一、体外诱导骨髓基质干细胞向内皮细胞分化的实验研究(英文)（论文文献综述）
王璐[1]（2019）在《淫羊藿素调控人脐带间充质干细胞的凋亡及线粒体自噬的机理研究》文中进行了进一步梳理干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞,具有十分广阔的应用前景,已被广泛应用至多种疾病的临床研究中,但是临床上移植入体内的干细胞存活率低,限制了其推广应用。因此,亟需新的治疗策略改进干细胞抵御体内恶劣微环境的能力。天然药物独具优势,前期实验发现淫羊藿素（icaritin,ICT）预处理后的人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）治疗急性肝衰竭大鼠,死亡率进一步降低,肝脏病理、肝功能得到进一步改善,但是内在机理尚不清楚。预实验发现ICT可以增加体外培养的hUC-MSCs的细胞活力,调节多种细胞因子的分泌,并减少细胞的凋亡,电镜下可见ICT减少了自噬小体包裹的线粒体数量,因此,本研究将从细胞凋亡与线粒体自噬入手,探索淫羊藿素影响人脐带间充质干细胞的机制,为中药联合干细胞疗法提供理论依据。目的:本研究首先通过文献综述,为实验提供理论支持;随后在体外采用无血清培养部分模拟体内微循环障碍的环境,使用ICT干预hUC-MSCs,探索其是否具有抗凋亡作用,并深入研究是否通过HGF（肝细胞生长因子）/c-Met通路发挥作用;观察ICT能否干预hUC-MSCs的线粒体自噬过程;同时采用蛋白质谱,分析ICT预处理后的hUC-MSCs的差异表达蛋白,并进行GO分析、KEGG分析、蛋白互作分析等生物信息学分析,评估淫羊藿素参与的生物学过程。方法:人脐带间充质干细胞无血清培养72小时作为基本的造模方式,模拟微循环障碍的体内环境。不同浓度的ICT干预造模细胞,用MTS法测定其0D值,筛选最佳处理浓度。BrdU掺入试验检测Control组（正常培养组）、Serum free组（无血清培养组）、ICT组（淫羊藿素组）、HGF组（肝细胞生长因子组）的细胞增殖率。ELISA法检测ICT促进hUC-MSCs的HGF分泌情况。WB与qRT-PCR法检测ICT影响hUC-MSCs的c-Met受体表达情况。转染构建c-Met+MSCs,通过qRT-PCR和WB检验其转染效率。使用CCK8法筛选c-Met受体抑制剂克唑替尼（crizotinib）的最佳作用浓度。采用AnnexinV-FITC/PI凋亡检测,评估各组细胞凋亡率。qRT-PCR与WB检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-3、Bax的表达。MTS法检测不同浓度的自噬抑制剂3MA对造模细胞的影响。使用qRT-PCR、WB以及免疫荧光显微镜检测线粒体外膜蛋白tomm20、线粒体内膜蛋白timm23、线粒体基质蛋白细胞色素c氧化酶亚基II（MT-C02）、自噬相关蛋白LC3B的表达情况。透射电镜观察各组细胞的超微结构,重点观察其线粒体自噬水平。采用qRT-PCR筛选ICT干预hUC-MSCs线粒体自噬的相关通路。使用JC-1膜电位检测试剂盒检测膜电位情况。采用蛋白质谱进行各组细胞差异蛋白的生物信息学分析。结果:1.不同浓度的淫羊藿素处理无血清培养hUC-MSCs,各处理浓度均提高了其细胞活力,但是仅50ng/ml（0.1uM）、100ng/ml具有统计学意义（P<0.05）。选择50ng/ml为最佳处理浓度进行后续实验。BrdU检测显示较Control组,Serum free组增殖率下降（P<0.05）,而使用ICT或者HGF均提高了细胞增值率（P<0.05）。2.人脐带间充质干细胞本身可分泌HGF,也表达HGF的受体c-Met,而ICT能够促进其表达更高水平的HGF与c-Met受体（P<0.05）。构建c-Met+MSCs后,WB与qRT-PCR法证实了基因转染成功。根据细胞抑制率,筛选4 u M为克唑替尼（c-Met受体抑制剂）的最佳处理浓度。MSCs在无血清培养72h时凋亡率较高,c-Met+MSCs的细胞凋亡率显着降低（P<0.01）,克唑替尼处理后,细胞凋亡率显着增高（P<0.01）,提示HGF/c-Met通路对于MSCs具有抗凋亡作用。WB显示,对比MSCs组,c-Met+MSCs组Bcl-2的表达上调且Cleaved caspase-3、Bax表达下调（P<0.05）,克唑替尼则使Bcl-2蛋白水平降低,Cleaved caspase-3和Bax蛋白表达增加,qRT-PCR验证了上述结论。提示HGF/c-Met通路通过调控凋亡蛋白的表达发挥抗凋亡作用。3.MSCs在无血清培养72h时凋亡率较高,ICT或HGF处理后,MSCs凋亡率显着降低（P<0.05）。当使用c-Met受体抑制剂克唑替尼时,拮抗了 ICT的抗凋亡作用,差异有统计学意义（P<0.01）。这表明克唑替尼可以抑制ICT对MSCs的保护作用,ICT对MSCs的抗凋亡作用与HGF/c-Met通路相关。WB显示,ICT或HGF处理后的MSCs的Bcl-2表达上调且Cleaved caspase-3、Bax表达下调（P<0.05）,对比ICT组,加用克唑替尼后可使Bcl-2蛋白水平降低,使Cleaved caspase-3和Bax蛋白的表达增加,qRT-PCR验证了上述结论。提示ICT通过HGF/c-Met通路调控凋亡蛋白的表达发挥抗凋亡作用。4.低浓度的自噬抑制剂3-MA对造模细胞的活性具有促进作用（P<0.05）,而高浓度的自噬抑制剂3-MA抑制了细胞活性（P<0.01）。提示无血清培养条件下,适度的抑制细胞自噬有利于细胞的存活,而过度的抑制细胞自噬则会降低细胞活力,不利于细胞存活。5.与Control组比较,Serum free组MSCs的线粒体外膜蛋白tomm20、线粒体内膜蛋白timm23、线粒体基质蛋白细胞色素c氧化酶亚基Ⅱ（MT-C02）均会减少,自噬蛋白LC3Ⅰ和LC3Ⅱ表达均增加,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比率提高,线粒体膜电位降低,提示线粒体自噬水平被上调,电镜可见细胞内“线粒体自噬体”（被自噬小体包裹的线粒体）显着增多,损伤线粒体增加,细胞形态不佳,证实了无血清培养增加了线粒体自噬;而ICT或者HGF干预后上述线粒体蛋白表达增加,自噬蛋白LC3Ⅰ和LC3Ⅱ表达均减少,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比率降低,线粒体膜电位升高,提示线粒体自噬水平被下调。电镜可见胞内“线粒体自噬体”减少,损伤线粒体减少,细胞形态得到一定的改善,证实了ICT和HGF均减少了线粒体自噬。6.采用qRT-PCR进行Pink1/Parkin通路,FUNDC1通路以及Bnip3/Nix通路的筛选,结果如下:Pink1、Bnip3的mRNA与前述线粒体自噬趋势相符,Nix、FUNDC1的mRNA呈现出相矛盾的趋势。7.蛋白质谱分析:通过GO分析,发现Control组与Serum free组的差异蛋白,以及ICT组与Serum-free组之间,HGF组与Serum free组之间的差异蛋白,均参与细胞凋亡、自噬、线粒体自噬相关的生物过程（P<0.05）。对ICT组与Serum free组的差异蛋白进行分析,AKT1位于蛋白互作中心节点位置,KEGG分析PI3K-AKT通路具有统计学意义,可作为研究的重点通路。对于HGF组与Serum free组之间的差异蛋白进行分析,筛选出NF-κ B通路作为研究重点通路。结论:1.淫羊藿素能够通过HGF/c-Met通路降低无血清培养的人脐带间充质干细胞的凋亡率,与调节Cleaved Caspase-3、Bax及Bcl-2蛋白表达水平有关。2.淫羊藿素或肝细胞生长因子均可降低无血清培养的人脐带间充质干细胞的线粒体自噬水平,减少损伤线粒体数目,改善细胞形态,增加线粒体蛋白tomm20、timm23、MTC02的表达,提高线粒体膜电位。3.蛋白质谱分析发现淫羊藿素或肝细胞生长因子介导的差异蛋白参与细胞凋亡、自噬、线粒体自噬相关的生物过程,对于ICT,PI3K-AKT通路可作为研究重点通路,对于HGF,NF-κ B通路可作为研究重点。
潘政军[2]（2019）在《Bcl-xL基因修饰人脐带血干细胞移植修复兔关节软骨损伤的实验研究》文中研究表明研究目的:探讨抑制细胞调亡的B细胞淋巴瘤/白血病-xl基因（Bcl-xL）对人脐带血干细胞定向诱导分化的影响,观察Bcl-xL基因修饰的人脐带血干细胞定向诱导分化以后修复兔关节软骨损伤的疗效。研究内容:（1）人脐带血干细胞的获取,分离培养、定向诱导分化成软骨细胞;（2）慢病毒编码的抑制细胞凋亡基因Bcl-xL转染人脐带血干细胞;（3）检测Bcl-xL基因过表达对干细胞凋亡的影响;（4）检测Bcl-xL基因过表达对干细胞分泌II型胶原蛋白、半胱氨酸蛋白酶-3和基质金属蛋白酶3等蛋白的影响;（5）制造兔膝关节软骨损伤模型;（6）海藻酸钠盐支架包被Bcl-xL基因修饰的人脐带血干细胞,植入并修复兔软骨损伤;（7）检测植入的人脐带血干细胞是否能在异种动物体内存活;（8）HE、MASSON和改良蕃红O-固绿等染色方法观察软骨缺损的修复;（9）免疫组化、实时PCR、WB等方法检测Bcl-xL基因的表达对动物体内软骨细胞分泌II型胶原、半胱氨酸蛋白酶-3以及基质金属蛋白酶3等蛋白影响。材料与方法:（1）在正常分娩过程中获得人脐带血,体外分离获取干细胞,贴壁培养。取P2代细胞用TGF-β1因子联合使用胰岛素样生长因-1和地塞米松诱导干细胞向软骨细胞方向分化,培养至细胞爬满玻片时,用甲苯胺蓝染色和免疫组化染色方法鉴定诱导分化的效果,并与对照组比较。（2）用编码Bcl-xL的慢病毒对人脐带血干细胞进行修饰,取第3代人脐带血干细胞接种于6孔板,当细胞融合达到5070%时,用编码Bcl-xL基因的慢病毒载体转染人脐带血干细胞。实验分四组进行,分别为对照组、诱导组、诱导+Bcl-xL慢病毒转染组、诱导+慢病毒空载组。对照组只分离培养干细胞,不加任何诱导因子;诱导组加入TGF-β1等诱导因子;诱导+Bcl-xL慢病毒转染组是在诱导组的基础上再加入编码Bcl-xL基因的慢病毒;空载组是在诱导组的基础上只加入未编码Bcl-xL基因的慢病毒。以上四组继续培养48h,在倒置显微镜下连续观察并记录细胞形态特征;甲苯胺蓝染色证实Bcl-xL基因转染后的干细胞仍具有软骨细胞的特征;通过流式细胞仪鉴定软骨细胞特征性的表面抗原如:CD90和CD105的表达。通过流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况,评价Bcl-xL基因对干细胞的凋亡的影响。实时PCR检测Bcl-xL基因在mRNA水平的表达;同时以β-actin为内参;Western blotting（WB）印迹法检测Bcl-xL基因在蛋白水平的表达;实时PCR及WB等方法检测Bcl-xL基因表达及其对II型胶原蛋白、半胱氨酸蛋白酶-3、基质金属蛋白酶3等蛋白表达的影响;SPSS17.0软件统计学分析比较各组间mRNA和蛋白水平表达的差异。（3）制备海藻酸钠支架,加入人脐带血干细胞形成细胞-支架复合物。将1.2%的海藻酸钠溶液滴入102m M氯化钙溶液在模具中凝固形成无细胞的海藻酸钠支架;将人脐带血干细胞加入1.2%的海藻酸钠溶液制成1×106/ml的单细胞悬液,滴入102m M氯化钙溶液在模具中凝固形成含人脐带血干细胞的海藻酸钠支架复合物。（4）制造兔软骨损伤模型,30只三个月大的日本大耳兔,分为5组,每组12只膝关节。麻醉后备皮,双侧后腿膝关节内侧切口进入膝关节,在股骨髁关节面用电钻造成一个直径4mm,深度约3mm柱状缺损,穿透软骨下骨,造成全层关节软骨损伤。按照5种不同的方式修复软骨缺损:假手术组（对照组）:只进行假手术,软骨无损伤;模型组:进行软骨损伤造模而未予其它治疗干预措施,然后直接缝合;空载体治疗组:慢病毒空载体转染人脐带血干细胞,海藻酸钠包被后植入软骨损伤缺损区域;干细胞治疗组:未经慢病毒转染的人脐带血干细胞,海藻酸钠包被后植入软骨损伤缺损区域。Bcl-xL基因修饰治疗组:Bcl-xL基因修饰慢病毒转染人脐带血干细胞,海藻酸钠包被后植入软骨损伤缺损区域。饲养8周后全部动物处死,获取膝关节标本。采用抗人细胞核特异性抗体鉴定植入软骨缺损处的干细胞在正常免疫功能的兔体内是否能存活;观察Bcl-xL基因修饰的人脐带血干细胞移植治疗关节软骨损伤的效果,用HE、MASSON、改良番红O-固绿等染色方法观察关节软骨损伤的修复效果,用免疫组化、实时PCR及WB等方法检测动物体内Bcl-xL基因的表达及其对II型胶原蛋白、半胱氨酸蛋白酶-3以及基质金属蛋白酶3等蛋白表达的影响;用SPSS 17.0软件统计学分析比较各组间mRNA和蛋白水平表达的差异。结果:1、人脐带血中可成功分离出具有多向分化潜能的干细胞,并可体外培养、定向诱导分化软骨细胞;2、用编码Bcl-xL的慢病毒对人脐带血干细胞进行修饰,干细胞增殖分化后仍具有软骨细胞特征。干细胞内的Bcl-xL基因在mRNA和蛋白水平的表达均上调;Bcl-xL基因可抑制干细胞的调亡,Bcl-xL基因可促进软骨细胞II型胶原蛋白在mRNA和蛋白水平的表达,显着抑制半胱氨酸蛋白酶-3以及基质金属蛋白酶3的表达,组间分析具有统计学意义,P<0.05。3、海藻酸钠盐支架-干细胞复合体植入动物体内,检测到干细胞存活;病理染色显示,各组软骨损伤均有修复,3种染色方式均显示:Bcl-xL基因修饰的干细胞组软骨结构修复最满意,而模型组的修复相对最不满意;免疫组化染色、实时PCR和WB检测结果基本一致:软骨损伤促进了II型胶原纤维在mRNA和蛋白水平的表达,而Bcl-xL基因修饰进一步增加了II型胶原纤维的表达;对于半胱氨酸蛋白酶-3以及基质金属蛋白酶3的检测结果显示:与假手术组比较,模型组的半胱氨酸蛋白酶-3和基质金属蛋白酶3表达均明显上调（P<0.05）,而Bcl-xl基因修饰组人脐带血干细胞相对模型组明显下调。组间分析差异显着（P<0.05）。此外,与正常人脐带血干细胞相比,Bcl-xL修饰的干细胞可进一步降低软骨损伤诱导的半胱氨酸蛋白酶-3以及基质金属蛋白酶3的表达,提高II型胶原蛋白的表达。结论:1、人脐带血干细胞可定向诱导分化成软骨细胞,Bcl-xL基因修饰可降低干细胞凋亡。2、移植人脐带血干细胞有利于修复软骨损伤,而Bcl-xL修饰则能提高人脐带血干细胞移植修复软骨损伤的疗效。
李响[3]（2019）在《SDF-1/CXCR4轴在介导人子宫内膜再生细胞抑制实验性结肠炎的作用机制研究》文中认为背景:炎症性肠病（Inflammatory Bowel Disease,IBD）主要包含溃疡性结肠炎（Ulcerative Colitis,UC）和克罗恩病（Crohn’s Disease,CD）这两种疾病。UC是一种慢性致残性炎症过程,主要损伤回肠、结肠和直肠。近年来,该病的发病率和流行率迅速上升。然而到目前为止,UC的发病机制仍然尚未明确。该病的治疗方法较多,治疗后虽然可有一定的缓解,但由UC本身或由各种治疗方式所引起的副作用仍给患者带来较大的痛苦。间充质干细胞（Mesenchymal Stromal Cell,MSC）疗法为该病的研究带来了曙光,然而其有创的获取方式和有限的增殖能力限制了它们的应用。因此,寻找一种既具备MSC的良好疗效,又能规避其不足的新型细胞来源成为当前研究的重点。子宫内膜再生细胞（Endometrial regenerative cell,ERC）是一种新型的间充质样基质细胞,具有无创获得、增殖率高、低免疫原性、可广泛扩增等特点,前期多项实验研究中ERC的治疗效果已被证实,其在抑制小鼠结肠炎的发展方面也取得可喜进展,但是,ERC治疗结肠炎的机制尚需进一步的研究,并且有必要继续探索来提高ERC疗效及规范性应用。研究发现,ERC具有分泌趋化因子基质细胞衍生因子-1（Stromal cell derived factor-1,SDF-1）并表达趋化因子受体4（C-X-C chemokine receptor type4,CXCR4）的能力。SDF-1和CXCR4相互作用形成SDF-1/CXCR4生物轴,该轴在干/基质细胞迁移中起趋化作用。由于人和小鼠的SDF-1在基因和蛋白质水平上显示出独特的同源性,使小鼠模型成为探索SDF-1在各种疾病中的作用的适合研究模型。本课题聚焦SDF-1/CXCR4生物轴在ERC治疗实验性结肠炎中具体发挥的作用和机制进行进一步的研究。目的:证明SDF-1/CXCR4轴对ERC的迁移作用,不同浓度的SDF-1对ERC表面CXCR4表达的影响;探讨高表达CXCR4的ERC对小鼠免疫细胞分化的影响;以及探索ERC对实验性结肠炎的治疗效果是否可以通过SDF-1/CXCR4轴来增强。方法:本研究分三个部分。第一部分为体外实验,分离、培养ERC,并鉴定其表型。利用划痕实验检测SDF-1/CXCR4轴在ERC创伤愈合中发挥的作用。第二部分,利用流式细胞术检测在不同浓度SDF-1的培养下,ERC表面CXCR4的表达情况,并确定其最适浓度。将SDF-1或AMD3100预处理或不处理的ERC和BALB/c小鼠的脾细胞在体外进行共培养,通过流式细胞术检测在不同刺激因子的刺激下,耐受性树突状细胞（tolerogenic dendritic cell,Tol-DC）、M2型巨噬细胞（macrophage type 2,M2）、调节性T细胞（regulatory T cell,Treg）的增殖情况。第三部分为体内实验,利用葡聚糖硫酸钠建立结肠炎小鼠模型,探究SDF-1预处理后表面高表达CXCR4的ERC对小鼠实验性结肠炎的治疗效果。结果:第一部分,自月经血中成功分离出并培养ERC,表型鉴定显示CD90和CD105在其表面表达,浓度为50ng/ml的SDF-1与其他浓度的SDF-1相比,显着增强了ERC的创伤愈合能力。第二部分,浓度为50ng/ml的SDF-1与ERC共培养可诱导ERC表面CXCR4的表达增加,可用于后续实验。经SDF-1预处理后高表达CXCR4的ERC具有诱导小鼠脾细胞向具有免疫调节功能的M2、TolDC、Treg细胞分化的能力。第三部分,成功建立小鼠实验性结肠炎模型,在ERC缓解疾病症状的基础上,经SDF-1预处理后高表达CXCR4的ERC可以进一步缓解结肠炎小鼠的疾病活动指数变化、减弱小鼠的血便等症状,小鼠结肠组织病理学示炎症细胞浸润明显减少,脾细胞中免疫耐受细胞如Tol-DCs、M2、Th2、Treg细胞的比例增加。肠道匀浆中抗炎因子（IL-4,IL-10）的产生增加,促炎因子（IL-6,TNF-α）的产生减少。此外,发现用CM-Dil标记的SDF-1预处理的ERC植入受损的结肠的能力高于单纯应用ERC,并且,当SDF-1/CXCR4轴被AMD3100阻滞后治疗效果均显着减弱。结论:本研究结果表明,SDF-1有效促进了ERC表面CXCR4的表达增加。SDF-1/CXCR4生物轴的趋化作用能够促进ERC迁移到DSS诱导的实验性结肠炎小鼠模型中受损结肠的组织中。且当SDF-1/CXCR4生物轴被AMD3100阻滞后ERC的治疗效果均显着减弱。总之,本研究旨在探讨SDF-1预处理ERC对结肠炎模型治疗的影响,这对于SDF-1预处理的ERC在未来临床应用中的潜能具有重要意义。
刘洋[4]（2019）在《Wnt-11联合1，25-Vitamin-D3促进大鼠骨髓间充质干细胞向心肌细胞方向分化的研究》文中进行了进一步梳理急性心肌梗死（acute myocardial infarction,AMI）等心血管疾病（cardiovascular disease,CVD）的发生严重威胁着中老年人的身体健康,近些年逐渐呈现出年轻化的趋势,而且,与AMI相关的并发症极大地降低了人们的生活质量。尽管已有研究显示,人体的心肌细胞在某种程度上存在着一定的分裂增殖能力,但AMI发生后每年仅1%的更新比率很难弥补已受损心肌细胞的数目,更不能有效改善心功能。目前临床上治疗心肌梗死的主要方法,如药物治疗、溶栓治疗、介入治疗及外科手术治疗等,皆旨在挽救非梗死区域的心肌细胞,而缺乏针对梗死心肌再造和再生的根本性治疗办法。基于此种现状,有学者提出可以通过移植外源性细胞到损伤的心肌中,用足量的、具有收缩功能的细胞恢复和改善病变区域心肌的功能。当前,干细胞的研究已成为自然科学中最为引人注目的领域,有多种细胞,如胚胎癌细胞系（P19）、胚胎干细胞、脂肪干细胞、骨髓基质干细胞、骨髓间充质干细胞等陆续被用于进行诱导分化进而移植治疗心肌梗死的研究。来源于自体的骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）能够在适宜的体外培养环境中大量增殖,显示出较强的分化可塑性,并产生相应细胞标志物,已成为组织工程领域理想的种子细胞。当前研究证实,细胞因子Wnt-11和化学药物1,25-Vitamin-D3对于心脏发育和心肌细胞的分化均具有重要作用,且二者都是通过抑制经典Wnt信号通路而发挥作用,1,25-Vitamin-D3还能促进Wnt-11的表达。基于此,本实验应用二者联合及单独诱导BMSCs定向分化为心肌细胞,从形态学和分子生物学两个层面探讨Wnt-11及1,25-Vitamin-D3对其增殖与诱导分化能力的影响,筛选出诱导分化的最佳方案,提高心肌细胞分化率,以期为缺血性心脏病的细胞移植治疗提供理论基础。本实验采用全骨髓贴壁法结合密度梯度离心法分离培养SD大鼠BMSCs,应用Wnt-11联合1,25-Vitamin-D3及二者单独对第2代BMSCs进行定向诱导,倒置相差显微镜下动态观察细胞生长状况。镜下观察,原代细胞培养72h后,大部分细胞呈短梭形;培养1w后,细胞呈现出多样化的形态;诱导4w的BMSCs,相邻细胞间联系紧密,排列具有明显的方向性。运用流式细胞仪对BMSCs进行鉴定。流式细胞仪对BMSCs表面抗原鉴定的结果显示,CD29、CD45、CD90的阳性表达率分别为97.4%、3.3%和91.4%。应用免疫细胞化学、免疫荧光细胞化学及蛋白免疫印迹（Western blot）技术检测诱导后4w的BMSCs中原肌球蛋白（tropomyosin,TPM）、间隙连接蛋白43（connexin 43,Cx43）、心肌肌钙蛋白T（cardiac troponin T,cTnT）的表达情况。实验结果显示,各组BMSCs均可见TPM、Cx43及cTnT的阳性表达,其中联合诱导组的表达均最高,而未诱导组细胞呈弱阳性或阴性表达,差异具有统计学意义（P<0.05）。运用透射电镜（TEM）观察分化细胞与心肌细胞类似的超微结构。TEM观察,细胞诱导培养至4w,胞质内可见较多平行排列的肌丝及线粒体、核糖体、粗面内质网等细胞器。在诱导后1w、2w和4w这3个时间点,以实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测细胞心肌早期转录因子GATA-4、Nkx2.5的表达。RT-qPCR检测结果显示:GATA-4及Nkx2.5基因于诱导后1w表达较强,2w表达减弱,4w表达增强;就基因表达而言,三个诱导组相比较,联合诱导组明显优于单独诱导组（P<0.05）,未诱导组细胞的基因表达量为1。通过本实验,可以说明:1.采用全骨髓贴壁法结合密度梯度离心法分离培养的SD大鼠BMSCs可以被诱导分化,以作为组织工程领域的种子细胞。2.体外培养的大鼠BMSCs经Wnt-11、1,25-Vitamin-D3单独及联合诱导后可定向分化为心肌细胞。3.诱导大鼠BMSCs向心肌细胞分化过程中,使用Wnt-11与1,25-Vitamin-D3联合诱导的效果明显优于二者单独诱导。
李汉骏[5]（2017）在《Foxp1在骨髓间充质干细胞命运决定和衰老过程中的作用研究》文中研究指明骨质疏松是一种在中老年群体中常见的骨骼疾病,患者体内骨质形成与骨质吸收的稳态被打破,骨质吸收快于骨质形成,导致骨量减少、骨骼疼痛、骨折风险加剧。骨质疏松很大程度上与衰老有关,在中国50岁以上中老年人群体中,约20%的人患有骨质疏松;40岁以上人群和60岁以上人群的比较说明:60岁以上老年人中骨质疏松症的发病率明显增高。骨质疏松患者成骨能力明显下降,骨髓常伴有严重的脂肪化,这些表型的出现都与骨髓间充质干细胞的衰老息息相关。骨髓间充质干细胞能够分化成包括成骨细胞、脂肪细胞等在内的骨组织细胞,在骨髓间充质干细胞衰老的过程中,它的分化能力发生改变、更倾向于分化成脂肪细胞而非成骨细胞,自我更新能力逐渐下降,细胞进入静息状态。然而这些衰老现象背后的具体调控机制仍然未得到阐明。在本课题中,我们研究了转录因子Foxp1在骨髓间充质干细胞分化和衰老过程中的功能。我们发现,随着年龄的增长,Foxp1在骨髓间充质干细胞中表达量逐渐降低;与之相反的是,干细胞衰老标志物p16Ink4a表达量逐渐上调。本课题利用Prx1-Cre在骨髓间充质干细胞和前体细胞中敲除了Foxp1,我们发现Prx1-Cre;Foxp1fl/fl小鼠在年轻时就表现出明显的老年性骨质疏松表型——骨量下降、骨髓内脂肪细胞增多,且随着年龄增长表型愈发严重。Prx1-Cre;Foxp1fl/fl敲除鼠的骨髓间充质干细胞增殖速度减慢,自我更新能力下降,更青睐于向脂肪细胞分化而非向成骨细胞分化,出现一系列明显的早衰表型。本课题还使用了Nestin-Cre在Nestin+的骨髓间充质干细胞中敲除Foxp1,我们发现Nestin-Cre;Foxp1fl/fl小鼠骨量也明显下降,骨髓内脂肪细胞增多,骨髓间充质干细胞成脂肪分化增强而成骨分化能力减弱。在原代骨髓间充质干细胞和C3H10T1/2间充质细胞系中过表达Foxp1会抑制它向脂肪细胞分化,促进它向成骨细胞分化。在分子机制层面,我们发现Foxp1能够直接与PPARγ启动子结合,阻遏PPARγ的转录,也能通过与C/EBPβ/δ结合,抑制它们对PPARγ的转录激活作用,从而抑制骨髓间充质干细胞向脂肪细胞分化;Foxp1能够阻遏RBPjk对下游基因的转录激活作用,从而抑制了Notch信号通路活性,促进间充质干细胞向成骨细胞分化。我们还发现,Foxp1可以结合在p16Ink4a的启动子上,直接抑制p16Ink4a的转录。Prx1-Cre;Foxp1fl/fl;p16-/-双敲小鼠可以在一定程度上弥补Prx1-Cre;Foxp1fl/fl小鼠骨量下降的表型。这些实验证明Foxp1在一定程度上通过调控p16Ink4a表达调控了MSC衰老。我们在老年人的骨髓间充质干细胞中过表达FOXP1可以提升它们的增殖能力,也能够提高它们的成骨分化能力,抑制它们成脂肪分化能力。综上所述,我们发现Foxp1以一种年龄和剂量依赖的方式调控了骨髓间充质干细胞的分化和衰老。随着年龄增长,Foxp1表达量逐渐降低,一方面通过调控PPARγ和Notch信号通路的活性,使骨髓间充质干细胞更倾向于向脂肪细胞分化,另一方面通过上调p16Ink4a的表达使骨髓间充质干细胞进入静息状态。这些发现加深了对骨髓间充质干细胞命运决定和衰老调控的认识,同时也为骨质疏松症等骨骼衰老性疾病的治疗提供了崭新思路。
车冠华,戴支凯[6]（2015）在《中药诱导骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞的研究进展》文中研究指明骨髓间充质干细胞是骨髓内的另一种干细胞,具有很强的增殖能力和可塑性,在体外能跨胚层分化,可定向分化为神经样细胞。与胚胎干细胞和神经干细胞相比,具有取材方便,回植后不发生免疫排斥,易被外源基因转染并能高效、稳定表达多种治疗性外源基因等多种优势,将为神经系统疾病的治疗提供崭新的思路,本文对近年来中药诱导骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化的研究进展作一综述。
王艳,王海萍,吕洋[7]（2014）在《中药制剂诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞的分化》文中研究说明背景:中药具有临床应用安全性高等特点,目前已有很多研究应用中药或单体成分体外诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化。目的:总结、分析中药诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的研究进展,并展望其应用前景。方法:应用计算机检索CNKI数据库中2001年1月至2013年1月关于中药诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞的文章,以"中药;骨髓间充质干细胞;心肌细胞"或"bone marrow mesenchymal stem cells,myocardial cells"为检索词进行检索,排除陈旧及重复实验文章,重点对36篇文献进行分析。结果与结论:经三七总皂苷、丹酚酸B、加味丹参饮、淫羊藿苷、黄芪甲苷等不同的中药诱导制剂诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化,诱导后细胞免疫组化和RT-PCR检测结果显示肌细胞纤维蛋白、心肌肌钙蛋白I和主要组织相容性复合体表达均呈阳性,阳性细胞呈梭形和成纤维细胞样形态,即表明有促进增殖分化的作用。结果显示中药诱导骨髓间充质干细胞定向分化为心肌细胞已成为国内外该领域的研究热点,为临床治疗心肌梗死等缺血性心脏病提供理论基础。
林砚铭[8]（2013）在《中药复方诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的实验研究》文中研究表明目的：本研究旨在通过补肾填精的中药复方（左归丸）诱导骨髓间充质干细胞分化,并通过免疫组化鉴定诱导分化后的细胞为神经元样细胞,从而为“肾藏精、生髓”的传统中医理论提供相应的实验依据。方法：实验一利用全骨髓贴壁法分离大鼠骨髓间充质干细胞,并在体外扩增、纯化,倒置显微镜下观察其形态,利用左归丸药液对分离后的细胞进行诱导分化,通过阿利新蓝染色、改良钙钴法碱性磷酸酶染色、神经元特异性烯醇化酶免疫组织化学染色以鉴定分化后的细胞是否为成骨细胞、软骨细胞、神经元样细胞。实验二利用全骨髓贴壁法分离大鼠骨髓间充质干细胞,利用左归丸拆药后的各组药液分别对获得的细胞进行诱导分化,并进行神经元特异性烯醇化酶免疫组织化学染色,计其阳性表达的细胞。结果：实验一显示,分离纯化后的细胞,经倒置显微镜观察其形态,再左归丸药液诱导分化后,经阿利新蓝染色、改良钙钴法磷酸酶染色、神经元特异性烯醇化酶免疫组织化学染色,证明获得的细胞向软骨细胞、成骨细胞、神经元样细胞进行了分化,获得的细胞的形态符合骨髓间充质干细胞的形态表现。实验二将获得的骨髓间充质干细胞,用左归丸拆药后的各组药液对其进行诱导分化,经NSE染色后计阳性表达细胞,结果显示撤出熟地NSE表达明显增高；撤除枸杞后阳性表达率下降最多,其次是山茱萸、山药、牛膝；撤出菟丝子不影响该酶的表达。结论：实验一：采用全骨髓贴壁法获得的细胞为大鼠骨髓间充质干细胞；中药复方左归丸对大鼠骨髓间充质干细胞有多向诱导分化作用。实验二：撤出熟地神经元烯醇化酶表达增高,提示熟地可能对BMSC向神经元样细胞方向分化有一定抑制作用（或调控作用）；枸杞对骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的诱导作用最强,其次是山茱萸、山药、牛膝：菟丝子对骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化无明显的促进作用。
高月彩,李蒙,李瑞玉,孙艳孚[9]（2013）在《补肾中药在干细胞培养与移植中的干预作用》文中进行了进一步梳理背景:干细胞移植的不断改进和对传统中医理论认识的不断深入,促进了补肾中药干预干细胞分化的研究。目的:探讨补肾中药在干细胞培养与移植中的干预作用。方法:收集干细胞移植治疗疾病过程加入不同类别单味或复方补肾中药起到的促进干细胞增殖分化、诱导分化的作用等相关研究,进行实验数据分析,应用血清药理学原理评估补肾中药在干细胞培养与移植中的干预作用。结果与结论:加强补肾中药与干细胞的基础研究,在现有新理论基础上,继续深化相关的基础理论研究,使补肾中药与干细胞研究有科学的理论指导,在干细胞增殖、分化及转分化机制研究的基础上,筛选能调节干细胞不同发育阶段的补肾中药。在此初步筛选的基础上,结合临床应用中已经取得的成果,才能有针对性地选定相关的单味或复方补肾中药,研究其对干细胞移植治疗重大疾病的干预作用。
庄乾伟,何悦[10]（2011）在《骨髓基质干细胞向内皮细胞诱导分化的方法及临床应用前景》文中研究说明骨髓基质干细胞是一种多潜能干细胞,能自我复制并能分化为多种细胞系,目前被广泛用于再生医学的研究。在体外,经过一定细胞因子和细胞外基质的诱导,可定向分化为血管内皮细胞;在体内,骨髓基质干细胞被移植到缺血区后可发生血管生成。故临床上骨髓基质干细胞可用于少血管或无血管区的血管构建和受损组织的修复,但也可引起血管再狭窄、肿瘤生长等不良后果。该文就骨髓基质干细胞向内皮细胞分化的诱导条件、分子机制、临床应用等进行综述。
二、体外诱导骨髓基质干细胞向内皮细胞分化的实验研究(英文)（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、体外诱导骨髓基质干细胞向内皮细胞分化的实验研究(英文)（论文提纲范文）
（1）淫羊藿素调控人脐带间充质干细胞的凋亡及线粒体自噬的机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 研究背景 |
| 一、补肾中药调控干细胞的相关研究 |
| 1. 淫羊藿对干细胞的调控 |
| 2. 其他补肾中药对干细胞的调控 |
| 二、HGF在干细胞领域的研究进展 |
| 1. HGF的概述 |
| 2. HGF对干细胞的影响 |
| 三、线粒体自噬的研究进展 |
| 1. 线粒体自噬的概述 |
| 2. 中药调控线粒体自噬 |
| 第二部分 淫羊藿素通过HGF/c-Met通路增强人脐带间充质干细胞抗凋亡能力的实验研究 |
| 一、实验材料 |
| 1. 实验细胞 |
| 2. 实验仪器 |
| 3. 实验试剂与耗材 |
| 4. 主要试剂的配制 |
| 二、实验方法 |
| 1. 细胞培养 |
| 2. MTS法测细胞活力 |
| 3. CCK8法测细胞活力 |
| 4. BrdU掺入试验测细胞增殖率 |
| 5. 流式细胞仪检测细胞凋亡 |
| 6. western blot(化学)方法检测蛋白表达 |
| 7. qRT-PCR检测mRNA表达水平 |
| 8. 质粒提取与细胞转染 |
| 9. ELISA法测蛋白表达 |
| 10. 统计学方法 |
| 三、实验结果 |
| 1. 淫羊藿素促进人脐带间充质干细胞的细胞活力与增殖活性 |
| 2. HGF/c-Met通路在人脐带间充质干细胞中具有抗凋亡作用 |
| 3. 淫羊藿素通过HGF/c-Met通路抑制人脐带间充质干细胞凋亡 |
| 四、讨论 |
| 第三部分 淫羊藿素调控人脐带间充质干细胞线粒体自噬的实验研究 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 1. MTS法测细胞活力 |
| 2. western blot(荧光)方法检测蛋白表达 |
| 3. qRT-PCR检测mRNA表达水平 |
| 4. MitoTracker与目标蛋白共标记进行免疫荧光显微镜检测 |
| 5. 线粒体膜电位检测(JC-1) |
| 6. 电镜检测 |
| 7. 统计学方法 |
| 三、实验结果 |
| 1. 自噬抑制剂3-MA对无血清培养人脐带间充质干细胞的影响 |
| 2. 淫羊藿素增加无血清培养人脐带间充质干细胞的线粒体蛋白 |
| 3. 淫羊藿素抑制无血清培养人脐带间充质干细胞的线粒体自噬 |
| 4. 淫羊藿素提高无血清培养人脐带间充质干细胞的线粒体膜电位 |
| 四、讨论 |
| 第四部分 淫羊藿素预处理人脐带间充质干细胞蛋白质组学分析 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 1. 蛋白浓度测定结果 |
| 2. 差异蛋白筛选结果 |
| 3. 生物信息学分析 |
| 四、讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 附件 |
（2）Bcl-xL基因修饰人脐带血干细胞移植修复兔关节软骨损伤的实验研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 人脐带干细胞定向诱导分化软骨细胞的实验研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料 |
| 3 方法 |
| 4 结果 |
| 5 讨论 |
| 6 结论 |
| 第二部分 过表达Bcl-x L基因慢病毒载体对人脐带血干细胞的调控机理研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分 海藻酸钠支架负载人脐带血干细胞复合物移植治疗兔关节软骨损伤 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在学期间发表的论文与成果 |
| 致谢 |
| 综述一 Bcl-x L 基因的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 干细胞定向诱导分化成软骨细胞的研究进展 |
| 参考文献 |
（3）SDF-1/CXCR4轴在介导人子宫内膜再生细胞抑制实验性结肠炎的作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、ERC的培养鉴定及不同浓度SDF-1对ERC迁移的调控 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 ERC的提取、培养和形态观察 |
| 1.1.2 ERC的表型鉴定 |
| 1.1.3 重组蛋白SDF-1 的制备 |
| 1.1.4 划痕实验 |
| 1.1.5 主要仪器耗材和实验试剂 |
| 1.1.6 统计学方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 ERC的形态 |
| 1.2.2 ERC的表型鉴定 |
| 1.2.3 SDF-1/CXCR4 生物轴在ERC迁移和促进创伤愈合中的作用 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 二、SDF-1 诱导ERC表达CXCR4及SDF-1 预处理ERC促进免疫细胞分化的体外研究 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 SDF-1与ERC体外细胞共培养实验 |
| 2.1.2 小鼠脾脏细胞悬液的制备 |
| 2.1.3 SDF-1和AMD3100 预处理的ERC细胞悬液的制备 |
| 2.1.4 体外细胞共培养实验 |
| 2.1.5 流式细胞技术 |
| 2.1.6 主要仪器耗材和实验试剂 |
| 2.1.7 统计学方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 SDF-1 诱导ERC表面CXCR4 表达的能力 |
| 2.2.2 经SDF-1 预处理后高表达CXCR4的ERC体外诱导Tol-DC(CD11c~+MHC II~+)的产生 |
| 2.2.3 经SDF-1 预处理后高表达CXCR4的ERC体外诱导M2(CD68~+CD206~+)的产生 |
| 2.2.4 经SDF-1 预处理后高表达CXCR4的ERC高表达CXCR4的ERC体外诱导Treg(CD4~+CD25+Foxp3~+)的产生 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 三、SDF-1/CXCR4 轴对ERC的影响及其在小鼠结肠炎中的作用 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 小鼠实验性结肠炎模型的建立 |
| 3.1.3 实验分组、治疗及取材 |
| 3.1.4 评估炎症严重程度 |
| 3.1.5 组织病理学 |
| 3.1.6 流式细胞术 |
| 3.1.7 酶联免疫吸附实验 |
| 3.1.8 体内示踪 |
| 3.1.9 主要仪器耗材和实验试剂 |
| 3.1.10 统计学方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 经SDF-1 预处理后高表达CXCR4的ERC缓解小鼠结肠炎体征 |
| 3.2.2 经SDF-1 预处理后高表达CXCR4的ERC缓解小鼠结肠炎的病理损伤 |
| 3.2.3 经SDF-1 预处理后高表达CXCR4的ERC增加实验性结肠炎小鼠脾脏中Tol-DC的百分比 |
| 3.2.4 经SDF-1 预处理后高表达CXCR4的ERC诱导实验性结肠炎小鼠脾脏中M2型巨噬细胞的增加 |
| 3.2.5 经SDF-1 预处理后高表达CXCR4的ERC提高实验性结肠炎小鼠脾脏中Th2和Treg的水平 |
| 3.2.6 经SDF-1 预处理后高表达CXCR4的ERC可调节受损结肠中抗炎因子和促炎因子的平衡 |
| 3.2.7 CM-Dil标记ERC |
| 3.2.8 经SDF-1 预处理后高表达CXCR4的ERC增强结肠炎小鼠的体内示踪 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述SDF-1/CXCR4 轴在炎症性肠病中的研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）Wnt-11联合1，25-Vitamin-D3促进大鼠骨髓间充质干细胞向心肌细胞方向分化的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 非经典Wnt通路中Wnt-11 对于干细胞分化发育的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（5）Foxp1在骨髓间充质干细胞命运决定和衰老过程中的作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 间充质干细胞 |
| 1.1.1 间充质干细胞的定义 |
| 1.1.2 间充质干细胞的鉴定原则和方法 |
| 1.1.2.1 克隆形成实验（CFU-F assay） |
| 1.1.2.2 分化能力检测 |
| 1.1.2.3 自我更新能力检测 |
| 1.1.3 间充质干细胞的标志物（marker） |
| 1.1.3.1 CD105 |
| 1.1.3.2 PαS |
| 1.1.3.3 Nestin |
| 1.1.3.4 Mx1-Cre |
| 1.1.3.5 Prx1-Cre |
| 1.1.3.6 Leptin Receptor |
| 1.1.3.7 Sox1 |
| 1.2 MSC成骨和成脂肪分化的信号通路和转录调控 |
| 1.2.1 信号通路 |
| 1.2.1.1 Wnt信号通路 |
| 1.2.1.2 Notch信号通路 |
| 1.2.1.3 BMP信号通路 |
| 1.2.2 转录因子 |
| 1.2.2.1 PPARγ |
| 1.2.2.2 C/EBP家族 |
| 1.2.2.3 RUNX2 |
| 1.2.2.4 MSX2 |
| 1.2.2.5 OSTERIX |
| 1.2.2.6 ATF4 |
| 1.2.2.7 TAZ |
| 1.2.2.8 Rb |
| 1.2.2.9 Maf |
| 1.3 间充质干细胞衰老 |
| 1.3.1 衰老的定义 |
| 1.3.2 MSC的衰老表型 |
| 1.3.3 衰老相关的分子机制与信号通路 |
| 1.3.3.1 p16和p53 |
| 1.3.3.2 表观遗传 |
| 1.3.3.3 ROS |
| 1.4 FOXP1的特性、表达谱与功能 |
| 1.4.1 FOX基因家族 |
| 1.4.2 FOXP基因亚家族 |
| 1.4.2.1 FOXP亚家族发现历史 |
| 1.4.2.2 FOXP亚家族的蛋白结构 |
| 1.4.2.3 FOXP家族的DNA结合位点 |
| 1.4.2.4 FOXP1的几种选择性剪接形式 |
| 1.4.3 Foxp1的表达谱与功能 |
| 1.4.3.1 Foxp1在胚胎干细胞中的表达和功能 |
| 1.4.3.2 Foxp1在心脏中的表达和功能 |
| 1.4.3.3 Foxp1在肺和呼吸道中的表达和功能 |
| 1.4.3.4 Foxp1在食管发育过程中的表达和功能 |
| 1.4.3.5 Foxp1在B细胞发育过程中的表达和功能 |
| 1.4.3.6 Foxp1在T细胞发育过程中的表达和功能 |
| 1.4.3.7 Foxp1在单核细胞发育过程中的表达和功能 |
| 1.4.3.8 Foxp1在毛囊干细胞和毛发发育过程中的表达和功能 |
| 1.4.3.9 Foxp1在神经系统中的表达和功能 |
| 1.4.3.10 Foxp1在胰岛细胞中的表达和功能 |
| 1.4.3.11 Foxp1在肝脏中的表达和功能 |
| 1.4.4 FOXP1与癌症的关系 |
| 1.4.4.1 FOXP1与弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL） |
| 1.4.4.2 FOXP1与黏膜相关淋巴组织（MALT）淋巴瘤 |
| 1.4.4.3 FOXP1与乳腺癌 |
| 1.4.4.4 FOXP1与子宫内膜癌 |
| 1.4.4.5 FOXP1与前列腺癌 |
| 1.4.4.6 FOXP1与肺癌 |
| 1.4.4.7 小结 |
| 1.5 本课题的研究内容、研究目标，以及拟解决的关键科学问题 |
| 1.5.1 研究内容 |
| 1.5.1.1 获得Foxp1基因敲除小鼠 |
| 1.5.1.2 分析Foxp1条件敲除小鼠的表型 |
| 1.5.1.3 运用细胞和分子生物学手段研究Foxp1的调控机制 |
| 1.5.2 研究目标 |
| 1.5.3 拟解决的关键科学问题 |
| 2 实验材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 无机试剂 |
| 2.1.2 有机试剂 |
| 2.1.3 细胞培养用试剂和试剂盒 |
| 2.1.4 酶 |
| 2.1.5 蛋白实验相关试剂 |
| 2.1.6 其他商品化试剂和试剂盒 |
| 2.1.7 重要耗材 |
| 2.1.8 质粒 |
| 2.1.9 引物 |
| 2.1.10 小鼠 |
| 2.1.11 抗体 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 DNA相关实验技术 |
| 2.2.2 RNA相关实验技术 |
| 2.2.3 蛋白质相关实验技术 |
| 2.2.4 细胞相关实验技术 |
| 2.2.5 组织学相关实验技术 |
| 2.2.6 流式细胞术 |
| 2.2.7 染色质免疫共沉淀 |
| 2.2.8 统计方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 Foxp1在骨髓间充质干细胞中的表达谱系 |
| 3.2 Foxp1调控骨髓间充质干细胞的分化 |
| 3.2.1 Prx1-Cre; Foxp1~(fl/fl)敲除小鼠出现骨质疏松、骨髓脂肪化表型 |
| 3.2.2 Prx1-Cre; Foxp1~(fl/fl)小鼠骨髓间充质干细胞成脂肪能力增强、成骨能力减弱 |
| 3.2.3 Nestin-Cre; Foxp1~(fl/fl)小鼠成骨不全、骨髓脂肪细胞增多 |
| 3.2.4 Nestin-Cre; Foxp1~(fl/fl)小鼠骨髓间充质干细胞成脂能力增强、成骨能力减弱 |
| 3.2.5 在软骨细胞和成骨细胞中敲除Foxp1并未影响小鼠出生后骨质重塑 |
| 3.2.6 Foxp1缺失不影响骨髓间充质干细胞成软骨分化 |
| 3.2.7 过表达Foxp1抑制C3H10T1/2 细胞和原代骨髓间充质干细胞成脂肪分化、促进成骨分化 |
| 3.2.8 Foxp1调控MSC成脂分化和成骨分化的分子机制 |
| 3.2.8.1 Foxp1抑制MSC成脂肪分化的分子机制 |
| 3.2.8.2 Foxp1促进MSC成骨分化的分子机制 |
| 3.3 Foxp1调控MSC的衰老 |
| 3.3.1 敲除Foxp1后MSC呈现出早衰表型 |
| 3.3.2 Foxp1可能通过抑制p16~(Ink4a)的转录从而调控衰老 |
| 3.3.3 过表达Foxp1可以延缓人类骨髓间充质干细胞的衰老 |
| 4 讨论 |
| 4.1 Foxp1随着骨髓间充质干细胞衰老表达量降低 |
| 4.2 Foxp1通过抑制PPARγ 转录抑制成脂 |
| 4.3 Foxp1通过抑制Notch信号通路活性促进成骨 |
| 4.4 Foxp1通过调控p16~(Ink4a)调控MSC衰老 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
（6）中药诱导骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞的研究进展（论文提纲范文）
| 1 BMSCs移植治疗神经系统疾病 |
| 2 中药诱导BMSCs分化为神经样细胞 |
| 2.1 丹参 |
| 2.2 黄芪类 |
| 2.3 多糖类 |
| 2.4 苷类 |
| 2.5 银杏内酯 |
| 2.6 鹿茸多肽 |
| 2.7 川芎嗪 |
| 2.8 白藜芦醇 |
| 3 结语 |
（7）中药制剂诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞的分化（论文提纲范文）
| 0 引言Introduction |
| 1资料和方法Data and methods |
| 2 结果Results |
| 3 小结Conclusion |
（8）中药复方诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 研究的目的和意义 |
| 1. 研究的目的和意义 |
| 1.1. 目的 |
| 1.2. 研究的意义和临床应用价值 |
| 1.3. 目前研究现状 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 大鼠BMSC的分离及左归丸对其诱导多向分化的实验研究 |
| 1. 主要实验设备和实验材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 实验二 中药复方诱导大鼠BMSC向神经元样细胞分化的实验研究 |
| 1. 主要实验设备和实验材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 第三部分 问题与展望 |
| 1. 传统中医“肾”生理功能的与干细胞研究 |
| 2. 实验中存在的问题 |
| 3. 展望 |
| 附图 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 在校期间公开发表的学术论文、专着及科研成果 |
| 致谢 |
（9）补肾中药在干细胞培养与移植中的干预作用（论文提纲范文）
| 0 引言 |
| 1 资料和方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 补肾中药对干细胞增殖分化的影响 |
| 2.1.1 补肾中药对神经干细胞增殖分化的影响 |
| 2.1.2 补肾中药对骨髓间充质干细胞增殖分化的影响 |
| 2.2 补肾中药对干细胞的定向诱导 |
| 2.2.1 补肾中药诱导干细胞向成骨细胞分化的相关作用 |
| 2.2.2 补肾中药诱导干细胞向肝细胞分化的作用相关研究 |
| 2.2.3 补肾中药诱导干细胞向神经元样干细胞的分化 |
| 2.2.4 补肾中药诱导干细胞向心肌样细胞的分化 |
| 2.2.5 补肾中药对干细胞移植治疗后不良反应的防治 |
| 3 小结 |
（10）骨髓基质干细胞向内皮细胞诱导分化的方法及临床应用前景（论文提纲范文）
| 1 BMSCs的分离纯化及生物学性质 |
| 1.1 BMSCs的分离纯化 |
| 1.2 BMSCs的生物学性质 |
| 2 BMSCs向内皮细胞 (ECs) 分化的调节因子 |
| 2.1 血管内皮细胞生长因子 (vascular endothelial growth factor, VEGF) |
| 2.2 低氧诱导因子 (hypoxia-inducible factor, HIF) |
| 2.3 碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF) 和表皮生长因子 (epidermal growth factor, EGF) |
| 2.4 肿瘤坏死因子样弱凋亡因子 (tumor necrosis factor like weak inducer of apoptosis, TWEAK) |
| 2.5 纤维连接蛋白 (fibronectin, FN) 和Ⅰ型胶原 (Ⅰtype collagen, CoⅠ) |
| 2.6 一氧化氮 (NO) 样药物西地那非 (sildenafil) |
| 2.7 挥发性麻醉药七氟醚 (sevoflurane) |
| 3 BMSCs向ECs分化的常用方法 |
| 3.1 体外诱导分化 |
| 3.2 体内诱导分化 |
| 4 临床治疗应用前景 |
| 4.1 改善缺血状况 |
| 4.2 改善动脉再狭窄 |
| 4.3 血管化人工骨 |
| 5 潜在的致病作用 |
| 5.1 肿瘤血管新生 |
| 5.2 内膜增生肥厚 |
四、体外诱导骨髓基质干细胞向内皮细胞分化的实验研究(英文)（论文参考文献）
- [1]淫羊藿素调控人脐带间充质干细胞的凋亡及线粒体自噬的机理研究[D]. 王璐. 广州中医药大学, 2019(08)
- [2]Bcl-xL基因修饰人脐带血干细胞移植修复兔关节软骨损伤的实验研究[D]. 潘政军. 安徽医科大学, 2019(07)
- [3]SDF-1/CXCR4轴在介导人子宫内膜再生细胞抑制实验性结肠炎的作用机制研究[D]. 李响. 天津医科大学, 2019(02)
- [4]Wnt-11联合1，25-Vitamin-D3促进大鼠骨髓间充质干细胞向心肌细胞方向分化的研究[D]. 刘洋. 河北北方学院, 2019(01)
- [5]Foxp1在骨髓间充质干细胞命运决定和衰老过程中的作用研究[D]. 李汉骏. 上海交通大学, 2017(06)
- [6]中药诱导骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞的研究进展[J]. 车冠华,戴支凯. 当代医学, 2015(08)
- [7]中药制剂诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞的分化[J]. 王艳,王海萍,吕洋. 中国组织工程研究, 2014(01)
- [8]中药复方诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的实验研究[D]. 林砚铭. 成都中医药大学, 2013(06)
- [9]补肾中药在干细胞培养与移植中的干预作用[J]. 高月彩,李蒙,李瑞玉,孙艳孚. 中国组织工程研究, 2013(14)
- [10]骨髓基质干细胞向内皮细胞诱导分化的方法及临床应用前景[J]. 庄乾伟,何悦. 中国口腔颌面外科杂志, 2011(03)