以下结论:1.同种异体牙骨粉与自体牙骨粉一致,具有良好成骨效果。2.经过脱矿处理的同种异体牙骨粉与自体牙骨粉均可良好的诱导新骨形成,且优于未处理牙骨粉。3.同种异体牙骨粉、自体牙骨粉植入机体后免疫状态一致,不会引起明显的免疫排斥差异。
王宏[6]（2017）在《应用个性化钛合金修复体和同种异体下颌骨修复比格犬下颌骨缺损的比较研究》文中进行了进一步梳理研究背景由于外伤、肿瘤、炎症等因素所导致的大段下颌骨缺损,临床上常采用自体骨移植修复。但是,自体骨移植存在供骨量有限,且可能伴有供区畸形、疼痛等并发症。同种异体下颌骨具有与宿主骨相似的外形轮廓和内部结构,避免了因获取自体骨所造成的二次创伤,成为自体骨移植的替代方法。许多研究证实经过物理化学处理的同种异体骨免疫原性较低,生物力学强度与宿主骨相接近,是较合适的骨缺损修复材料[1-2]。许亦权等应用冷冻/冻干同种异体下颌骨修复犬颞下颌关节及下颌骨缺损,所有动物均获得了临床愈合[3]。李祖兵等应用冻干同种异体下颌骨修复7例大段下颌骨缺损,所有病例均获得较好的修复效果[4]。但是,同种异体骨移植后骨融合缓慢,单独应用同种异体下颌骨常常因感染、骨吸收、免疫排斥等因素影响修复效果[5-7]。为了提高同种异体骨移植后的成功率,学者们采用复合自体骨颗粒、自体骨髓、生长因子等方法来促进同种异体下颌骨移植后的成活[8-10]。有研究采用冷冻同种异体下颌骨复合自体髂骨松质骨颗粒成功修复了 4例大段下颌骨缺损[10]。但是,自体骨髓来源有限,促进骨生长能力受患者自身状况影响,其临床应用受到限制。骨组织工程为大段下颌骨缺损的修复带来了新的希望。但是,大段下颌骨缺损的修复重建要求骨组织工程支架具有与缺损区相同的外形结构和相似的力学强度,目前所应用的支架材料的强度尚无法满足要求。经过处理的同种异体下颌骨可以满足修复需求,是较合适的支架材料。钛合金是临床上常用的人工骨修复材料,随着计算机辅助设计软件和3D打印设备的快速发展,3D打印技术制作的网状钛合金支架具有个性化外形结构和可调控的力学强度,可能是较合适的骨组织工程支架。那么,这两种支架材料能否应用于下颌骨缺损的临床治疗呢,效果有无差别?这需要我们研究。目的探索和比较3D打印个性化钛合金和冷冻干燥同种异体下颌骨修复下颌骨缺损的可行性,为其应用于下颌骨缺损的临床修复提供参考依据。方法1分离培养和鉴定比格犬骨髓来源间充质干细胞。2制备同种异体冻干下颌骨。建立犬下颌骨节段性缺损模型,随机分为3组,分别接受冻干同种异体下颌骨修复;冻干同种异体下颌骨复合自体骨髓间充质干细胞修复;冻干同种异体下颌骨复合同种异体骨髓间充质干细胞修复。采用大体观察,CT扫描,显微CT及组织学评估修复效果。3通过细胞毒性试验,溶血试验,皮肤刺激试验及皮肤致敏试验评价和比较不同3D打印技术制备的钛合金试样的生物相容性。4电子束选区熔化技术制作三维网状钛合金支架。采用壳聚糖、Bio-Oss骨粉和β-甘油磷酸钠制备温敏型水凝胶。骨髓间充质干细胞与水凝胶共培养,CCK-8和死活细胞染色观察细胞在水凝胶中的生长情况。建立比格犬下颌骨体部缺损,随机分为3组,分别接受单纯网状钛合金支架;网状钛合金支架复合壳聚糖/Bio-OSS水凝胶;网状钛合金支架复合壳聚糖/Bio-Oss和同种异体骨髓间充质干细胞修复。采用大体观察、CT、显微CT和组织学检测评估修复效果。5建立比格犬包括颞下颌关节的半侧下颌骨缺损,采用冻干同种异体下颌骨、3D打印个性化实性和网状钛合金修复体修复。通过大体观察、CT及组织学检测来比较三种修复方法的术中操作、外观恢复情况,对非手术侧颞下颌关节的影响,以及对肝脏和肾脏组织的影响。结果1采用密度梯度离心法成功分离培养比格犬骨髓间充质干细胞,所分离细胞具有良好的增殖能力和多向分化能力。2应用同种异体下颌骨移植修复节段性缺损后,术区完全愈合,外形恢复良好。术后CT显示单纯同种异体下颌骨修复组的移植体吸收不明显,复合干细胞的两组移植体体积明显减小。显微CT显示复合同种异体干细胞组和自体干细胞组移植体之间的骨相关参数无明显差异（P>0. 05）,与单纯修复组相比较,两组移植体新骨形成量明显多于单纯修复组,差异有统计学意义（P<0. 05） 。组织学检测显示,复合同种异体干细胞组和自体干细胞组的移植体有明显的新骨形成,而单纯修复组新骨形成量较少。3体外细胞试验结果显示电子束选区熔化和选择性激光熔化制备的钛合金试样对犬骨髓间充质干细胞的生长和成骨分化能力没有明显影响,两种试样之间没有明显差异（p>0. 05）。溶血试验结果显示,两种钛合金试样料的溶血率分别为2. 24%和2.46%,均小于5%,提示两种钛合金材料均具有良好的血液相容性。皮肤刺激试验和迟发型超敏反应最大剂量试验结果显示,两种钛合金材料没有潜在的皮肤刺激性和致敏性。4制备的壳聚糖/Bio-Oss水凝胶具有温敏性,在室温下为溶液,在37℃条件下转化为凝胶,所需时间约为10-12min。CCK-8和死活细胞染色结果显示,骨髓间充质干细胞在壳聚糖/Bio-Oss水凝胶中生长良好,活性未受影响。应用3D打印网状钛合金修复下颌骨缺损后,移植体未出现松动、暴露或折断,所有动物均达到临床愈合。术后CT显示网状支架与断端固位良好,未引起周围骨吸收。显微CT显示,复合壳聚糖/Bio-Oss/BMSCs水凝胶的网状钛合金支架组新骨形成量多于复合壳聚糖/Bio-Oss组（p<0. 05）;两组网状支架内的新骨形成量明显多于单纯网状支架修复组（p<0.05）。组织学检测显示,术后6个月,3组网状支架近宿主骨端均有明显新骨形成,复合壳聚糖/Bio-Oss/BMSCs和复合壳聚糖/Bio-Oss组的网眼内的新骨量明显多于单纯网状支架修复组,复合壳聚糖/Bio-Oss/BMSCs水凝胶的网状支架内新骨量最多。5冻干同种异体下颌骨、3D打印个性化实性修复体和3D打印个性化网状修复体术中操作均较方便。同种异体下颌骨术中需要对其进行塑形,而3D打印实性和网状钛合金修复体均不需要塑形。3组修复体修复后,下颌骨外形轮廓恢复较好,面部对称,咬合关系良好。术后CT显示双侧颞下颌关节位置关系未见明显异常。扫描电镜和组织学检测结果显示,三组动物非手术侧关节盘均有退行性变。结论1电子束选区熔化和选择性激光熔化制备的钛合金材料均具有良好的生物相容性,两者之间没有统计学差异。2冻干同种异体下颌骨和电子束选区熔化网状钛合金均可以作为骨组织工程支架修复下颌骨缺损。同种异体下颌骨复合骨髓间充质干细胞后具有较高的成骨能力。复合干细胞和成骨材料能够促进网状钛合金支架内的新骨形成新骨,但是骨再生速度较慢,新生骨量尚不足。今后,还需采用增加促骨生长因子及促血管生长因子等方法来改善成骨速度和成骨质量。3同种异体骨髓间充质干细胞和自体骨髓间充质干细胞均能提高移植体的成骨速度和质量,两者之间没有统计学差异。同种异体骨髓间充质干细胞有望成为骨组织工程种子细胞来源。4冷冻干燥同种异体下颌骨和3D打印个性钛合金修复体均具有操作方便,可个性化修复的优势。三组修复体均能很好地恢复下颌骨缺损区的外形和重建颞下颌关节,是较好的大段下颌骨缺损修复方法。
张保亮[7]（2016）在《生物型异种骨生物相容性细胞学及免疫学研究》文中提出背景及意义：骨移植主要用于修复骨缺损和促进骨再生,在骨科及口腔颌面外科领域已经被广泛应用。目前临床上骨移植材料的种类最主要包括自体骨、同种异体骨、异种骨、人工合成骨及复合骨。自体骨作为植骨的“金标准”已经成为共识,但骨量有限,难以满足大范围骨缺损的修复。同种异体骨是目前临床上常用的材料,主要用于修复、填充骨缺损,具有固定和支撑作用,但其来源亦有限,尚不能完全满足临床植骨需求。异种骨材料来源广泛,如果经过合适程序处理后可以作为骨移植替代材料,能够很好地解决临床上自体骨与同种异体骨来源不足的问题,然而异种骨面临的主要问题是如何采取适当的工艺降低其免疫原性及免疫排斥反应,同时尽量保留其骨传导及骨诱导能力,以达到良好的植骨融合效果。我国是一个人口众多、地域辽阔的发展中国家,生产事故、交通意外、地质灾害等时有发生,造成伤亡事故导致的骨缺损病例大量存在,因此我国对骨缺损材料需求量较大。异种骨来源丰富,可以满足这一需求,但其移植后会发生免疫排斥反应影响移植骨的融合效果,为解决其免疫排斥,学者们相继研究出多种不同的处理方法,目前市场上已出现多种能应用于临床的异种骨,如Bio-OSS、RBX重组合异种骨,治疗效果显着,安全性也得到认可。目的：本实验分细胞学实验及免疫学实验两部分,细胞学实验采用材料在体外与细胞共培养,通过Transwell试验测定成骨细胞的迁移能力,流式细胞仪检测成骨细胞的细胞周期和细胞凋亡情况,ANPP法检测AFP,MTT法评价异种骨的细胞毒性,溶血试验观察材料与血液的相容性情况。结合上述方法来综合评价异种骨与成骨细胞的体外的成骨能力和生物相容性。免疫学实验通过建立羊颈椎异种骨融合器植入动物模型,观察异种骨植入后分时段抽取动物模型血液,通过流式细胞仪来检测不同时间点CD4+及CD8+淋巴细胞,CD4+/IL-2+T细胞及CD4+/IL-4+T细胞的含量来评定免疫排斥反应情况,进一步为生物型异种骨移植材料应用于临床提供安全性和有效性的依据。材料：生物型异种松质骨：由广东冠昊生物科技股份有限公司采用已获得美国专利授权（US6106555A, US6231614B1）的技术制备；生物型异种骨颈椎融合器：由广东冠昊生物科技股份有限公司制备；SD大鼠成骨细胞株由广州军区总医院骨科实验室液氮冻存；成年本地山羊18只,体重25～30kg,由广东冠昊生物科技有限公司动物实验中心提供。第一章异种骨生物相容性细胞学研究方法：实验分成3组,分别是实验组（交联的异种骨组）,阳性对照组（未交联的异种骨组）和阴性对照组。实验组将交联的异种骨与SD大鼠成骨细胞在H-DMEM培养基中进行共培养；阳性对照组将未交联的异种骨与SD大鼠成骨细胞在H-DMEM培养基中进行共培养；阴性对照组将SD大鼠成骨细胞直接在普通H-DMEM培养基中单独培养。分别于培养后1、3、5、7天用四甲基偶氮唑盐（methyl thiazolyltetrazolium,MTT）法测定吸光度值,以评价细胞的增殖情况,反应异种骨的细胞毒性及生物相容性。采用PNPP偶氮法分别测定3天,1周,2周,3周时的ALP量,以评价异种骨对成骨细胞成骨的影响。应用流式细胞仪检测细胞周期变化以及成骨细胞凋亡情况,以评价异种骨对成骨细胞细胞周期和凋亡的影响。取新西兰大白兔静脉血进行异种骨的急性血溶试验,评价异种骨与血液的生物相容性。Transwell试验分成4个组,分别为A1组：未交联的异种骨组,A2组：A1组的对照组；和B1组：交联的异种骨组,B2组：B2组的对照组。在倒置相差显微镜下观察细胞的迁移情况,测定穿膜成骨细胞数量,评价成骨细胞的迁移能力。实验数据采用SPSS20.0统计软件进行分析,以均数±标准差（x+s）表示,实验数据采用方差分析和LSD-t检验或Tamhane多重比较检验,P<0.05为有统计学意义。结果：1成骨细胞增殖活性培养1、3、5、7 d后在显微镜下观察可见实验组,阳性对照组及阴性对照组成骨细胞形态均良好。实验组与对照组相比,随着培养时间延长,OD值均升高,在1d、3d、5d、7d时间点,三组间比较采用方差分析和LSD-t检验,数据统计学分析显示同一时间点三个组间吸光度值两两比较差别均无显着统计学差异（P>0.05）,MTT法测定OD值可间接反应细胞增殖数量,表明异种骨材料对成骨细胞增殖活性无不良影响,与成骨细胞相容性良好,无明显细胞毒性。2 PNPP偶氮法测定出ALP的OD值加入成骨诱导液后3天后在显微镜下观察三个组的成骨细胞形态,结果显示三个组H-DMEM培养基中生长的成骨细胞形态均良好,采用PNPP法测定OD值可间接反应细胞成骨能力,本实验结果显示随着培养时间延长,三个组OD值均升高,表明三组细胞生长状态良好。三组间比较采用方差分析和LSD-t检验,统计学分析结果显示3天及7天时3组间两两比较均无显着统计学差异（P>0.05）；2周及3周时,实验组及阳性对照组跟阴性对照组比较差别均有显着统计学差异（P<0.05）,实验组跟阳性对照组比较差别有显着统计学差异（P<0.05）。3流式细胞术检测成骨细胞周期采用流式细胞术检测Millipore软件分析实验结果显示：A组G0/G1、S、G2/M分别所占细胞周期百分比为：70.10±1.1%、3.82±0.02%、16.56±0.02%；B组GO/G1、S、G2/M分别所占细胞周期百分比为：70.10±0.20%、3.82±0.02%、16.56±0.01%；对照组GO/G1、S、 G2/M分别所占细胞周期百分比为：70.20±0.04%、3.86±0.02%、16.52±0.05%。三组间比较采用方差分析和LSD-t检验,GO/G1、S、G2/M三组数据统计学分析显示三组间两两比较差别均无显着统计学差异（P>0.05）,可见三组细胞G0/G1期、S期、G2/M期分布比例相似,表明两种异种骨对成骨细胞细胞周期均无不良影响。4成骨细胞的迁移能力Transwell试验中通过在高倍镜下（×200）随机取5个视野计数,计数每个视野的平均细胞数量评价成骨细胞在普通培养基与含异种松质骨培养基的迁移能力。本实验中实验组随机取5个视野计得平均迁移的细胞数目结果为：A1组：13.42±0.02个/视野,A2组：8.00±0.02个/视野；B1组：13.41±0.02个/视野,B2组：8.00±0.07个/视野；两组间比较采用方差分析和Tamhane多重比较,以均数±标准差（x+s）表示,数据统计学分析显示A1与A2之间比较有显着统计学差异（P<0.05）；B1与B2之间比较有显着统计学差异（P<0.05）；A1与B1之间比较无显着统计学差异（P>0.05）。5细胞凋亡实验流式细胞仪结果经过Guava Nexin软件分析显示24小时3各组细胞凋亡率为A组：0.87±0.01%；B组：0.88±0.03%；C组：0.91±0.01%。48小时3各组细胞凋亡率为A组：2.16±0.03%：B组：2.20±0.01%；C组：6.19±0.06%。三组间比较采用方差分析和LSD-t检验,24h时,三组数据统计学分析显示三组间两两比较差别均无统计学差异（P>0.05）：48h时三组数据统计学分析显示交联异种骨组与阴性对照组间比较无显着统计学差异（P>0.05）,未交联的异种骨组与阴性对照组间比较有显着统计学差异（P<0.05）,未交联的异种骨组与交联异种组间比较有显着统计学差异（P<0.05）。说明24小时内两种异种骨共培养后不会影响成骨细胞的凋亡,48小时时,交联的异种骨对成骨细胞的凋亡无明显影响,然而这时未交联的异种骨对能够明显促进成骨细胞的凋亡。6溶血实验 肉眼下可见两种异种骨组离心管中上清液呈无色透明,与阴性对照组管中的上清液颜色接近一致,无明显溶血现象发生；阳性对照组离心管中上清液呈玫瑰红色,红细胞完全破裂溶解。实验材料中未交联异种骨组的溶血率为1.13%,与阴性对照组相比无显着统计学差异（P>0.05）,无明显溶血反应；交联的异种骨组溶血率为1.02%,且值与阴性对照组相比无显着统计学差异（P>0.05）,符合溶血标准,不会引起明显溶血反应结论：1,生物型异种骨体外培养状态下可以促进大鼠成骨细胞的成骨能力和迁徙能力,交联后的异种骨比未经交联处理的异种骨这种促进作用更加明显。2,生物型异种骨体外培养状态下24小时内对大鼠成骨细胞的凋亡无明显影响,48小时时,未交联的异种骨可以明显增加成骨细胞的凋亡率,而交联后的异种骨无此影响。3,生物型异种骨体外培养状态下对大鼠成骨细胞成骨的增殖活性和细胞周期无不良影响,不会引起明显溶血反应,具有良好的生物相容性。第二章异种骨生物相容性免疫学研究方法：18只成年本地山羊,体重25-30kg,随机分成3组,每组6只。A组为自体髂骨组,手术植入自体髂骨,钢板固定；B组为异种骨融合器组,手术植入异种骨融合器加自体骨,钢板固定；C组为阴性对照组,不给予手术处理,用于对照。分别于1w、2w、4w、8w抽取实验动物血液20ml,应用流式细胞仪分别测定各个时间点各组血标本中CD4+/IL-2+, CD4+/IL-4+; CD4+, CD8+T淋巴细胞的含量,用于评价山羊对异种骨免的疫排斥反应情况。实验数据采用SPSS20.0统计软件进行分析,以均数±标准差（x+s）表示,实验数据采用方差分析和LSD-t检验,P<0.05为有显着统计学差异。结果：1一般情况 1只山羊术后当天因麻醉相关并发症死亡,当天补上1只替代。所有山羊术后正常进食及野外放养,每天观察伤口情况,术后部分山羊切口轻度肿胀,5天后肿胀基本消失。术后所有伤口愈合良好。2标本大体观察术后12周时A组颈3/4椎体间大部分融合,融合节段可见大量骨痂形成；B组融合器与上下椎体融合较差,结合处可见少量骨痂。术后24周时A组两椎体完全融合,B组融合效果欠佳。3 CD4+及CD8+T细胞测定结果 1周时,三个组间两两比较均无显着统计学差异（P>0.05）；2周时,自体骨组与阴性对照组之间CD4+及CD8+T淋巴细胞数值比较均无显着统计学差异（P>0.05）；自体骨组与异种骨融合器组之间CD4+及CD8+T淋巴细胞值相比较均有显着统计学差异（P<0.05）；异种骨融合组与阴性对照组之间CD4+及CD8+T淋巴细胞值比较均有显着统计学差异（P<0.05）；4周时,自体骨组与阴性对照组之间CD4+及CD8+T淋巴细胞值比较均无显着统计学差异（P>0.05）；自体骨组与异种骨融合器组之间CD4+及CD8+T淋巴细胞值相比较均有显着统计学差异（P<0.05）；异种骨融合组与阴性对照组之间CD4+及CD8+T淋巴细胞值比较均有显着统计学差异（P<0.05）；8周时,自体骨组与阴性对照组之间CD4+及CD8+T淋巴细胞数值比较均无显着统计学差异（P>0.05）；自体骨组与异种骨融合器组之间CD4+及CD8+T淋巴细胞值相比较均无显着统计学差异（P>0.05）；异种骨融合组与阴性对照组之间CD4+及CD8+T淋巴细胞值比较均无显着统计学差异（P>0.05）。4 CD4+/IL-2+T细胞及CD4+/IL-4+T细胞测定结果1周时,自体骨组与阴性对照组之间CD4+/IL-2+T淋巴细胞及CD4+/IL-4+T淋巴细胞数目比较均无显着统计学差异（P>0.05）,异种骨融合器组与阴性对照组之间CD4+/IL-2+T淋巴细胞及CD4+/IL-4+T淋巴细胞数目比较均无显着统计学差异（P>0.05）,异种骨融合组与自体骨组之间CD4+/IL-2+T淋巴细胞及CD4+/IL-4+T淋巴细胞数目比较均无显着统计学差异（P>0.05）；2周时,自体骨组与阴性对照组之间CD4+/IL-2+T淋巴细胞及CD4+/IL-4+T淋巴细胞数目比较均有显着统计学差异（P<0.05）,异种骨融合器组与阴性对照组之间CD4+/IL-2+T淋巴细胞及CD4+/IL-4+T淋巴细胞数目比较均有显着统计学差异（P<0.05）,异种骨融合器组与自体骨组之间CD4+/IL-2+T淋巴细胞及CD4+/IL-4+T淋巴细胞数目比较,均无显着统计学差异（P>0.05）；4周时,自体骨组与阴性对照组之间CD4+/IL-2+T淋巴细胞及CD4+/IL-4+T淋巴细胞数目比较均有显着统计学差异（P<0.05）；异种骨融合器组与阴性对照组之间CD4+/IL-2+T淋巴细胞及CD4+/IL-4+T淋巴细胞数目比较均有显着统计学差异（P<0.05）；异种骨融合组与自体骨组之间CD4+/IL-2+T淋巴细胞及CD4+/IL-4+T淋巴细胞数目比较均有显着统计学差异（P<0.05）；8周时,自体骨组与阴性对照组之间CD4+/IL-2+T淋巴细胞及CD4+/IL-4+T淋巴细胞数目比较均无显着统计学差异（P>0.05）,异种骨融合器组与阴性对照组之间CD4+/IL-2+T淋巴细胞及CD4+/IL-4+T淋巴细胞数目比较均无显着统计学差异（P>0.05）,异种骨融合组与自体骨组之间CD4+/IL-2+T淋巴细胞及CD4+/IL-4+T淋巴细胞数目比较均无显着统计学差异（P>0.05）结论：1,异种骨椎间融合器植入羊体内后早期会引起免疫排斥反应导致CD4+及CD8+T细胞及CD4+/IL-2+T及CD4+/IL-4+T细胞升高,4W左右最显着,随后逐渐下降,8周时CD4+及CD8+T细胞及CD4+/IL-2+T及CD4+/IL-4+T细胞数量逐渐接近正常。2,手术创伤,疼痛可以引起山羊体内的应激反应导致体内CD4+/IL-2+T细胞及CD4+/IL-4+T细胞数目升高,这种效应术后就开始,2周开左右达到最高,可以维持到术后4周左右,然而这种应激反应却不能引起CD4+T淋巴细胞及CD8+T淋巴细胞的升高。
谭新颖[8]（2014）在《同种异体骨髓间充质干细胞复合同种异体冻干骨修复比格犬半侧下颌骨缺损的实验研究》文中研究指明【研究背景】由于外伤、肿瘤、先天性畸形、感染等原因造成的下颌骨缺损重建是临床上常见的问题。下颌骨上附着有大量的肌肉、韧带组织，是面部唯一能活动的骨骼，它的结构较为复杂，是面下1/3外形轮廓的主要组成部分，与说话、咀嚼、吞咽等口腔功能密切相关。下颌骨的缺损不仅影响患者的容貌外形，而且严重影响患者的心理健康。大段下颌骨的缺损修复一直是口腔颌面外科医生所面临的一大难题。自体骨移植修复下颌骨缺损的效果较好，但是外形欠佳、骨量有限，无法满足较大缺损的修复，而且自体骨移植常常造成供区解剖结构和功能的损害，增加了患者的痛苦。因此，这就需要我们去寻求新的修复重建方法。近年来骨组织工程的发展为下颌骨缺损的修复重建提供另一方法，但目前骨组织工程所用支架强度难以达到临床要求，同时也较难恢复下颌骨形态。【目的】为了解决大段下颌骨缺损重建的修复难题，通过建立比格犬半侧下颌骨缺损的动物模型，运用组织工程的原理和方法，创新性的提出以同种异体冻干下颌骨为支架材料复合同种异体骨髓间充质干细胞修复大段下颌骨缺损的重建方案，探索大段下颌骨缺损修复的新方法，为临床大段下颌骨缺损修复提供实验依据。【方法】1.切取比格犬右侧下颌骨，剥离附着的软组织，进行冲洗、脱脂、冷冻及冻干处理，经辐照灭菌后，常温保存。通过组织学、扫描电镜及生物力学弯曲及压缩试验进行检测；2.分离培养雄性比格犬骨髓间充质干细胞，体外扩增培养，向成骨、成脂方向诱导分化，并通过流式细胞仪对分离的骨髓间充质干细胞的表面标志物进行鉴定。将冻干骨片与骨髓间充质干细胞共培养，通过MTT绘制生长曲线，观察冻干骨对细胞增殖的影响，并用扫描电镜观察细胞在冻干骨表面的生长情况；3.手术拔除比格犬右侧下颌牙齿，2个月后从口外切口，进行半侧下颌骨切除，采用同种异体冻干骨和自体骨修复缺损，术后3个月通过CT扫描及大体观察进行评估，建立下颌骨缺损重建的动物模型；4.通过雄性犬的骨髓间充质干细胞复合同种异体冻干骨移植到雌性比格犬体内异位移植，采用原位杂交的方法示踪移植的干细胞在移植骨组织内的存活情况，探讨同种异体干细胞的作用机制；5.正常下颌骨与单纯同种异体下颌骨、冻干骨复合自体骨髓间充质干细胞及冻干骨复合同种异体间充质干细胞移植修复比格犬半侧下颌骨缺损进行比较，术后1、3、6月通过CT扫描、大体观察、组织学检测、Micro-CT骨密度检测及外周血白介素2、4、6的水平，比较正常下颌骨与其他三组的修复效果及免疫学反应；6.自2008年1月～2014年1月,我们采用同种异体冻干下颌骨复合自体骨髓对25例大段下颌骨缺损的患者进行修复手术，术后随访最长6年，术后通过CT、全口曲面断层片、ECT骨三项、体格检查进行评估；7.构建了数字化外科平台，并对运用数字化外科平台对2005年1月至2014年1月在我院口腔颌面外科就诊的颌面部缺损、畸形患者进行的颌骨缺损畸形整复手术进行回顾性分析。【结果】1.同种异体冻干骨内部无细胞成分，冻干法对骨组织结构没有明显破坏。弯曲实验的冻干骨的最大载荷486.67±134.12N、最大位移0.67±0.15mm和刚度1151.67±256.46N.mm-1。新鲜骨的最大载荷688.97±92.07N、最大位移1.05±0.11mm和刚度791.83±177.79N.mm-1。新鲜组的最大载荷和最大位移显着高于冻干组（P <0.01）而刚度显着低于冻干组（P <0.05）。压缩试验中，新鲜骨压缩实验的最大载荷5079.5±1014.98N、最大位移1.01±0.16mm和刚度9837.83±1580.63N.mm-1。冻干骨压缩实验的最大载荷5163.10±730.16N、最大位移0.78±0.19和刚度11069.17±1758.12N.mm-1。压缩实验的断裂部位在舌侧骨皮质相对薄弱处。压缩实验结果显示新鲜组与冻干骨的最大载荷、刚度相比无显着性差异（P>0.05）,而新鲜组的最大位移显着高于冻干组（P <0.05）；2.骨髓间充质干细胞第1、3、6代细胞之间的细胞增殖无显着性差异，骨髓间充质干细胞流式细胞表面标志物检测之后，CD90、CD105、CD73呈阳性，CD45、CD34、 CD31、 CD14和HLA-DR呈阴性，表现出间充质干细胞的特点。扫面电镜可见细胞贴敷于骨组织表面生长，细胞生长曲线显示同种异体冻干骨对同种异体骨髓间充质干细胞的增殖影响不大；3．通过CT扫描及大体观察，自体骨与同种异体冻干骨能够修复比格犬半侧下颌骨缺损，成功构建比格犬半侧下颌骨缺损的动物模型；4．术后3月在移植同种异体骨复合干细胞组中可以检测到Y染色体特异性的基因片段，而在对照组中没有显示。说明移植的骨髓间充质干细胞在骨组织中存活并参与了新骨的形成。5．术后1、3、6个月，对比格犬实施安乐死，每组处死3只,经大体观察及CT扫描显示单纯冻干骨，骨表面的孔未痕迹明显，成骨速度缓慢；而冻干骨与自体干细胞及同种异体干细胞组骨组织吸收明显，成骨速度较快，骨表面的孔已经愈合。组织学显示术后1、3、6月冻干骨复合自体及同种异体干细胞组的成骨速度、血管化成骨均优于单纯冻干骨组。术后6个月，4组之间微血管密度数据统计学结果：同种异体冻干骨组+自体干细胞及同种异体干细胞组微血管密度两者之间未见显着性差异（P>0.05），但均比正常下颌骨组多（P<0.05），而单纯同种异体冻干骨组的微血管密度明显少于其他三组(（P<0.05）。术后1、3、6月抽取4组比格犬外周血，检测白细胞介素2、4、6的水平，结果显示:4组1、3、6月白细胞介素2、4、6未见无显着性差异（P>0.05）。通过Micro-CT对术后6月4组骨组织进行骨密度检测，结果显示单纯的同种异体冻干骨的骨密度与其他三组相比显着降低（P<0.05）。同种异体冻干骨复合自体及同种异体干细胞组两组之间没有显着性差异（P>0.05）,复合干细胞的2组与正常下颌骨组的骨密度相比未见显着性差异（P>0.05）。通过术前、术后下颌骨CT体积测量，比较分析4组下颌骨体积的变化情况。结果显示单纯同种异体冻干骨、同种异体冻干骨复合自体及同种异体干细胞组体积均显着减少（P<0.05），单纯同种异体冻干骨、同种异体冻干骨复合自体及同种异体干细胞组三组之间体积之间无显着性差异（P>0.05）。6．同种异体冻干骨复合自体骨髓修复25例患者大段下颌骨缺损，术后复查（最长观察6年），除1例患者由于口内黏膜破溃而发生感染，经处理后愈合，移植骨局部吸收，其他所有患者颌骨愈合良好，面容恢复良好，患者满意，未出现严重并发症。7．在个人计算机上将图像采集设备获得的数据通过多种软件与各种输出设备相结进行图像分割、定量测量、模拟手术、修复体制作、手术导航等，成功构建数字化外科平台；并运用数字化外科平台对2005年1月至2014年1月间12名患者进行颌骨缺损重建手术，术后患者的面型明显改善，伤口愈合良好，患者均满意。【结论】1.同种异体冻干骨经物理及化学方法处理后够清除骨组织内的细胞，且能够满足大段下颌骨缺损修复的生物力学要求，是一种性能优良的体内组织工程支架材料；2.成功构建比格犬半侧下颌骨缺损的动物模型；3.通过Y染色体标记同种异体骨髓间充质干细胞复合同种异体冻干骨体内移植结果显示移植的干细胞参与新骨形成；4.复合骨髓间充质干细胞的同种异体骨骨改建速度比没有加细胞的同种异体骨明显，愈合是从宿主骨向移植骨，从周围向中央，从哈佛管向四周逐渐进行爬行替代的过程。5.以同种异体冻干下颌骨为支架复合同种异体骨髓间充质干细胞能够加速移植骨的血管化，促进新骨生成；6.同种异体下颌骨移植修复大段下颌骨缺损经长期临床随访观察，无排异反应，面容恢复满意，逐渐成骨，愈合良好，可以作为临床修复下颌骨缺损的一种选择；7.数字化外科平台将不同数据影像经处理后相互整合，识别不同格式的数据，将不同软件和硬件的功能结合起来发挥作用，能够帮助术前诊断、制定治疗计划，辅助手术实施，能够缩短手术时间，为医、教、研工作提供强有力的技术支持。
李龙腾,郭华,杨少龙,夏武宪,杜英[9]（2014）在《骨形态发生蛋白在同种异体骨骨移植中研究进展》文中进行了进一步梳理在同种异体骨骨移植的骨愈合过程中,骨形态生成蛋白（bone morphogenetic Protein,BMP）是关键性的调节因素,它们通过调节转录因子以及借助一些信号转导途径,促进骨祖细胞分化成为成熟的成骨细胞和软骨细胞,发挥了诱导分化和定向分化的效应。骨形态生成蛋白使诱导分化生成的新骨与以同种异体骨移植为支架的骨传导作用相辅相成,完成骨缺损的修复。本文就BMP在同种异体骨骨移植愈合过程中的作用机制的研究进展进行综述。
王峰,付志厚[10]（2013）在《骨髓间充质干细胞复合异体骨修复松质骨缺损》文中研究指明背景: 有研究表明骨髓间充质干细胞及异体骨可促进骨缺损的修复,但骨髓间充质干细胞复合异体骨对于松质骨缺损的修复效果至今少有报道。目的: 观察骨髓间充质干细胞复合异体骨修复兔松质骨缺损效果。方法: 在新西兰大白兔双侧股骨外侧髁造成0.6cm×1.2cm的松质骨缺损,一侧设为模型组,骨缺损处植入复合骨髓间充质干细胞的异体骨,另一侧设为对照组,单纯植入异体骨。结果与结论: 植入后4,8,12周,大体观察、X射线检查和苏木精-伊红染色观察结果显示,模型组在新骨成长方面,缺损区修复方面均优于对照组。植入后12周,模型组骨缺损区可见大量骨小梁形成及成熟的板层骨组织,骨缺损基本修复。对照组骨缺损区仅可见大量编织骨形成,骨缺损尚未得到有效修复。模型组Lane-Sandhu法X射线结合组织学观察评分高于对照组（P<0.05）。生物力学检测结果显示,植入后12周,模型组股骨髁最大压力载荷、载荷/应变比值均高于对照组（P<0.05）,最大应变位移较对照组低（P<0.05）。结果证实,骨髓间充质干细胞复合异体骨可有效修复兔股骨髁松质骨缺损,且修复效果明显优于单纯异体骨移植。
二、同种异体成骨细胞移植的免疫学研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、同种异体成骨细胞移植的免疫学研究（论文提纲范文）
（1）BoneCeramic和Bio-Oss骨粉对狗骨髓间充质干细胞体外成骨分化能力影响的比较研究（论文提纲范文）
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| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 DBMSCs的体外分离培养镜下观察 |
| 3.2 DBMSCs的成骨、成脂和成软骨诱导三系分化 |
| 3.3 CCK-8检测两种骨粉浸提液对DBMSCs细胞增殖的影响 |
| 3.4 扫描电子显微镜(SEM)检测 |
| 3.5 ALP定量检测 |
| 3.6 qRT-PCR检测 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 植骨材料治疗正畸牙移动过程中的牙槽骨缺损 |
| 参考文献 |
| 附件 |
（2）体外冲击波对兔同种异体骨异位再血管化与骨活性的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 1 实验材料 |
| 2 手术过程 |
| 3 术后处置 |
| 4 观察指标及方法 |
| 5 统计学分析 |
| 结果 |
| 1 大体标本观察结果 |
| 2 HE染色检测结果 |
| 3 CD34的荧光免疫染色检测结果 |
| 4 Ⅰ型胶原蛋白荧光免疫染色检测结果 |
| 5 骨源性碱性磷酸酶检测 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 综述:体外冲击波在骨肌病治疗的进展 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）电压门控钙通道亚基Cacnb3调控小鼠脂肪间充质干细胞成骨分化的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、生物信息分析筛选成骨相关基因 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 生物芯片 |
| 1.1.2 实验方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 分析芯片数据筛选成骨相关基因 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 二、小鼠脂肪间充质干细胞培养及成骨分化诱导 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 仪器设备 |
| 2.1.3 实验试剂 |
| 2.1.4 试剂配制 |
| 2.1.5 实验方法 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.2.1 流式细胞术检测小鼠ADSCs细胞纯度 |
| 2.2.2 小鼠ADSCs细胞的多潜能分化的鉴定结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 三、Cacnb3 等钙离子通道蛋白在成骨诱导中的表达 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 细胞株 |
| 3.1.2 仪器设备 |
| 3.1.3 实验试剂 |
| 3.1.4 实验方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 Cacnb3 基因在细胞成骨诱导过程中表达升高 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 四、敲降Cacnb3 对细胞成骨的影响 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 细胞株 |
| 4.1.2 实验试剂 |
| 4.1.3 实验方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 敲低Cacnb3 基因抑制了MC3T3-E1 细胞的成骨分化 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 五、成骨不全小鼠中Cancb3 表达的表达变化 |
| 5.1 材料和方法 |
| 5.1.1 实验动物 |
| 5.1.2 实验试剂 |
| 5.1.3 实验方法 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 基因型鉴定 |
| 5.2.2 成骨不全小鼠成骨表达降低 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 新型钙通道TRP家族参与骨内稳态的机制研究 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）观察同种异体骨块通过上置法植骨术在牙槽骨重建中的效果（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 第1章 前言 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 设备与材料 |
| 2.1.1 设备 |
| 2.1.2 材料 |
| 2.2 研究方法 |
| 2.2.1 确定研究对象 |
| 2.2.2 术前准备 |
| 2.2.3 手术方法 |
| 2.2.4 术后处理 |
| 2.2.5 数据测量及分析 |
| 第3章 结果 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 牙槽骨骨增量的效果 |
| 4.2 骨增量中同种异体骨移植物的特性 |
| 4.3 并发症的处理 |
| 4.4 CBCT联合Geomagic Stuio2013软件对牙槽骨的测量 |
| 4.5 有待进一步研究解决的问题 |
| 第5章 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 病例报告 |
（5）同种异体牙骨粉在大鼠拔牙模型上免疫反应的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验主要仪器 |
| 1.3 实验药品试剂 |
| 1.4 手术器械 |
| 1.5 软件分析 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 手术 |
| 2.2 制作牙骨粉 |
| 2.3 植入牙骨粉、缝合 |
| 2.4 取材及固定 |
| 2.5 观察方法 |
| 3.统计学分析 |
| 结果 |
| 1.大体观察 |
| 2.流式细胞仪T淋巴细胞亚群分析 |
| 3.组织学观察 |
| 讨论 |
| 1.动物模型建立 |
| 2.同种异体牙骨粉抗原成分及降低抗原的方法 |
| 2.1 牙体组织抗原组成 |
| 2.2 主要组织相容性复合体 |
| 2.3 移植材料降低抗原的方法 |
| 3.异体移植物对T淋巴细胞亚群的影响 |
| 4.同种异体牙骨粉的成骨特性 |
| 5.移植材料经过脱矿后的优越性 |
| 6.实验不足之处 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（6）应用个性化钛合金修复体和同种异体下颌骨修复比格犬下颌骨缺损的比较研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 骨髓间充质干细胞的分离培养与鉴定 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 冷冻干燥同种异体下颌骨复合同种异体骨髓间充质干细胞修复犬下颌骨节段性缺损 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 3D打印钦合金生物相容性评价 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第四部分 3D打印网状钦合金支架修复犬下颌骨缺损 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第五部分 同种异体下颌骨和3D打印个性化钛合金修复体修复犬半侧下颌骨缺损的初步比较 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述一 3D打印钛及钛合金生物相容性研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 3D打印技术制备颌骨组织工程支架的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述三 3D打印钛及钛合金在颌骨缺损修复中的应用 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 个人简介 |
| 博士期间发表文章情况 |
| 博士期间参与科研课题 |
| 博士研究生期间参加的主要会议及大会发言情况 |
| 致谢 |
（7）生物型异种骨生物相容性细胞学及免疫学研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一章 生物型异种骨生物相容性细胞学研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 异种松质骨电镜扫描三维结构观察 |
| 2.2 成骨细胞形态观察和功能分析 |
| 2.3 成骨细胞增殖活性 |
| 2.4 成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)测定结果 |
| 2.5 流式细胞术检测成骨细胞周期 |
| 2.6 成骨细胞的迁移能力 |
| 2.7 细胞凋亡结果 |
| 2.8 急性溶血实验结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 超临界二氧化碳(CO_2)处理异种骨技术特点 |
| 3.2 异种骨生物相容性及成骨性 |
| 4 结论 |
| 第二章 生物型异种骨生物相容性免疫学研究 |
| 1 实验材料和方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 动物实验模型的建立 |
| 2 结果 |
| 2.1 动物的一般情况 |
| 2.2 大体标本观察 |
| 2.3 免疫学分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 异种骨移植免疫反应 |
| 3.2 CD4~+T淋巴细胞及CD8~+T淋巴细胞数目测定结果分析 |
| 3.3 CD4~+/IL-2~+T淋巴细胞及CD4~+/IL-4~+T淋巴细胞数目测定结果分析 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 博士研究生期间发表论文情况 |
（8）同种异体骨髓间充质干细胞复合同种异体冻干骨修复比格犬半侧下颌骨缺损的实验研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 技术路线 |
| 第一部分 同种异体骨髓间充质干细胞复合同种异体冻干骨修复比格犬半侧下颌骨缺损的实验研究 |
| 实验一 同种异体冻干骨的制备及检测 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验二 骨髓间充质干细胞与同种异体骨共培养的实验研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验三 比格犬半侧下颌骨缺损动物模型的建立 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验四 Y 染色体标记体的骨髓间充质干细胞复合同种异体冻干骨体内异位成骨的实验研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验五 同种异体骨髓间充质干细胞复合同种异体冻干骨修复比格犬半侧下颌骨缺损的实验研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第一部分小结 |
| 第二部分 同种异体冻干骨复合自体骨髓修复大段下颌骨缺损的临床研究 |
| 实验一 |
| 1 病例与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第二部分 小结 |
| 第三部分 数字化外科平台的构建及其在颌面缺损畸形中的临床应用研究 |
| 实验一 数字化医学平台的构建 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验二 数字化外科平台在颌面缺损畸形中的临床应用 |
| 1 病例与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第三部分 小结 |
| 全文总结 |
| 综述一：下颌骨缺损修复研究进展 |
| 综述二：同种异体下颌骨移植研究进展 |
| 综述三：组织工程及骨髓间充质干细胞在颌骨缺损修复中的研究进展 |
| 综述四：3D 打印技术在口腔颌面外科领域中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 博士期间发表文章情况 |
| 博士期间参与科研课题 |
| 专利 |
| 博士研究生期间参加的主要会议及大会发言情况 |
| 致谢 |
（9）骨形态发生蛋白在同种异体骨骨移植中研究进展（论文提纲范文）
| 1 BMP在同种异体骨移植自身成骨中的作用 |
| 2 BMP在同种异体骨移植骨诱导中的作用 |
| 2.1 BMP与多功能间充质干细胞 |
| 2.2 BMP和前成骨细胞系 |
| 3 BMP在同种异体骨移植骨传导中的作用 |
| 4 展望 |
（10）骨髓间充质干细胞复合异体骨修复松质骨缺损（论文提纲范文）
| 0 引言 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 实验动物数量分析 |
| 2.2 骨髓间充质干细胞复合异体骨移植后松质骨缺损兔一般形态 |
| 2.3 骨髓间充质干细胞复合异体骨移植后松质骨缺损兔X射线检查结果 |
| 2.4 骨髓间充质干细胞复合异体骨移植后松质骨缺损兔股骨髁生物力学指标变化 |
| 2.5 骨髓间充质干细胞复合异体骨移植后松质骨缺损兔骨缺损区形态 |
四、同种异体成骨细胞移植的免疫学研究（论文参考文献）
- [1]BoneCeramic和Bio-Oss骨粉对狗骨髓间充质干细胞体外成骨分化能力影响的比较研究[D]. 路佳佳. 安徽医科大学, 2021(01)
- [2]体外冲击波对兔同种异体骨异位再血管化与骨活性的影响[D]. 梁磊. 新乡医学院, 2019(06)
- [3]电压门控钙通道亚基Cacnb3调控小鼠脂肪间充质干细胞成骨分化的研究[D]. 伏玺. 天津医科大学, 2019(02)
- [4]观察同种异体骨块通过上置法植骨术在牙槽骨重建中的效果[D]. 李红. 南昌大学, 2019(01)
- [5]同种异体牙骨粉在大鼠拔牙模型上免疫反应的研究[D]. 修楠. 大连医科大学, 2019(04)
- [6]应用个性化钛合金修复体和同种异体下颌骨修复比格犬下颌骨缺损的比较研究[D]. 王宏. 中国人民解放军医学院, 2017(02)
- [7]生物型异种骨生物相容性细胞学及免疫学研究[D]. 张保亮. 南方医科大学, 2016(02)
- [8]同种异体骨髓间充质干细胞复合同种异体冻干骨修复比格犬半侧下颌骨缺损的实验研究[D]. 谭新颖. 中国人民解放军医学院, 2014(03)
- [9]骨形态发生蛋白在同种异体骨骨移植中研究进展[J]. 李龙腾,郭华,杨少龙,夏武宪,杜英. 河南外科学杂志, 2014(02)
- [10]骨髓间充质干细胞复合异体骨修复松质骨缺损[J]. 王峰,付志厚. 中国组织工程研究, 2013(27)