一、活性氧和活性氮在急性肺损伤中的研究进展（论文文献综述）
郑璐[1]（2021）在《扶芳藤提取物及主要活性成分甜醇对LPS诱导小鼠急性肺损伤的作用及机制研究》文中提出研究背景:本课题组前期对扶芳藤进行粗提并对其抗炎能力进行初步筛选,结果显示,在体外LPS诱导的RAW264.7细胞实验中,粗提的扶芳藤能够抑制各种炎性因子,具有明显的抗炎活性;在体内二甲苯诱导的小鼠耳廓肿胀实验中,粗提的扶芳藤对小鼠耳肿胀也有一定的抑制作用,表明扶芳藤粗提物体内体外有一定的抗炎作用。本文在前期实验结论的基础上进一步研究扶芳藤粗提物对抗LPS诱导的急性肺损伤活性,并对扶芳藤进行不同极性萃取,深入探寻其抗急性肺损伤的活性成分和作用机制。目的:本课题旨在从体内和体外评价扶芳藤提取物的主要抗炎活性成分对巨噬细胞和A549细胞的影响,并初步探讨扶芳藤主要有效活性单体调控巨噬细胞和A549细胞的潜在作用机制。方法:第一部分中药扶芳藤提取物、主要活性成分以及各萃取物对炎症反应的影响1.建立小鼠急性肺损伤模型测定扶芳藤乙醇提取物高、中、低剂量组对LPS所致小鼠急性肺损伤的影响。2.MTT法检测扶芳藤乙醇提取物以及乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物和石油醚提取物对RAW264.7细胞活力的影响。3.Griess法检测扶芳藤乙醇提取物以及乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物和石油醚提取物对LPS诱导的RAW264.7细胞分泌NO产量的影响。4.ELISA法测定扶芳藤乙醇提取物以及正丁醇提取物、乙酸乙酯提取物和石油醚提取物对LPS诱导的RAW264.7细胞分泌IL-6和TNF-α的影响。5.高效液相色谱法检测正丁醇提取物所含的主要活性成分,以及所含主要活性成分的含量。第二部分中药扶芳藤主要活性成分甜醇对LPS诱导的RAW264.7细胞的影响及机制探究1.MTT法检测甜醇对RAW264.7细胞活力的影响。2.Griess法检测甜醇对LPS诱导的RAW264.7细胞分泌NO的影响。3.ELISA法测定甜醇对LPS诱导的RAW264.7细胞分泌IL-6和TNF-α的影响4.RT-PCR检测甜醇对LPS诱导的RAW264.7细胞Myd88、TLR4、TRIF、NF-κB p65、iNOS、COX-2、IL-6、TNF-α和IL-1βmRNA表达的影响。5.Western-blot检测甜醇对LPS诱导RAW264.7细胞分泌TLR4、Myd88、TRIF和NF-κB p65蛋白表达的影响。6.免疫荧光法检测甜醇对LPS诱导的RAW264.7细胞NF-κB p65核转位的影响。第三部分中药扶芳藤主要活性成分甜醇对LPS诱导的A549细胞的影响及机制探究1.MTT法检测甜醇对LPS诱导的A549细胞活力的影响。2.Griess法检测甜醇对LPS诱导的A549细胞分泌NO产量的影响。3.RT-PCR检测甜醇对LPS诱导的A549细胞Myd88、TLR4、TRIF、NF-κB p65、iNOS、COX-2、IL-6、TNF-α和IL-1βmRNA表达的影响。4.Western-blot检测甜醇对LPS诱导的A549细胞分泌TLR4、Myd88、TRIF和NF-κB p65蛋白表达的影响。5.免疫荧光法检测甜醇对LPS诱导的A549细胞NF-κB p65核转位的影响。第四部分中药扶芳藤主要活性成分甜醇对LPS诱导小鼠急性肺损伤中的抗炎作用及其作用机制研究1.ELISA法检测甜醇对LPS诱导小鼠急性肺损伤分泌IL-1β、IL-6和TNF-α的影响。2.肺湿质量/干质量（W/D）比值检测甜醇对LPS诱导的小鼠急性肺损伤肺组织干湿比的影响。3.BCA及细胞计数法检测甜醇对LPS诱导小鼠急性肺损伤BALF中总蛋白浓度和细胞渗出数的影响。4.HE染色检测甜醇对LPS诱导急性肺损伤小鼠的肺部组织炎症反应影响。5.Western-blot法检测甜醇对LPS诱导急性肺损伤小鼠肺组织细胞中TLR4、Myd88、TRIF和NF-κB p65蛋白表达的影响。6.免疫荧光法检测甜醇对LPS诱导的急性肺损伤小鼠NF-κB p65核转位的影响。结果:1.中药扶芳藤提取物可显着降低LPS诱导小鼠急性肺损伤肺组织匀浆中TNF-α、IL-6和IL-1β的水平;可显着降低LPS诱导RAW264.7细胞NO及IL-6的分泌。2.中药扶芳藤中单体甜醇、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物和石油醚提取物在0～50μmol·L-1浓度下对RAW264.7细胞无明显毒性（P﹤0.05）;甜醇在1～25μmol·L-1时,对A549细胞无明显毒性（P﹤0.05）。因此,RAW264.7细胞选用的浓度为10μmol·L-1、25μmol·L-1和50μmol·L-1;A549细胞选用的浓度为1μmol·L-1、10μmol·L-1和25μmol·L-1。3.扶芳藤乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物和石油醚提取物对LPS诱导的RAW264.7细胞分泌的NO、IL-6和TNF-α有显着的抑制作用。4.HPLC表明扶芳藤中甜醇的含量为2.915%,甜醇在乙酸乙酯提取物含量为2.6%,在正丁醇提取物含量为4.6%。在正丁醇提取物中含量最高,与正丁醇提取物抗LPS诱导的急性肺损伤效果最显着相呼应,推测甜醇是主要活性的成分之一。5.甜醇抑制LPS诱导的RAW264.7和A549细胞分泌NO。6.甜醇抑制LPS诱导的RAW264.7细胞TLR4、Myd88、TRIF和NF-κB p65蛋白的表达。7.甜醇抑制LPS诱导的RAW264.7细胞的iNOS、COX-2、TNF-α、IL-6、IL-1β、TRIF、TLR4、Myd88和NF-κB p65的mRNA的表达。8.甜醇抑制LPS诱导的A549细胞iNOS、COX-2、TNF-α、IL-6、IL-1β、TRIF、TLR4、Myd88和NF-κB p65 mRNA的表达;同时,甜醇抑制细胞对TLR4、Myd88、TRIF和NF-κB p65蛋白的表达。9.扶芳藤中主要活性成分甜醇从病理学角度上明显改善LPS诱导的急性肺损伤小鼠的肺组织的炎性浸润,显着减轻了小鼠肺组织病理状态,改善组织充血的现象,还可以减轻小鼠肺组织渗出物的分泌,肺泡中出血状态减轻,红色变异区域也随之减少,表明小鼠的急性肺损伤状况得到改善,炎症区域普遍缩小,抑制炎症的发生发展,甜醇起到了明显改善小鼠急性肺损伤的作用。结论:1.扶芳藤粗提物高中低剂量在体外实验中,对炎症反应有显着的抑制作用;扶芳藤乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物和石油醚提取物均对炎症反应有显着的抑制作用,且正丁醇提取物活性最高。2.扶芳藤不同提取物均含有甜醇,且正丁醇提取物中甜醇含量最高,证明甜醇是扶芳藤中主要抗炎活性成分之一。3.甜醇对LPS诱导的RAW264.7和A549细胞的炎症反应有显着的抑制作用。4.甜醇抑制RAW264.7和A549细胞的TLR4-NF-κB p65信号通路。5.扶芳藤中主要活性成分甜醇通过抑制TLR4-NF-κB p65通路发挥抗炎作用,从而对LPS诱导的急性肺损伤小鼠具有保护作用。
赵凤莲[2]（2021）在《MiR-21通过调控PDCD4/JNK/c-Jun信号通路促进糖尿病肺损伤的机制研究》文中进行了进一步梳理研究背景:间质性肺疾病（ILD）是一大类进行性恶化性疾病,严重的威胁着全球人类的健康。由于其病因和发病机制尚不完全明确,目前尚无特效药物,死亡率甚至高于许多恶性肿瘤,造成了严重的社会负担和经济负担。ILD的临床分类主要包括已知原因的ILD、特发性间质性肺炎、肉芽肿性ILD和罕见ILD。其中,已知原因ILD的病因多而复杂,包括遗传、肿瘤、药物、治疗和疾病相关因素,可能达到200余种,糖代谢异常就是重要的病因之一。糖尿病是一种慢性进展性的代谢紊乱性疾病,其发病率逐年持续上升,根据国际糖尿病联盟的估计,2035年全球糖尿病患者将达到6亿。糖尿病并发症一直是学者们关注的研究热点和诊疗重点。糖尿病可以引起全身性的改变,增加了糖尿病患者的死亡率和致残率,已广泛引起临床医生和患者的关注。但是人们很少关注糖尿病肺病,尤其是糖尿病并发肺损伤的实质。由于肺脏毛细血管网储备丰富,糖尿病相关的ILD发病初期呼吸系统症状并不明显,同时易与心脑血管并发症的表现混淆,极易被临床医生和患者忽视,因此,糖尿病相关ILD一旦发病,症状一般较重,进展迅速,严重威胁着糖尿病患者的生存期。近十年来,我们课题组一直致力于研究糖尿病肺部并发症,证实了糖尿病相关肺损伤主要表现为肺间质性病变,包括炎性细胞浸润、胶原含量增加、肺泡间隔增宽和组织纤维化表现等,与博来霉素诱导的大鼠肺纤维化模型相似,首次阐述了糖尿病与肺部炎症和纤维化的关系,提出了肺脏是糖尿病重要靶器官的实验室证据。有关糖尿病相关肺损伤的发病机制尚未完全明确,涉及到炎症、氧化应激和纤维化等多个方面。随着基因组学和蛋白质组学的发展,我们对于miRNAs有了深入的认识。miRNAs是一类小单链的非编码RNA（nc RNA）,长度约为21-25个核苷酸,不能直接参与蛋白质的合成,对于基因的表达具有转录后调节功能,同时也可以调节细胞的增殖、分化和凋亡。有研究发现在糖尿病动物模型中miR-21的表达是增高的,抑制miR-21的水平可减轻糖尿病心脏和肾脏的并发症,这提示miR-21在糖代谢异常相关疾病的发病过程中发挥着重要的作用,有报道称miR-21可靶向结合并调节PDCD4的表达,而PDCD4可通过JNK信号通路参与多种疾病的发生和发展,但是在糖尿病相关肺损伤中,miR-21对于PDCD4/JNK信号通路的调节尚无相关报道。本研究旨在通过糖尿病动物模型,应用Jnk1敲除技术和JNK抑制剂,研究PDCD4/JNK信号通路在糖尿病肺损伤形成中的作用,同时应用miR-21抑制剂,观察抑制miR-21对于糖尿病肺部炎症和纤维化的影响,并探索miR-21在促进糖尿病肺损伤形成中的调控作用,为未来糖尿病相关ILD的治疗提供理论依据。研究方法:1.通过应用JNK抑制剂,观察抑制JNK表达及活化对糖尿病小鼠肺损伤以及miR-21表达水平的影响:选择野生型C57BL/6J小鼠,应用小剂量连续多次腹腔注射链脲霉素的方法建立糖尿病模型,待小鼠成模后给予JNK抑制剂（SP600125）进行干预,应用RT-PCR和Western Blot方法检测小鼠肺组织的炎症因子、促纤维化因子、氧化应激因子、抗氧化因子、miR-21、PDCD4、JNK、p-JNK的表达情况,探讨JNK抑制对糖尿病小鼠肺组织炎症和纤维化程度以及miR-21的表达水平的影响。2.通过JNK基因敲除技术,观察下调JNK表达对糖尿病小鼠肺损伤以及miR-21表达水平的影响:选择Jnk1敲除小鼠和野生型C57BL/6J小鼠制作糖尿病模型,应用RT-PCR和Western Blot方法检测小鼠肺组织的炎症因子、促纤维化因子、氧化应激因子、抗氧化因子、miR-21、PDCD4、JNK、p-JNK的表达情况,观察糖尿病小鼠肺组织炎症和纤维化程度,以及miR-21的表达水平。3.通过抑制miR-21,探讨miR-21对糖尿病小鼠肺损伤影响以及对PDCD4/JNK信号通路的调控:选择野生型C57BL/6J小鼠制作糖尿病模型,使用miR-21 antagomir抑制miR-21的表达,通过RT-PCR和Western Blot方法检测小鼠肺组织miR-21、PDCD4、JNK、p-JNK的表达情况,观察糖尿病小鼠肺组织炎症和纤维化程度,以及miR-21下游蛋白PDCD4和JNK的表达情况。研究结果:1.SP600125可明显下调糖尿病小鼠肺组织的炎症和纤维化指标,同时,糖尿病小鼠肺组织miR-21的表达水平明显增高,而应用SP600125干预后可进一步提高miR-21的表达水平。2.Jnk1敲除小鼠糖尿病组的肺组织炎症因子（TNFα和IL-6）和促纤维化因子（TGFβ1和PAI1）较野生型小鼠明显减低,同时JNK和p-JNK表达减低,与PDCD4表达趋势相反,进一步提示降低JNK的表达可减轻糖尿病肺部炎症和纤维化的程度,而PDCD4可能对JNK的活化具有负向调节作用。3.DM组小鼠肺组织的TNFα和TGFβ1较对照组明显增高,给予miR-21antagomir干预后降低;同时DM组小鼠肺组织的miR-21表达水平增高,PDCD4表达水平减低,应用miR-21 antagomir进行干预后PDCD4的表达升高,说明在糖尿病小鼠肺组织中miR-21也可能对PDCD4具有负向调节作用。结论:1.糖尿病诱发的小鼠肺损伤主要病理表现为炎症和纤维化,而抑制JNK或敲除Jnk1可在一定程度上改善糖尿病小鼠肺组织的炎症反应和纤维化程度。2.miR-21的表达与糖尿病小鼠肺组织炎症和纤维化程度呈正相关,抑制miR-21可减轻糖尿病小鼠肺部炎症和纤维化程度。3.miR-21过表达可能通过抑制PDCD4的表达,进一步加强JNK信号通路的活化,促进糖尿病肺组织炎症和纤维化的发生（相关信号通路需要细胞实验进一步验证）,抑制miR-21的表达可减轻糖尿病小鼠肺组织损伤,这可能成为糖尿病相关ILD的潜在治疗靶点。创新点:1.通过应用信号通路相关基因（Jnk1）敲除小鼠结合JNK抑制剂（SP600125）两种方法相互印证,证明了JNK信号通路在糖尿病肺损伤中的作用,使结果更可靠。2.应用miR-21靶向模拟抑制剂,证明了miR-21与PDCD4/JNK信号通路之间的相关性,进一步阐明了miR-21促进糖尿病肺损伤的可能发生机制,为糖尿病相关ILD的治疗提供了新的思路。
黄丹[3]（2021）在《雷帕霉素通过lncRNA-LOC102553434介导细胞焦亡途径调控肢体缺血再灌注肺损伤的功能及机制研究》文中研究说明研究背景:缺血再灌注损伤（IR）是指缺血状态的组织重新恢复血流引起的机体生理、生化和病理性改变,能够影响局部缺血组织的功能、诱发炎症反应和损伤远隔器官。肺是IR过程中最脆弱的远隔器官之一。肢体缺血再灌注损伤（LIR）诱导的急性肺损伤（ALI）是21世纪临床医生面临的常见问题。ALI是临床上十分常见的一类危重症,是由严重创伤、休克、酸中毒或严重感染等多种肺内外因素引起的,病死率高达4031%,以炎症和血管通透性增加为特征,临床上表现为进行性低氧血症和呼吸窘迫,发展至严重阶段被称为急性呼吸窘迫综合征。肺表面活性物质的不足和肺结构发育不成熟增加了肺对IR损伤的敏感性,而炎症和氧化应激有助于LIR诱导的ALI的病理过程。尽管ALI已被广泛探索几十年,但相关研究没有取得较大进展,ALI患者仍然需要面临长期的身体损伤。随着对ALI的认识在不断深入,大部分学者认为炎症风暴是ALI发生的关键因素。雷帕霉素（RAPA）是属于大环内酯类化合物的免疫抑制剂,通过抑制白细胞介素（IL）-2的表达从而阻碍T细胞及B细胞激活实现免疫抑制,被美国食品与药品管理局批准作为免疫抑制剂用于肾移植抗排异治疗和淋巴管肌瘤。大量研究证明RAPA不仅能抑制癌症进展,且在糖尿病、神经退行性疾病以及血液类疾病中疗效显着。总之,RAPA能缓解炎症,具有ALI治疗潜力。LncRNA是一类长度超过200个核苷酸的RNA转录本,参与多种生理和病理过程。研究发现,lncRNA可能通过直接或间接调控焦亡相关蛋白进而调控各种疾病发生发展。LncRNA在LIR诱导的组织损伤中的研究已有报道,然而,lncRNA在LIR肺损伤中的调控机制还尚未清楚。第一部分RAPA通过抑制细胞焦亡保护LIR诱导的ALI研究目的:探究RAPA对LIR诱导的ALI动物模型的疗效和机制。研究方法:本实验以假手术组（sham组）为对照,构建LIR诱导的ALI大鼠模型（IR组）,实验组使用RAPA进行预处理（IR+RAPA组）。使用HE染色确定大鼠肺组织的病理学变化;试剂盒检测大鼠的SOD活性和MDA含量以评估抗氧化能力;免疫组化和western blot检测焦亡标志因子NLRP3、caspase-1蛋白表达水平;ELISA检测炎症因子大鼠血清中IL-1β、IL-18的水平变化。研究结果:1.与IR组相比,IR+RAPA组肺水肿、充血明显减轻,炎性细胞浸润减少,具有异型性的肺组织明显保留。2.与IR组相比,IR+RAPA组显着逆转了由于IR处理导致的大鼠SOD活性、MDA水平、NLRP3和caspase-1蛋白水平以及1L-1β和1L-18含量的改变。第二部分大鼠LIR肺组织转录组测序分析研究目的:通过高通量测序筛选通过焦亡或损伤相关通路参与RAPA改善ALI进程的差异表达lncRNA和mRNA。研究方法:本实验模型组采用LIR诱导大鼠的ALI（IR组）,实验组使用RAPA对LIR大鼠预处理（IR+RAPA组）,最后通过高通量测序表征两组大鼠的肺组织表达谱,以获得IR组和IR+RAPA组肺组织中mRNA和lncRNA的差异表达特征。GO功能富集分析和KEGG通路富集分析探究了差异表达的mRNA和lncRNA的富集情况;Miranda和RNAhybird软件对差异表达的mRNA和lncRNA与miRNA的关系进行预测,构建ce RNA调控关系。研究结果:1.IR组和IR+RAPA组间总计鉴定到220个差异表达mRNA,与IR组相比,IR+RAPA组有149个下调表达的mRNA和71个上调表达的mRNA。此外,鉴定到63个差异表达的lncRNA,与IR组相比,IR+RAPA组有27个下调表达的lncRNA和36个上调表达的lncRNA。2.IR组和IR+RAPA组间的差异表达mRNA及lncRNA主要参与IL-1的细胞反应、IL-6生物合成过程的正调控、中性粒细胞趋化性、细胞因子-细胞因子受体的相互作用以及细胞粘附分子等生物学过程和信号通路。3.IR组和IR+RAPA组间的差异表达基因共得到1945条lncRNA-miRNAmRNA调控网络,表明存在差异表达lncRNA通过海绵吸附miRNA影响mRNA的表达对ALI的发生和治疗产生影响。4.lncRNA LOC102553434和MMP9在IR组的表达量显着高于Sham组和IR+RAPA组,且MMP9是LOC102553434/rno-miR-674-5p/MMP9轴的下游靶基因,因此,RAPA处理降低LOC102553434在ALI肺组织中的表达进而可能通过靶向rno-miR-674-5p/MMP9轴改善肺损伤。第三部分LOC102553434在肺泡上皮细胞损伤中功能研究研究目的:探究RAPA通过LOC102553434介导的ce RNA机制抑制细胞焦亡改善肺损伤中的作用机制。研究方法:本研究选取大鼠肺泡上皮细胞系进行体外实验,通过q RT-PCR检测Blank组、LPS组和LPS+RAPA组中炎症因子（1L-1β、1L-18）以及LOC102553434、rno-miR-674-5p和MMP9的表达变化;利用si RNA干扰LOC102553434的表达,随后使用CCK-8鉴定细胞增殖能力;WB检测Blank组、LPS组、LPS+RAPA+si-NC组和LPS+RAPA+si RNA组中NRPL3、caspase-1以及MMP9的表达。研究结果:1.与LPS组相比,Blank和LPS+RAPA组肺泡上皮细胞的1L-1β、1L-18、LOC102553434和MMP9表达显着下降,而rno-miR-674-5p的表达显着升高。2.干扰LOC102553434后,LPS+si RNA组的肺泡上皮细胞的增殖能力明显较LPS组和LPS+si RNA-NC组增强。3.与LPS组或LPS+RAPA+si-NC组相比,LPS+RAPA+si RNA组的肺泡上皮细胞中NRPL3、caspase-1以及MMP9蛋白表达显着降低。结论:1.RAPA通过抑制细胞焦亡保护LIR诱导的ALI。2.差异表达lncRNA通过海绵吸附miRNA调节mRNA的表达,参与LIR导致的大鼠ALI的病理过程,而RAPA通过调控lncRNA的表达从而达到治疗ALI的目的。3.LOC102553434可能通过作用于rno-miR-674-5p/MMP9轴参与肺泡上皮细胞损伤发生,有望成为ALI潜在的预防和治疗靶点。4.RAPA通过下调LOC102553434的表达进而下调MMP9的表达以及抑制焦亡相关分子的表达的双重抑制作用来减轻ALI,可能是ALI治疗的有效候选药物。
高云[4]（2021）在《金丝桃苷对PM2.5诱导的气道损伤及COPD急性加重的保护作用和机制研究》文中指出PM2.5是造成全球疾病的主要危险因素之一。PM2.5的主要成分多环芳烃（PAHs）与呼吸系统疾病的发病率和死亡率有关,气道上皮是空气和肺组织之间宿主防御的第一道屏障,它极易受到有害物质（例如香烟烟雾或PM2.5）的刺激和破坏。截至目前,PM2.5致肺损伤的机制包括氧化应激、炎症机制、细胞自噬和细胞凋亡等。在各种病理生理条件下,自噬的异常水平可能与细胞凋亡有关。有证据表明抑制异常调节的自噬可以防治细颗粒物引起的损害。金丝桃苷,也称为槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷,是一种从金丝桃或山楂中提取的类黄酮糖苷化合物,具有抗炎、抗氧化活性及与细胞异常自噬有关的疾病中起保护作用。然而目前关于金丝桃苷在PM2.5诱导的肺损伤是否具有保护作用及其机制尚有待进一步研究。方法:本实验主要分为两部分,第一部分拟构建体外和体内两种模型,研究金丝桃苷在Beas-2b细胞和PM2.5诱导肺损伤小鼠模型中的保护作用及其机制。体外实验中,我们制备并对比水溶性PM2.5（W-PMs）和有机可萃取PM2.5（OPMs）对Beas-2b细胞的细胞毒性后,在Beas-2b细胞中以O-PMs诱导观察细胞损伤的分子机制及金丝桃苷发挥保护作用及调节细胞自噬和细胞凋亡的机制。在体内实验中,我们以PMs构建小鼠肺损伤的模型,在体外实验基础上进一步研究金丝桃苷对PMs诱导小鼠肺损伤模型中自噬失调和炎性损伤的保护作用和分子机制,并且在此基础上应用AMPK激活剂深入探究金丝桃苷调节细胞自噬和细胞凋亡发挥保护作用的分子机制。第二部分首先构建COPD动物模型,拟应用PM2.5刺激加重COPD肺损伤,研究金丝桃苷在缓解PM2.5诱导慢性呼吸道疾病急性加重中的保护作用。以上过程中主要应用酶联免疫吸附实验（ELISA）和免疫印迹法（Western Blot）等分子生物学方法。结果:第一部分:1.在体外,O-PMs具有更强的细胞毒性,O-PMs可过度激活自噬和细胞凋亡,表现在自噬相关蛋白（beclin-1,p62,atg3和LC3Ⅱ）和凋亡蛋白（parp,bax,caspase 3）的水平呈剂量依赖性增加。O-PMs可剂量依赖性上调P-AMPK和抑制m-TOR的水平。金丝桃苷可抑制O-PMs诱导的细胞毒性、自噬蛋白过度表达、自噬小体的积累、细胞凋亡以及p-AMPK的表达以及上调p-mTOR水平。3-MA和Compond C（AMPK抑制剂）可增强金丝桃苷以上的治疗作用,而AICAR（AMPK激活剂）则具有减弱的作用。2.在体内,金丝桃苷显着改善PMs诱导小鼠肺损伤模型的肺组织病理改变,并且能够抑制BALF中炎症细胞（主要为中性粒细胞）渗出和细胞因子（TNF-α和IL-6）分泌,降低肺组织自噬相关蛋白（beclin-1、p62、atg3和LC3Ⅱ）、凋亡蛋白（parp,bax,caspase-3）的表达,增加bcl-2的表达。这种作用可能与其抑制AMPK/mTOR通路密切相关。应用AICAR后,PMs诱导肺损伤小鼠模型中金丝桃苷减轻PMs诱导的肺组织病理改变、BALF中炎症细胞以及抑制细胞因子（TNF-α和IL-6）分泌的作用明显减弱,同时对LC3Ⅱ和caspase-3的抑制作用也减弱,表明了金丝桃苷在PMs诱导肺损伤小鼠模型中的调节细胞自噬和细胞凋亡及保护作用是通过AMPK/mTOR介导。第二部分:1、金丝桃苷显着降低PM2.5诱导COPD肺损伤加重模型中炎症反应,表现为与COPD+PM2.5组比较,金丝桃苷减轻PM2.5诱导的肺损伤病理评分,降低BALF中炎性细胞计数、TNF-α和IL-6水平。同时,金丝桃苷可减少PM2.5诱导COPD肺损伤加重模型中Muc5ac和p-creb的分泌。2、金丝桃苷明显抑制PM2.5诱导的COPD肺损伤加重模型肺组织中NF-κB通路活化和NLRP3炎症小体激活,降低肺组织自噬相关蛋白（beclin-1、atg3和LC3Ⅱ）、凋亡蛋白（bax和caspase 3）的表达。结论:综上所述,本研究证明了金丝桃苷对PM2.5诱导的气道损伤以及COPD肺损伤加重的保护作用和金丝桃苷抑制自噬相关蛋白和凋亡蛋白表达的分子机制,为PM2.5诱导和加重呼吸系统疾病的治疗提供策略。
胡志云[5]（2021）在《8-OHdG、SOD在溃疡性结肠炎患者血清中的水平及意义》文中研究指明目的:通过检测8-OHd G、SOD在溃疡性结肠炎患者血清中的水平,并分析二者的表达水平与患者的病情严重程度是否相关,有助于了解疾病发生的机制,对疾病的早期诊疗、评估病情的严重程度及了解预后至关重要。方法:收集河北北方学院附属第一医院2020.05-2021.01符合纳入标准病例63例和同期健康体检者30例,次日清晨空腹时采血,分别检测入组病例的血常规、血沉等,将入组者按照改良的Truelove和Witts评分分组,分为溃疡性结肠炎轻中度组、重度组、健康组,分别采用酶联免疫吸附法、比色法检测三组的血清8-OHd G、SOD的含量。应用SPSS20.0统计学软件分析数据。结果:（1）三个组性别、年龄相比,UC两组病程比较,均无差异,无统计学意义（P>0.05）。（2）患有UC两组血清8-OHd G明显升高,SOD显着降低,两组与健康组相比,结果均有明显差异（P<0.05）;并且患病两组之间相比,也存在统计学意义（P<0.05）,进一步分析了血清8-OHd G、SOD的相关性,发现二者中度相关,相关系数r=-0.437（P<0.05）。（3）将以下因素包括年龄、病程、血清8-OHd G、SOD水平纳入Logistic回归模型中,得出血清8-OHd G、SOD与患者的病情严重程度有关（OR值分别为2.317、0.603,P<0.05）。（4）应用血清8-OHd G和SOD的水平评估溃疡性结肠炎病情严重程度,绘制ROC曲线,血清8-OHd G的AUC为0.821,95%CI为72-93%,P=0.000,血清SOD的AUC为0.792,95%CI为67-91%,P=0.000。结论:（1）溃疡性结肠炎患者血清8-OHd G显着升高,SOD显着降低,提示了氧化应激与溃疡性结肠炎的发生发展紧密相关。（2）血清8-OHd G、SOD的表达水平与患者的病情严重程度相关,当疾病不断进展时,二者呈动态改变,可以评估疾病的严重程度。（3）同时,血清8-OHd G、SOD之间也具有相关性,绘制了二者的ROC曲线,提示二者对UC严重程度具有较高的诊断价值,这对于监测疾病进展、指导治疗、评估疾病治疗效果非常重要。
王轶铭[6]（2021）在《双调蛋白减轻与ARDS并发急性肝损伤的作用和机制》文中提出背景:急性呼吸窘迫综合征（Acute Respiratory Distress Syndrome,ARDS）是一种在短时间内肺泡不能进行正常气体交换,导致难治性低氧血症和呼吸衰竭的呼吸系统疾病,对于ARDS的治疗一直都是医学重点与难点。ARDS发生后释放一系列炎性因子,如肿瘤坏死因子（Tumor Necrosis Factor-alpha,TNF-α）,激活“死亡信号”通路,可能导致肝、肾、心等多器官功能障碍。有报道表明在ARDS发生后,会导致急性肝损伤,在短期内发生大量肝细胞坏死及严重肝功能损伤,但是其中的机制并不明确。双调蛋白（Amphiregulin,Areg）是表皮生长因子受体（Epidermal growth factor receptor,EGFR）的配体,能够激活EGFR信号通路,调节细胞的增殖与分化促进器官的生长发育,Areg也有抗凋亡作用,能够减轻肺、肝、肠等器官和组织的损伤并促进损伤后修复。但是Areg在与ARDS并发的急性肝损伤中是否也有保护作用及其中的机制暂不清楚。因此推测,Areg能够通过激活EGFR信号通路,抑制TNF-α对“死亡信号”通路的激活,减轻TNF-α介导的肝脏损伤。目的:探讨Areg对由急性呼吸窘迫综合征引发急性肝损伤的保护作用及机制。方法:本实验选用6-8周龄,体重22-24 g,雄性C57BL/6小鼠,采用完全随机分组。（1）将小鼠分为标准对照组（Control组）和LPS组,Control组气管内滴注与LPS等体积的无菌PBS溶液,LPS组通过气管内滴注脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）（3 mg/kg）来建立ARDS模型,24 h后处死小鼠。取小鼠肺、肝组织做HE染色进行组织形态学分析并进行损伤评分,取小鼠肺泡灌洗液（Bronchoalveolar lavage fluid,BALF）做吉姆萨中性粒细胞计数和总蛋白含量测定来分析肺泡屏障功能,取血清做谷丙转氨酶（Alanine aminotransferase,ALT）、谷草转氨酶（Aspartate aminotransferase,AST）、乳酸脱氢酶（Lactate dehydrogenase,LDH）测定来分析肝功能损伤。（2）将小鼠分为0 h组、3 h组、6 h组、12 h组、24 h组,各组都通过气管内滴注LPS（3 mg/kg）建立ARDS模型。分别检测不同时间点小鼠BALF、血清和肝脏中TNF-α的表达量。（3）将小鼠分为对照组(LPS+NS和抑制剂组（LPS+ETA组）,LPS+NS组腹腔注射与LPS+ETA组等体积的生理盐水（NS）,LPS+ETA组腹腔注射TNF-α抑制剂依那西普（Etanercept,ETA）（10 mg/kg）,30 min后气管内滴注LPS（3 mg/kg）。进行肺、肝组织形态学检测、肺泡屏障功能检测和肝功能检测。（4）将小鼠分为4组,对照组（Control组）,Areg组,PBS+TNF-α组（TNF-α组）和Areg+TNF-α组。Control组腹腔注射与TNF-α组等体积的0.15%BSA溶液,30 min后气管内滴注与TNF-α组等体积的无菌PBS溶液;Areg组腹腔注射Areg（5μg/只）,30 min后气管内滴注与TNF-α组等体积的无菌PBS溶液;TNF-α组腹腔注射与Areg组等体积的0.15%BSA溶液,30 min后气管内滴注TNF-α（0.75 mg/kg）;Areg+TNF-α组腹腔注射Areg（5μg/只）,30 min后气管内滴注TNF-α（0.75 mg/kg）。进行肺、肝组织形态学检测、肺泡屏障功能检测、肝功能检测,通过TUNEL检测肝细胞凋亡,免疫组织化学检测Cleaved-Caspase 3（Cl-Caspase 3）的表达量,Western Blot检测p-EGFR、EGFR、p-AKT、AKT、p-ERK1/2、AKT、Cl-Caspase 3、Bax、Bcl-2、GAPDH蛋白表达量。结果:1.与Control组相比,LPS组肺泡结构改变,肺损伤评分显着增加（P﹤0.001）;肺泡屏障功能损伤,BALF中性粒细胞数显着增加（P﹤0.05）,蛋白含量显着增加（P﹤0.01）,表明肺损伤建立。同时LPS组肝脏形态结构发生改变,肝损伤评分显着增加（P﹤0.01）;肝功能受损,ALT显着增加（P﹤0.01）,AST显着增加（P﹤0.01）,LDH显着增加（P﹤0.01）。小鼠发生ARDS后,并发了急性肝损伤。2.BALF中,与0 h相比,3 h组TNF-α显着增加（P﹤0.01）,随后逐渐增加,在6 h时增加到顶峰（P﹤0.001）,随后出现下降趋势;血清中,与0 h相比,3 h组TNF-α表达量显着增加（P﹤0.01）,随后逐渐增长,在6 h达到顶峰（P﹤0.001）,随后出现下降趋势,血清中TNF-α浓度与BALF中TNF-α浓度出现同步化分泌的现象。Western Blot检测肝脏中TNF-α的浓度,与0 h相比,3 h（P﹤0.01）、6 h（P﹤0.001）、12 h（P﹤0.001）、24 h（P﹤0.001）各个时间节点都显着增加,各个时间点表现出逐级增加。TNF-α可能是介导ARDS后并发急性肝损伤的一个关键分子。3.与LPS+NS组相比,LPS+ETA组肝肝组织形态学明显减轻,损伤评分降低（P﹤0.01）、肝功能损伤减轻,肝功能ALT（P﹤0.05）、AST（P﹤0.05）和LDH（P﹤0.01）均显着降低。抑制了肝脏中TNF-α的表达,肝损伤显着减轻。4.与Control组相比,TNF-α组肝脏组织结构明显改变、肝损伤评分显着增加（P<0.001）、肝功能受损,ALT（P﹤0.001）、AST（P﹤0.001）、LDH（P﹤0.01）显着增加;与TNF-α组相比,肝脏组织结构明显改善、肝损伤评分明显降低（P﹤0.01）、肝功能ALT（P﹤0.001）、AST（P﹤0.001）、LDH（P﹤0.05）显着降低。TNF-α可以介导ARDS后并发的肝损伤,Areg能够减轻由TNF-α介导的肝损伤。5.与Control组相比,Areg组p-EGFR（P﹤0.001）、p-AKT（P﹤0.05）、p-ERK1/2（P﹤0.05）表达水平显着增加,TNF-α组p-EGFR（P﹤0.001）、p-AKT（P﹤0.05）、p-ERK1/2（P﹤0.01）、Cl-Caspase 3（P﹤0.001）表达均显着增加,肝细胞凋亡率（P﹤0.001）显着增加;与TNF-α组相比,Areg+TNF-α组p-EGFR（P﹤0.05）、p-AKT（P﹤0.01）、p-ERK1/2（P﹤0.05）表达进一步增加,Cl-Caspase 3（P﹤0.01）显着降低,肝细胞凋亡率显着降低（P﹤0.001）。Areg和TNF-α都可以促使EGFR、AKT、ERK1/2发生磷酸化表达。Areg能够减轻TNF-α介导的凋亡,减轻肝损伤。结论:ARDS发生后并发了肝损伤,TNF-α在其中发挥重要作用。Areg不仅对ARDS后的肺损伤有保护作用,还能通过激活EGFR通路,下调TNF-α介导的“死亡信号”通路,减轻肝损伤。
阮洪艳[7]（2021）在《丙泊酚通过调节Nrf2/NLRP3信号通路减轻呼吸机相关性肺损伤的机制研究》文中指出背景和目的众所周知,急性肺损伤（ALI）是一种是以血管完整性被破坏和上皮细胞和内皮细胞的通透性增加为特征的急性炎症性疾病。急性肺损伤（ALI）患者通常需要机械辅助通气,而机械辅助通气又可以导致呼吸机相关性肺损伤（VILI）。虽然小潮气量（VT）可减少机械通气并发症的发生,取得较好的临床效果,但对正常肺组织的损伤即VILI是不可避免的。急性呼吸窘迫综合征合并VILI的患者的死亡率为40%。在VILI中发现了肺泡巨噬细胞的活化,相关研究表明:巨噬细胞的活化可能是VILI发病机制的因素之一。促炎和抗炎因子的不平衡被认为是VILI的主要原因。此外,针对抑制活性氧（ROS）的产生也被提出用于预防呼吸机相关性肺损伤（VILI）。综上所述,对VILI中抗炎和抗ROS药物以及某些基因特定表达机制的研究可能有助于更好的治疗VILI。丙泊酚是一种麻醉剂也是一种神经元死亡抑制剂,它能激活γ-氨基丁酸A型受体的活性,改善急性肺损伤（ALI）。核因子E2-相关因子2（Nrf2）是核受体中的一员,它是一种转录因子并可被氧化应激反应激活。为了保证其适当的活性,转录调节和翻译后修饰均需要控制Nrf2在正常条件下或在适应不同环境期间的表达。最近,不同的研究报道了 Nrf2在急性肺损伤（ALI）中的作用。此外,还发现丙泊酚具有活化Nrf2从而改善肝移植大鼠ALI的作用。然而,丙泊酚和Nrf2在VILI中的角色很少被研究。有趣的是,有研究发现:Nrf2与NOD-likereceptor protein 3（NLRP3）炎性小体的相互作用具有抗炎和抗氧化功能。一项研究提出了一个新的观点:靶向NLRP3炎性小体是预防VILI的一种潜在策略。NLRP3也被发现在丙泊酚介导下可缓解炎症反应和减轻脑损伤。从以上方面,我们假设丙泊酚可以通过调节Nrf2和NLRP3来改善VILI。因此,我们通过实验来验证上述假设,为VILI的预防提供临床理论依据。方法健康成年雄性8～12周龄的C57BL/6小鼠126只,体重约20-25克左右,由上海第二军医大学实验动物中心提供。随机分为9组,每组14只:（1）假手术组;（2）正常潮气量组（VT为7mL/kg）;（3）高潮气量组（VT为20mL/kg）;（4）呼吸机相关性肺损伤+丙泊酚组（VILI+Prop group）;（5）丙泊酚组（Prop group）;（6）呼吸机相关性肺损伤+丙泊酚+Nrf2激活剂-萝卜硫素（Sulforaphane）组（VILI+Prop+SFN group）;（7）呼吸机相关性肺损伤+丙泊酚+Nrf2激活剂SFN+NLRP3 激活剂-尼日利亚菌素（Nigericin）组（VILI+Prop+SFN+Nigergroup）;（8）呼吸机相关性肺损伤+丙泊酚+Nrf2抑制剂-全反式维甲酸（All-transretinoic acid）组（VILI+Prop+ATR group）;（9）呼吸机相关性肺损伤+丙泊酚+Nrf2抑制剂 ATR+NLRP3 激活剂 Niger 组（VILI+Prop+ATR+Niger group）。进行了肺组织苏木精-伊红（hematoxylin and eosin,H&E）染色,测定了肺组织湿重/干重比（wet/dry,W/D）、肺组织EBA通透性指数、支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）的蛋白浓度、肺组织中MDA和8-OHdG的表达水平及炎症相关的肺组织髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）活性,ELISA法检测BALF中各种炎症因子（MPO、IL-1β、IL-18、TNF-α、IL-6和MIP-2）表达水平以及BALF细胞总数、BALF中性粒细胞和巨噬细胞总数,Western Blot分析肺泡巨噬细胞中NLRP3、ASC和caspase-1蛋白的表达以及肺组织中Nrf2蛋白的表达,RT-qPCR检测肺组织中SOD和HO-1 mRNA的表达,以及线粒体中的ROS率。结果（1）VILI小鼠注射丙泊酚后,其肺组织病理形态得到改善,肺组织W/D值、EBA通透性指数和BALF中蛋白含量均显着降低（P<0.05）。表明丙泊酚可改善呼吸机相关性肺损伤。（2）VILI小鼠注射丙泊酚后,其BALF中各种炎症因子（MPO、IL-1β、IL-18、TNF-α、IL-6和MIP-2）的表达水平以及肺组织中8-OHdG和MDA的水平均显着降低（P<0.05）。表明丙泊酚可缓解机械通气引起的肺部炎症。（3）VILI小鼠注射丙泊酚后,其肺泡巨噬细胞中的NLRP3蛋白、ASC蛋白、caspase-1蛋白和ROS的表达均降低（P<0.05）,且肺组织中的Nrf2蛋白、超氧化物歧化酶（SOD）和血红素加氧酶（HO-1）mRNA表达均增加（P<0.05）。表明丙泊酚治疗后,丙泊酚可上调VILI中Nrf2的表达,并下调NLRP3的表达。（4）VILI小鼠注射丙泊酚后,激活Nrf2可显着降低小鼠肺组织中的caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA及相应蛋白的表达,BALF中的炎性因子IL-1β和IL-18的表达水平也降低。肺组织的病理形态得到进一步改善。（5）VILI小鼠注射丙泊酚并激活Nrf2后,如同时激活NLRP3,则小鼠表现出较严重的肺组织病理损伤,BALF中IL-1β和IL-18的表达以及caspase-1、IL-1β和IL-1蛋白水平均显着增强;VILI小鼠注射丙泊酚后抑制Nrf2,激活NLRP3会出现比上述更严重的病理现象。表明:NLRP3通过促进炎症作用抑制了 Nrf2对VILI模型小鼠肺组织病理学和炎症反应的保护作用结论综上所述,这些研究数据表明,丙泊酚通过激活Nrf2和抑制NLRP3的表达,从而对呼吸机相关性肺损伤（VILI）和VILI相关的炎症反应起到一定的保护作用。因此,Nrf2激活剂和NLRP3抑制剂可能是预防VILI的潜在治疗药物。
吴俊东[8]（2021）在《海藻硒多糖对脓毒症老年大鼠肺损伤保护作用及机制探讨》文中指出目的:通过SD老年大鼠盲肠结扎与穿孔术建立脓毒症模型,测定海藻硒多糖对脓毒症老年大鼠肺脏病理学损伤、肺组织湿干重比、细胞炎症因子水平、氧化应激水平以及NLRP3炎症小体信号通路蛋白含量变化的影响,探讨海藻硒多糖对脓毒症老年大鼠肺损伤的治疗潜力及其可能作用机制。方法:将SD雄性老年大鼠随机分为6组:假手术组（F组）、脓毒症模型组（CLP组）、低剂量海藻硒多糖组（L-Sec组）、中剂量海藻硒多糖组（M-Sec组）、高剂量海藻硒多糖组（H-SEc）、NLRP3炎症小体抑制剂组（MCC950组）。经海藻硒多糖处理组在建造CLP模型前三天同一时间段分别给予低剂量（50mg/Kg）中剂量（100mg/Kg）、高剂量（150mg/Kg）的海藻硒多糖灌胃处理,每天一次,并于CLP模型制备完成后0.5h经腹腔注射海藻硒多糖,剂量同各自灌胃剂量。NLRP3炎症小体抑制剂组干预药物为MCC950,其余同海藻硒多糖组。F组与CLP组于对应时间点给予相同容量的生理盐水。每组6只大鼠用来观察死亡率,另外6只在实验结束后留取组织标本。ELISA检测大鼠血清及BALF中TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18含量;测定肺湿干比率（W/D）,做病理切片HE染色,观察病理损伤情况并评分;测定肺组织MDA、GSH-PX、SOD变化情况;Western Blot测定肺组织NLRP3炎症小体通路NLRP3、caspase–1以及IL-1β蛋白表达。结果:1.与CLP组相比,海藻硒多糖干预组老年大鼠72小时生存率改善不太明显,仅H-SEc组72小时生存率为16.3%,MCC950组72小时生存率为33.3%。但L-SEc组、M-SEc组和H-SEc组老年大鼠平均生存时间和中位生存时间均明显延长（P<0.05）。2.与CLP组相比,L-SEc组、M-SEc组和H-SEc组肺组织病理学改变明显减轻、肺湿干比率明显降低、血清及与BALF中TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18水平明显下降（P<0.05）。3.与F组相比,其余各组肺组织中MDA水平增高,而GSH-PX及SOD活性水平下降,CLP组趋势尤为明显（P<0.05）;而与CLP组相比,海藻硒多糖干预组肺组织MDA水平呈不同程度的降低,GSH-PX、SOD活性水平也呈不同程度恢复（P<0.05）。4.与F组相比,CLP组老年大鼠肺组织中NLRP3、caspase-1以及IL-1β蛋白表达水平上调（P<0.05）;与CLP组相比,海藻硒多糖干预组和MCC950组老年大鼠肺组织中NLRP3通路检测蛋白表达水平降低（P<0.05）。结论:海藻硒多糖能够减轻CLP诱导的老年大鼠肺损伤的程度,降低脓毒症老年大鼠的死亡率,尤其是能够有效提高中位存活时间。并且随着海藻硒多糖剂量增加,保护效果越明显。其可能机制是通过减轻大鼠体内氧化应激水平,抑制NLRP3炎症小体通路相关蛋白NLRP3、caspase–1以及IL-1β的表达,减轻炎症反应,从而发挥保护作用。
谢邱梦[9]（2021）在《衣康酸通过抑制NLRP3炎症小体活化和氧化应激减轻小鼠急性肺损伤》文中进行了进一步梳理背景:急性肺损伤（Acute lung injury,ALI）及其更严重的形式急性呼吸窘迫综合征（Acute respiratory distress syndrome,ARDS）是临床常见的由各种因素导致的急性低氧性的呼吸功能不全,严重时产生呼吸衰竭,在临床上具有较高的发病率和死亡率,但目前仍缺乏特异性的药物治疗。很多研究数据表明,肺内NLRP3炎症小体活化及氧化应激在急性肺损伤发病机制中具有重要作用,NLRP3炎症小体的活化可以促进caspase1及IL-1β的成熟,导致肺组织损伤。衣康酸（Itaconate,ITA）是三羧酸循环中由顺乌头酸脱羧合成的内源性免疫代谢产物,在活化的巨噬细胞中上调,具有显着的抗炎和抗氧化作用。但衣康酸是否能调控NLRP3炎症小体活化并在急性肺损伤的治疗中具有保护性作用呢?目的:本文通过脂多糖（Lipopolysaccharides,LPS）气管滴注的方法制作小鼠急性肺损伤模型,同时利用LPS刺激Raw264.7小鼠单核巨噬细胞系建立体外炎症模型。本研究目的在于阐明衣康酸在治疗小鼠急性肺损伤中的作用及其机制。方法:将C57BL/6J小鼠随机分为四组:空白组、LPS组（2.5 mg/kg）、衣康酸干预组（30 mg/kg）和MCC950干预组（10 mg/kg）。在体外实验中,将培养的Raw264.7细胞分为空白组、LPS组、衣康酸对照组（150?M）、衣康酸30?M处理组、衣康酸100?M处理组及衣康酸150?M处理组,用H&E染色评估肺组织病理改变,用western blot检测肺组织及Raw264.7巨噬细胞中NLRP3、caspase1（p20）、IL-1β,氧化应激相关蛋白nitrotyrosine、SOD2,线粒体融合蛋白OPA1、Mfn2,线粒体分裂蛋白DRP1、Fis1,及炎症因子TNF-α和IL-6的表达,同时用免疫组化检测肺组织中NLRP3、caspase1、IL-1β、8-OHd G、nitrotyrosine的表达情况。结果:在LPS诱导的小鼠肺损伤模型中,出现了明显的肺泡间质水肿、肺泡壁增厚、炎性细胞浸润,并且促炎因子TNF-α和IL-6的产生明显增加,但是,衣康酸处理显着减弱了LPS导致的这些炎性病理改变。同时,LPS刺激提高了肺组织中NLRP3、IL-1β和caspase1的蛋白表达,增强了NLRP3炎性小体的活化,并且增加了氧化应激相关蛋白（nitrotyrosine、SOD2、8-OHd G）、线粒体分裂/融合蛋白（OPA1、Mfn2、DRP1、Fis1）的表达水平。有趣的是,衣康酸明显抑制了这些蛋白的增加。此外,MCC950是一种特异性的NLRP3炎症小体抑制剂,也可显着改善肺组织损伤,并抑制LPS诱导的NLRP3炎症小体活化、氧化应激和线粒体分裂/融合。在细胞实验中我们发现,LPS刺激显着提高了细胞培养基上清中炎症因子表达,上调了Raw264.7细胞NLRP3炎症小体活化、氧化应激和线粒体分裂/融合,给予150?M衣康酸处理后显着降低了NLRP3、IL-1β、caspase1、nitrotyrosine、OPA1、Mfn2、DRP1、Fis1的蛋白表达水平。结论:总的来说,我们的结果表明了衣康酸可以改善LPS诱导的小鼠急性肺损伤,并且其机制可能与抑制NLRP3炎症小体活化和氧化应激相关,因此表明衣康酸可能成为治疗ALI/ARDS的新型药物。
石月[10]（2020）在《中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）参与调节急性力竭及规律有氧运动相关天然免疫的作用及机制研究》文中研究说明研究背景:中性粒细胞胞外诱捕网（neutrophil extracellular traps,NETs）是由中性粒细胞释放的以DNA为骨架、装载组蛋白和颗粒酶类物质的细胞外网状结构,可作为天然免疫有效的免疫防御机制,然而过多的NETs释放已被证明参与了多种疾病的病理过程;因此,NETs在体内释放能力的过弱或过强都会造成机体健康的天平失去平衡。同样,在运动免疫学领域已达成的研究共识为:过度运动致使机体暂时性免疫抑制,感染疾病风险上升;规律有氧运动提高机体免疫机能,患病风险降低。然而,NETs与这两点研究共识相关的研究还屈指可数,因此,本课题将从运动免疫学两大共识出发,围绕NETs的功能情况,分别探究两部分内容:一、急性力竭运动中外周循环血NETs的释放情况及其可能的机制;二、NETs在规律有氧运动缓解疾病炎症反应中的作用及机制。在第二部分研究中,我们选取了临床常见的呼吸系统危重疾病,急性肺损伤（acute lung injury,ALI）作为研究模型,其典型的特征为气道和全身失控的炎症反应。已有研究报道了 NETs参与ALI气道炎症反应的过程,并且规律的有氧运动可以减轻ALI气道炎症反应;这为本部分研究奠定了良好的基础。因此,本课题通过这两部分的研究,以期揭示不同运动方式下,NETs在健康和ALI机体中发挥的作用及机制,从而丰富运动性免疫抑制的认知视角以及为ALI的治疗提供新的靶点。研究方法:在研究一中,我们选取了 7周龄雄性C57BL/6小鼠,将其随机分为对照组（C组）,递增负荷跑步至60min（E60组）,递增负荷跑步至力竭组EE组,力竭后恢复1.5小时组（1.5E组）,恢复3小时组（3E组）;在实施急性力竭跑台运动的不同的时间点,检测乳酸堆积情况,NETs释放情况及通过体外实验探究乳酸抑制NETs的情况和机制。在研究二中,7周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组（CON组）,LPS诱导急性肺损伤组（LPS组）,有氧运动+急性肺损伤组（EXE+LPS组）,急性肺损伤结合DNase注射降解NETs组（DNase+LPS组）。运动干预和药物注射完毕后的24小时进行取材,分别检测肺组织中性粒细胞和M1型肺泡巨噬细胞的浸润情况、NETs的释放情况以及原代肺泡巨噬细胞中MAPK信号通路关键蛋白和NF-κB蛋白活化情况;此外,通过提纯NETS诱导小鼠肺泡巨噬细胞系MH-S极化反应,检测刺激后细胞促炎性因子表达情况和关键蛋白活化情况。研究结果:研究一的结果为:1.急性力竭运动中血乳酸浓度的变化情况:递增跑台运动开始的前60min,血乳酸浓度处于较低水平;而在持续90min时,出现大幅的提升并保持在较高的平台水平。2.急性力竭运动中血浆NETs的释放情况:血浆中MPO-DNA复合物在力竭运动过程中呈逐步抑制的趋势,运动后3小时未见恢复。3.急性力竭运动后循环中性粒细胞体外释放NETs的能力:无论是无刺激还是100nM PMA刺激下,急性力竭运动后小鼠外周血中性粒细胞释放NETs的能力均显着低于对照组。4.力竭运动中和运动后即刻血乳酸浓度和血浆NETs释放的相关性:血浆MPO-DNA复合物与血乳酸呈现显着的负性相关关系。5.体外不同浓度乳酸刺激中性粒细胞释放NETs的情况:在10、15和20mM乳酸结合100nM PMA刺激下的中性粒细胞释放NETs的能力显着低于对照组。6.乳酸抑制NETs释放可能的机制:在100nM PMA刺激下,随着乳酸刺激浓度的上升,中性粒细胞胞内ROS的表达量呈现明显下降的趋势。研究二的结果为:1.肺组织炎症反应情况:LPS组较CON组更多中性粒细胞和M1型肺泡巨噬细胞的浸润,肺泡灌洗液中促炎症细胞因子显着上升;EXE+LPS组上述炎症反应较LPS组显着减轻。2.肺组织中NETs释放的情况:LPS组较CON组肺内更多NETs的释放,EXE+LPS组和DNase+LPS组肺内NETs的表达较LPS组显着减少。3.有氧运动缓解ALI气道炎症可能的机制:LPS组肺泡巨噬细胞ERK、JNK、p38和NF-κB蛋白磷酸化水平均显着高于CON组;运动组和DNase组上述蛋白磷酸化水平均显着低于LPS组。4.NETs对MH-S细胞极化的作用和机制:NETs在刺激MH-S细胞发生M1型极化的早期,ERK蛋白最先活化,而在刺激的后期,NF-κB蛋白才出现活化效应。研究结论:1.研究一结论:急性力竭运动中血乳酸的积累使小鼠外周循环血NETs释放的能力受到抑制;细胞外的强乳酸环境可以抑制中性粒细胞依赖ROS途径释放NETs。2.研究二结论:规律有氧运动可通过抑制气道NETs的过多释放,减少肺泡巨噬细胞M1型极化,从而减轻气道炎症反应;有氧运动减轻ALI气道炎症反应是通过抑制ERK和NF-κB相关信号通路实现的。
二、活性氧和活性氮在急性肺损伤中的研究进展（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、活性氧和活性氮在急性肺损伤中的研究进展（论文提纲范文）
（1）扶芳藤提取物及主要活性成分甜醇对LPS诱导小鼠急性肺损伤的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 中药扶芳藤提取物、主要活性成分以及各萃取部位对炎症反应的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 扶芳藤提取物对LPS所致小鼠急性肺损伤的影响 |
| 2.2 MTT法测定扶芳藤提取物对RAW264.7细胞活力的影响 |
| 2.3 Griess法检测扶芳藤提取物对LPS诱导RAW264.7细胞分泌NO的影响 |
| 2.4 ELISA法检测细胞上清液中TNF-α、IL-6炎性因子分泌的影响 |
| 2.5 HPLC法测定正丁醇提取物的主要活性成分及含量 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分 药扶芳藤主要活性成分甜醇对LPS诱导RAW264.7细胞的影响及机制探究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 甜醇对RAW264.7细胞活力的影响 |
| 2.2 醇对LPS诱导RAW264.7细胞分泌NO的影响 |
| 2.3 甜醇对LPS诱导RAW264.7细胞分泌TNF-α和IL-6的影响 |
| 2.4 醇对LPS诱导的RAW264.7细胞TLR4、Myd88、TRIF、NF-κB p65、COX-2、iNOs、IL-6、IL-1β和TNF-α RNA表达的影响 |
| 2.5 甜醇对LPS诱导RAW264.7细胞TLR4、Myd88、TRIF、NF-κB p65、蛋白表达的影响 |
| 2.6 甜醇对LPS诱导RAW264.7细胞NF-κB p65核转位的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第三部分 中药扶芳藤主要活性成分甜醇对LPS诱导的A549细胞的影响及机制的探究 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 甜醇对A549 细胞活力的影响 |
| 2.2 醇对LPS诱导A549细胞分泌NO的影响 |
| 2.3 甜醇对LPS诱导A549细胞TLR4、Myd88、TRIF、NF-κB p65、COX-2、iNOs、IL-6、IL-1β和TNF-α RNA表达的影响 |
| 2.4 甜醇对LPS诱导A549细胞TLR4、Myd88、TRIF、NF-κB p65蛋白表达的影响 |
| 2.5 甜醇对LPS诱导A549 细胞NF-κBp65核转位的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第四部分 中药扶芳藤主要活性成分甜醇对LPS诱导的小鼠急性肺损伤的抗炎作用及其作用机制探究 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 甜醇对LPS诱导的急性肺损伤小鼠肺湿质量/干质量比值的影响 |
| 2.2 甜醇对LPS诱导的急性肺损伤小鼠肺匀浆中IL-1β、TNF-α和IL-6含量的影响 |
| 2.3 甜醇对LPS诱导急性肺损伤小鼠的肺组织病理学影响的影响 |
| 2.4 甜醇对LPS诱导急性肺损伤小鼠BALF中总蛋白浓度和细胞渗出数的影响 |
| 2.5 甜醇对肺组织细胞中的TLR4、Myd88、TRIF、NF-κB p65蛋白表达的影响 |
| 2.6 甜醇对肺组织细胞NF-κB p65核转位的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 综述 炎症及其机制与急性肺损伤的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（2）MiR-21通过调控PDCD4/JNK/c-Jun信号通路促进糖尿病肺损伤的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 第1章 绪论 |
| 第2章 文献综述 |
| 2.1 间质性肺疾病概述 |
| 2.2 糖尿病相关间质性肺疾病的研究进展 |
| 2.3 糖尿病相关间质性肺疾病的可能发生机制 |
| 2.4 miRNAs/miR-21在肺纤维化发生及发展中的研究进展 |
| 2.4.1 miRNAs与肺纤维化 |
| 2.4.2 miR-21在肺纤维化发生和发展中的作用 |
| 2.5 PDCD4在疾病发生发展中的研究进展 |
| 2.5.1 PDCD4的简介 |
| 2.5.2 PDCD4的上游调控因子 |
| 2.5.3 PDCD4的下游信号转导通路 |
| 2.5.4 PDCD4与疾病 |
| 2.6 JNK在疾病发生发展中的研究进展 |
| 2.6.1 JNK简介 |
| 2.6.2 JNK活化与疾病 |
| 第3章 JNK抑制剂对糖尿病小鼠肺损伤及miR-21表达水平的影响 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 实验仪器 |
| 3.1.3 实验试剂 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 动物模型的建立 |
| 3.2.2 H&E及Masson染色 |
| 3.2.3 蛋白印迹 |
| 3.2.4 实时荧光定量PCR |
| 3.3 统计学分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 JNK抑制剂对糖尿病小鼠体重和血糖的影响 |
| 3.4.2 JNK抑制剂对糖尿病小鼠肺组织炎症的影响 |
| 3.4.3 JNK抑制剂对糖尿病小鼠肺组织纤维化程度的影响 |
| 3.4.4 JNK抑制剂对糖尿病小鼠肺组织氧化-抗氧化平衡的影响 |
| 3.4.5 JNK抑制剂对糖尿病小鼠肺组织Nrf2、HO1和NQO1等因子的影响 |
| 3.4.6 JNK抑制剂对糖尿病小鼠肺组织JNK、p-JNK和 c-Jun表达水平的影响 |
| 3.4.7 JNK抑制剂对糖尿病小鼠肺组织miR-21表达水平的影响 |
| 3.4.8 JNK抑制剂对糖尿病小鼠肺组织PDCD4表达的影响 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 结论 |
| 第4章 JNK基因敲除对糖尿病小鼠肺损伤及miR-21表达水平的影响 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 实验动物 |
| 4.1.2 实验仪器 |
| 4.1.3 实验试剂 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 动物模型的建立 |
| 4.2.2 Jnk1 敲除小鼠的鉴定 |
| 4.2.3 H&E及Masson染色 |
| 4.2.4 蛋白印迹 |
| 4.2.5 实时荧光定量PCR |
| 4.3 统计学分析 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 Jnk1敲除小鼠的鉴定 |
| 4.4.2 Jnk1敲除对糖尿病小鼠体重和血糖的影响 |
| 4.4.3 Jnk1敲除对糖尿病小鼠肺组织炎症的影响 |
| 4.4.4 Jnk1敲除对糖尿病小鼠肺组织纤维化的影响 |
| 4.4.5 Jnk1敲除对糖尿病小鼠肺组织氧化-抗氧化平衡的影响 |
| 4.4.6 Jnk1敲除对糖尿病小鼠肺组织PDCD4/JNK信号通路和miR-21的表达情况的影响 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 结论 |
| 第5章 抑制miR-21 对糖尿病小鼠肺损伤及PDCD4/JNK信号通路的影响 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.1.1 实验动物 |
| 5.1.2 实验仪器与试剂 |
| 5.1.3 主要实验试剂 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 动物模型的建立 |
| 5.2.2 H&E及Masson染色 |
| 5.2.3 蛋白印迹 |
| 5.2.4 实时荧光定量PCR |
| 5.3 统计学分析 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.4.1 抑制miR-21对糖尿病小鼠肺组织炎症的影响 |
| 5.4.2 抑制miR-21对糖尿病小鼠肺组织纤维化的影响 |
| 5.4.3 抑制miR-21对糖尿病小鼠肺组织PDCD4的影响 |
| 5.4.4 抑制miR-21对糖尿病小鼠肺组织JNK和p-JNK的影响 |
| 5.5 讨论 |
| 5.5.1 miR-21与糖尿病肺损伤的关系 |
| 5.5.2 miR-21对PDCD4/JNK信号通路的调节作用 |
| 5.6 结论 |
| 第6章 结论及创新点 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 创新点 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在读期间发表的科研成果 |
| 致谢 |
（3）雷帕霉素通过lncRNA-LOC102553434介导细胞焦亡途径调控肢体缺血再灌注肺损伤的功能及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 引言 |
| 1、肢体缺血再灌注急性肺损伤概述 |
| 2、炎症小体的作用机制 |
| 3、细胞焦亡参与ALI发病过程 |
| 4、LncRNA对细胞焦亡和ALI的影响 |
| 5、雷帕霉素(Rapamycin,RAPA)对疾病的影响 |
| 6、本课题研究目的及内容 |
| 第一部分 RAPA通过抑制细胞焦亡保护LIR诱导的ALI |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验步骤 |
| 3 结果 |
| 3.1 RAPA缓解LIR诱导的ALI |
| 3.2 RAPA在 ALI大鼠中发挥抗氧化作用 |
| 3.3 RAPA通过抑制细胞焦亡保护LIR诱导的ALI |
| 3.4 RAPA减轻LIR诱导的炎症 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 大鼠LIR肺组织转录组测序分析 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验步骤 |
| 3 结果 |
| 3.1 数据质量评估与比对 |
| 3.2 Clean reads的基因结构分析和染色体位置分布 |
| 3.3 差异表达的lncRNA和 mRNA |
| 3.4 差异表达mRNA和 lncRNA功能富集分析 |
| 3.5 lncRNA-miRNA-mRNA的 ceRNA分析结果 |
| 3.6 候选lnRNA的 qRT-PCR验证 |
| 3.7 lncRNA-miRNA-mRNA共表达网络 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分 LOC102553434 在肺泡上皮细胞损伤中功能研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 RAPA保护肺泡上皮细胞免受LPS损伤 |
| 3.2 RAPA调控LOC102553434、rno-miR-674-5p和 MMP9 的表达 |
| 3.3 干扰LOC102553434 恢复LPS损伤的肺泡上皮细胞的增殖能力 |
| 3.4 LOC102553434 干扰抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞焦亡和MMP9 的表达 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 全文总结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 肢体缺血再灌注急性肺损伤概述 |
| 参考文献 |
（4）金丝桃苷对PM2.5诱导的气道损伤及COPD急性加重的保护作用和机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩写词表 |
| 引言 |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 大气污染的现状及健康危害 |
| 1.1.1 大气污染的现状 |
| 1.1.2 大气污染对健康的危害 |
| 1.1.3 PM2.5对呼吸系统疾病的影响 |
| 1.1.4 PM2.5对慢性阻塞性肺疾病的影响 |
| 1.1.5 PM2.5对支气管哮喘的影响 |
| 1.1.6 PM2.5对肺纤维化的影响 |
| 1.1.7 PM2.5对肺癌的影响 |
| 1.2 PM2.5致呼吸系统损伤的机制 |
| 1.2.1 氧化应激 |
| 1.2.2 炎症机制 |
| 1.2.3 表观遗传机制 |
| 1.2.4 细胞自噬 |
| 1.2.5 细胞凋亡 |
| 1.3 金丝桃苷的药理学研究进展 |
| 1.3.1 金丝桃苷的化学结构及理化性质 |
| 1.4 金丝桃苷现代药理学研究概况 |
| 1.4.1 抗炎作用 |
| 1.4.2 抗氧化作用 |
| 1.4.3 抗肿瘤作用 |
| 1.4.4 肾脏保护作用 |
| 1.4.5 调节自噬相关的保护作用 |
| 第2章 PM2.5可以过度激活自噬诱导BEAS-2B细胞凋亡及金丝桃苷通过调节自噬对PM2.5诱导BEAS-2B细胞损伤发挥保护作用 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 实验细胞 |
| 2.1.2 仪器 |
| 2.1.3 药品和试剂 |
| 2.1.4 实验试剂的配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 制备水溶性PM和有机可萃取PM |
| 2.2.3 CCK8 法测定细胞存活率 |
| 2.2.4 Annexin-V/PI法检测细胞凋亡 |
| 2.2.5 Hoechst/PI染色 |
| 2.2.6 免疫荧光 |
| 2.2.7 Western blotting法检测目的蛋白的表达 |
| 2.2.8 图像和数据统计分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 O-PMs对Beas-2b细胞具有更强的毒性作用 |
| 2.3.2 O-PMs可以过度激活自噬 |
| 2.3.3 O-PMs可以引起促凋亡蛋白的激活 |
| 2.3.4 O-PMs可以引起AMPK/mTOR通路的激活 |
| 2.3.5 Hyp明显改善O-PMs诱导的Beas-2b细胞毒性和形态改变 |
| 2.3.6 Hyp显着抑制O-PMs诱导的Beas-2b细胞凋亡 |
| 2.3.7 Hyp抑制了O-PMs诱导的Beas-2b细胞凋亡通路相关蛋白的表达 |
| 2.3.8 Hyp抑制O-PMs诱导的Beas-2b细胞中自噬小体的形成 |
| 2.3.9 Hyp抑制了O-PMs诱导的Beas-2b细胞中自噬相关蛋白表达和AMPK/mTOR通路的激活 |
| 2.3.10 自噬抑制剂(3-MA)和Hyp减少O-PMs诱导的细胞凋亡(Hoechst 33342/PI染色) |
| 2.3.11 自噬抑制剂(3-MA)和Hyp抑制O-PMs诱导的LC3Ⅱ表达 |
| 2.3.12 3-MA增强Hyp对O-PMs诱导的自噬相关蛋白表达的抑制作用 |
| 2.3.13 3-MA增强Hyp对O-PMs诱导的凋亡相关蛋白表达的抑制作用 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第3章 金丝桃苷通过AMPK/MTOR调控自噬减少BEAS-2B细胞凋亡 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 实验细胞 |
| 3.1.2 仪器 |
| 3.1.3 药品和试剂 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 细胞培养 |
| 3.2.2 Western blotting法检测目的蛋白的表达 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 CC增强金丝桃苷对AMPK/mTOR通路的调控作用 |
| 3.3.2 CC增强金丝桃苷对自噬相关蛋白的抑制作用 |
| 3.3.3 CC增强金丝桃苷对凋亡相关蛋白的抑制作用 |
| 3.3.4 AICAR减弱金丝桃苷对AMPK/mTOR通路的调控作用 |
| 3.3.5 AICAR减弱金丝桃苷对自噬相关蛋白的抑制作用 |
| 3.3.6 AICAR减弱金丝桃苷对凋亡相关蛋白的抑制作用 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第4章 金丝桃苷对PM2.5诱导小鼠气道损伤的保护作用及其机制研究 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 实验用仪器 |
| 4.1.2 药品和试剂 |
| 4.1.3 实验试剂的配制 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 实验动物 |
| 4.2.2 PM2.5诱导小鼠肺损伤模型的建立 |
| 4.2.3 支气管肺泡灌洗液(BALF)的收集 |
| 4.2.4 肺组织病理学检查和评分 |
| 4.2.5 支气管肺泡灌洗液中细胞计数的测定 |
| 4.2.6 支气管肺泡灌洗液中细胞因子的测定 |
| 4.2.7 Western Blot检测肺组织蛋白水平 |
| 4.2.8 数据统计与分析 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 Hyp显着抑制PMs诱导小鼠肺损伤中的炎症反应 |
| 4.3.2 Hyp显着抑制PMs诱导小鼠肺损伤的肺组织病理损伤 |
| 4.3.3 Hyp在小鼠肺组织中可以调控AMPK/mTOR通路 |
| 4.3.4 Hyp抑制PMs诱导小鼠肺组织中自噬相关蛋白表达 |
| 4.3.5 Hyp抑制PMs诱导小鼠肺组织中凋亡相关蛋白表达 |
| 4.3.6 Hyp通过AMPK抑制PMs诱导小鼠肺损伤的炎症反应 |
| 4.3.7 Hyp通过AMPK抑制PMs诱导小鼠肺组织病理损伤 |
| 4.3.8 PMs诱导小鼠肺损伤中Hyp通过AMPK/mTOR调控LC3表达 |
| 4.3.9 Hyp可以通过AMPK抑制PMs诱导小鼠肺损伤中LC3和caspase-3水平 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第5章 金丝桃苷对PM2.5诱导COPD肺损伤加重的保护作用及其机制研究 |
| 5.1 材料 |
| 5.1.1 实验用仪器 |
| 5.1.2 药品和试剂 |
| 5.1.3 实验试剂的配制 |
| 5.2 方法 |
| 5.2.1 实验动物 |
| 5.2.2 COPD小鼠模型的建立 |
| 5.2.3 支气管肺泡灌洗液(BALF)的收集 |
| 5.2.4 肺组织病理学检查和评分 |
| 5.2.5 支气管肺泡灌洗液中细胞计数的测定 |
| 5.2.6 支气管肺泡灌洗液中细胞因子的测定 |
| 5.2.7 Western Blot检测肺组织蛋白水平 |
| 5.2.8 数据统计与分析 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 金丝桃苷显着抑制PM2.5诱导COPD模型肺损伤炎症反应加重 |
| 5.3.2 金丝桃苷显着缓解PM2.5诱导COPD模型肺损伤加重的肺组织病理学损伤 |
| 5.3.3 金丝桃苷显着抑制PM2.5诱导COPD模型肺损伤加重的气道粘液分泌增多 |
| 5.3.4 金丝桃苷显着抑制PM2.5诱导COPD肺损伤加重模型中NF-κB通路激活 |
| 5.3.5 金丝桃苷显着抑制PM2.5诱导COPD肺损伤加重模型中NLRP3 炎症小体激活 |
| 5.3.6 金丝桃苷显着抑制PM2.5诱导COPD肺损伤加剧模型中PM2.5诱导的自噬蛋白表达 |
| 5.3.7 金丝桃苷显着抑制PM2.5诱导COPD模型肺损伤加重中凋亡蛋白表达 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 第6章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（5）8-OHdG、SOD在溃疡性结肠炎患者血清中的水平及意义（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 氧化/抗氧化在溃疡性结肠炎发病过程中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（6）双调蛋白减轻与ARDS并发急性肝损伤的作用和机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要英文缩略词表 |
| 一、引言 |
| 二、材料与方法 |
| 1.材料 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 试剂制备 |
| 2.动物实验方法 |
| 2.1 实验动物选择 |
| 2.2 动物模型的建立 |
| 2.3 取材及标本处理 |
| 2.4 组织形态学检测 |
| 2.5 小鼠肺损伤、肝损伤评分 |
| 2.6 BCA法检测蛋白浓度 |
| 2.7 酶联免疫吸附剂测定(ELISA) |
| 2.8 血清ALT、AST、LDH测定 |
| 2.9 蛋白免疫印迹法(Western Blot) |
| 3.统计学方法 |
| 三、结果 |
| 1.ARDS后并发了急性肝损伤 |
| 1.1 ARDS模型建立 |
| 1.2 ARDS发生后小鼠并发肝脏损伤 |
| 2.TNF-α是介导ARDS发生后并发肝损伤的关键因子 |
| 2.1 小鼠ARDS发生后,体内TNF-α的变化情况 |
| 2.2 使用TNF-α抑制剂依那西普(Etanercept,ETA)阻断TNF-α后,肝损伤程度明显减轻 |
| 3.双调蛋白Areg能够减轻TNF-α导致的肺损伤,也能减轻由TNF-α介导的肝损伤 |
| 3.1 Areg能够减轻TNF-α导致的小鼠肺损伤 |
| 3.2 Areg能够减轻由TNF-α介导的肝损伤 |
| 4.Areg激活EGFR信号通路,抑制TNF-α介导的肝细胞凋亡,减轻肝损伤 |
| 4.1 Areg能够促进EGFR下游信号分子的蛋白表达 |
| 4.2 Areg能够减轻TNF-α介导的肝细胞凋亡 |
| 四、讨论 |
| 五、结论 |
| 六、参考文献 |
| 文献综述 肝损伤与肺损伤相互影响的机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 攻读硕士研究生期间的科研成果 |
| 致谢 |
（7）丙泊酚通过调节Nrf2/NLRP3信号通路减轻呼吸机相关性肺损伤的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 第一章 丙泊酚基于Nrf2/NLRP3信号通路减轻呼吸机相关性肺损伤(VILI)的机制研究 |
| 第一节 实验材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 主要实验仪器和耗材 |
| 1.1.3 主要实验试剂 |
| 1.1.4 主要试剂的配制 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 动物手术实验与分组 |
| 1.2.2 检测指标与方法 |
| 1.2.3 相关实验方法与步骤 |
| 1.3 统计学分析 |
| 第二节 结果 |
| 2.1 丙泊酚可改善呼吸机相关性肺损伤 |
| 2.2 丙泊酚可缓解机械通气引起的肺部炎症 |
| 2.3 丙泊酚上调VILI中Nrf2的表达和下调NLRP3的表达 |
| 2.4 Nrf2可抑制VILI小鼠肺组织中的促炎因子 |
| 2.5 NLRP3通过促进炎症作用抑制Nrf2对肺损伤的保护 |
| 第三节 讨论和结论 |
| 第四节 全文总结和展望 |
| 参考文献 |
| 图片和图表 |
| 第二章 综述 围手术期输血相关急性肺损伤的研究进展 |
| References |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 英文文章1 |
| 英文文章2 |
| 致谢 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（8）海藻硒多糖对脓毒症老年大鼠肺损伤保护作用及机制探讨（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 脓毒症研究现状 |
| 1.2 脓毒症诱导的急性肺损伤 |
| 1.2.1 急性肺损伤发病机制 |
| 1.2.2 急性肺损伤治疗现状 |
| 1.3 NLRP3 炎症小体概述 |
| 1.4 NLRP3 炎症小体与急性肺损伤 |
| 1.5 海藻硒多糖概述 |
| 第二章 实验材料与方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 主要仪器 |
| 2.3 主要试剂 |
| 2.4 主要试剂配制 |
| 2.5 实验方法 |
| 2.5.1 实验动物分组 |
| 2.5.2 实验动物模型制备 |
| 2.5.3 大鼠生存时间及状态观察 |
| 2.5.4 支气管肺泡灌洗液的制备 |
| 2.5.5 肺组织病理学检查 |
| 2.5.6 肺组织W/D值测定 |
| 2.5.7 血清及肺泡灌洗液炎症因子ELISA测定 |
| 2.5.8 肺组织氧化指标MDA、GSH-PX和 SOD测定 |
| 2.5.9 蛋白印迹分析(Western Bolt) |
| 2.6 统计学分析 |
| 第三章 研究结果 |
| 3.1 脓毒症老年大鼠生存情况 |
| 3.2 肺脏组织病理改变及W/D值 |
| 3.3 血清及肺泡灌洗液细胞因子含量 |
| 3.4 肺组织氧化指标MDA、GSH-PX和 SOD测定 |
| 3.5 肺脏组织NLRP3 炎症小体通路蛋白含量 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 脓毒症模型的选择 |
| 4.2 海藻硒多糖对脓毒症老年大鼠存活时间的影响 |
| 4.3 海藻硒多糖对脓毒症老年大鼠肺组织的影响 |
| 4.4 海藻硒多糖对脓毒症老年大鼠血清和BALF中炎症因子的影响 |
| 4.5 海藻硒多糖对脓毒症老年大鼠肺组织氧化应激的影响 |
| 4.6 海藻硒多糖对脓毒症老年大鼠肺组织中NLRP3 通路蛋白表达的影响 |
| 第五章 结论 |
| 5.1 主要结论 |
| 5.2 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 综述 NLRP3炎症小体激活机制及其在脓毒症中的作用 |
| 参考文献 |
| 在学期间的研究成果 |
| 致谢 |
（9）衣康酸通过抑制NLRP3炎症小体活化和氧化应激减轻小鼠急性肺损伤（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 衣康酸的抗炎抗氧化作用 |
| 参考文献 |
（10）中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）参与调节急性力竭及规律有氧运动相关天然免疫的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文名词缩略表 |
| 1 前言 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.2 研究目的和意义 |
| 1.3 研究思路 |
| 1.4 研究内容 |
| 文献综述 |
| 研究一 急性力竭运动对外周循环NETS释放的作用和机制研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验仪器与试剂 |
| 2.2 实验技术路线图 |
| 2.3 实验方法 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 急性力竭运动过程中血乳酸和IL-6浓度的变化情况 |
| 3.2 急性递增负荷跑台运动中外周循环游离DNA和NETS的释放情况 |
| 3.3 血乳酸浓度与NETS释放水平的相关性分析 |
| 3.4 不同浓度的乳酸对于NETS释放的作用探析 |
| 3.5 乳酸抑制NETS释放的可能机制 |
| 4 分析与讨论 |
| 4.1 急性力竭运动中血乳酸浓度变化情况分析 |
| 4.2 急性力竭运动中CF-DNA和IL-6浓度变化情况分析 |
| 4.3 急性力竭运动中NETS的释放情况及与CF-DNA相关关系分析 |
| 4.4 体外乳酸抑制中性粒细胞释放NETS及其机制分析 |
| 4.5 NETS在运动性免疫抑制中的作用分析 |
| 4.6 运动性免疫抑制最新观点分析 |
| 5 研究小结 |
| 研究二 NETS在有氧运动缓解急性肺损伤中的作用和机制 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验仪器与试剂 |
| 2.2 实验技术路线图 |
| 2.3 实验方法 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 有氧运动缓解LPS诱导的急性肺损伤结果 |
| 3.2 NETS在有氧运动缓解LPS诱导的急性肺损伤中的作用结果 |
| 3.3 有氧运动缓解急性肺损伤的体内机制研究结果 |
| 3.4 NETS体外刺激肺泡巨噬细胞(MH-S) M1型极化的机制研究结果 |
| 4 分析与讨论 |
| 4.1 有氧运动减轻LPS诱导的急性肺损伤气道炎症结果分析 |
| 4.2 NETS在有氧运动减轻LPS诱导的ALI气道炎症中的作用分析 |
| 4.3 MAPK和NF-KB通路关键蛋白参与有氧运动改善ALI结果分析 |
| 4.4 NETS促进肺泡巨噬细胞M1型极化及其机制分析 |
| 5 研究小结 |
| 全文总结 |
| 1 研究结论 |
| 2 研究创新性 |
| 3 研究局限性 |
| 4 研究展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
四、活性氧和活性氮在急性肺损伤中的研究进展（论文参考文献）
- [1]扶芳藤提取物及主要活性成分甜醇对LPS诱导小鼠急性肺损伤的作用及机制研究[D]. 郑璐. 山西医科大学, 2021(01)
- [2]MiR-21通过调控PDCD4/JNK/c-Jun信号通路促进糖尿病肺损伤的机制研究[D]. 赵凤莲. 吉林大学, 2021(01)
- [3]雷帕霉素通过lncRNA-LOC102553434介导细胞焦亡途径调控肢体缺血再灌注肺损伤的功能及机制研究[D]. 黄丹. 南昌大学, 2021(01)
- [4]金丝桃苷对PM2.5诱导的气道损伤及COPD急性加重的保护作用和机制研究[D]. 高云. 吉林大学, 2021(01)
- [5]8-OHdG、SOD在溃疡性结肠炎患者血清中的水平及意义[D]. 胡志云. 河北北方学院, 2021(01)
- [6]双调蛋白减轻与ARDS并发急性肝损伤的作用和机制[D]. 王轶铭. 湖北医药学院, 2021(01)
- [7]丙泊酚通过调节Nrf2/NLRP3信号通路减轻呼吸机相关性肺损伤的机制研究[D]. 阮洪艳. 山东大学, 2021(10)
- [8]海藻硒多糖对脓毒症老年大鼠肺损伤保护作用及机制探讨[D]. 吴俊东. 兰州大学, 2021(12)
- [9]衣康酸通过抑制NLRP3炎症小体活化和氧化应激减轻小鼠急性肺损伤[D]. 谢邱梦. 安徽医科大学, 2021(01)
- [10]中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）参与调节急性力竭及规律有氧运动相关天然免疫的作用及机制研究[D]. 石月. 上海体育学院, 2020(12)